总大肠菌群检验的实验设计

1。

微生物检验一、微生物实验室概况食品微生物实验室主要负责各类微生物项目的检测,主要检测项目有菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、双歧杆菌、罐头商业无菌、致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等）。

微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。

这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。

二、微生物实验室功能分区（一）准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。

室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。

（二）洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等.由于使用过的器皿已被微生物污染,有时还会存在病原微生物。

因此,在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。

室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。

(三）灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

（四）无菌室无菌室一般为4 - 5 平方米、高 2。

5 米的独立小房间(与外间隔离)，专辟于微生物实验室内。

无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室.在微生物工作中,菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。

在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。

1。

无菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。

其基本要求有以下几点：（1）无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。

房间容积不宜过大，以便于空气灭菌.最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜,都应有天花板。

（2）内间应当设拉门，以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的位置上。

（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。

城镇污水处理厂次氯酸钠去除粪大肠菌群的研究摘要：城市污水经过二级处理后，虽然其水质得到很大改善，但水中细菌数量依旧很大，尤其存在着粪大肠菌群等病原菌。

我国《城镇污水处理厂污染物排放标准》（GB 18918-2002）中将粪大肠菌群数列为出水基本控制指标之一。

为保障污水排放水体生态环境的可持续发展，需要对污水进行消毒处理。

次氯酸钠能够有效去除废水中的粪大肠菌群等病原菌，通过次氯酸钠投加量对二级出水消毒效果的影响，分析次氯酸钠的污水处理效益。

关键词：污水处理；粪大肠菌群；次氯酸钠引言：通过次氯酸钠投加量对污水处理厂二级出水中粪大肠菌群去除研究，一方面，能够确保污水排放达到相关要求，维护水生态健康；另一方面，可以避免过度投加造成的资源浪费、运营成本增加和余氯过高造成水生态的污染。

1.次氯酸钠处理污水中粪大肠菌群的优势现如今，城市污水处理普遍成熟，针对废水中粪大肠菌群的消毒方法主要有投加次氯酸钠，投加二氧化氯，紫外消毒，臭氧消毒等【1】。

其中，二氧化氯虽然具有用量少、效果好的优势，但二氧化氯不稳定且具有爆炸性，现场制备易出现氯气中毒的生产事故；紫外消毒虽然杀菌快，无二次污染的风险，但不能持续消毒，很多被紫外线照射后的微生物都具有光复活能力，因此不能完全保障出水排放达标；臭氧作为一种强氧化剂，可以氧化有机物、高效杀菌消毒，但其设备投资高、操作复杂、能耗大、运营成本高，且无持续消毒效果；而次氯酸钠可以在水中水解成次氯酸，继而分解成新生态氧，具有极强的氧化性，可以使细菌、病毒的蛋白质变性，从而达到消毒杀菌的目的【2】，此外次氯酸钠还具有价格低廉、操作简单、管理方便、可持续消毒、不涉及危化品、安全高效等优点，备受污水处理厂的青睐。

2.某污水厂对次氯酸钠浓度降解的研究实验某污水处理厂，原采用向次氯酸钠药剂商购买有效氯为10%的次氯酸钠液体药剂，置于厂内药罐中存放使用。

但是生产人员发现，在水量没有大幅度变化的前提下，每批置于药罐存放一段时间的次氯酸钠投加量都明显高于第一天送达的次氯酸钠的投加量，才能确保出水粪大肠菌群达到该厂一级A（小于等于1000个/L）的排放标准。

水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较黄晓容【摘要】2015年10月国家环境保护部发布了行业标准《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》（HJ755-2015）（以下简称纸片快速法）。

之前环境监测部门一直在使用国家环境保护部于2007年3月发布的行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）（以下简称多管发酵法）。

纸片快速法操作简单快速,在标准中对采样瓶的处理、样品的保存、水样的稀释接种等做出了详细的规定,而多管发酵法中没有相应规定。

本文对两个标准的异同点进行比较,提出了将这两种方法的优点应用于实际环境监测工作中。

【期刊名称】《生物技术世界》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】2页(P33-33,35)【关键词】粪大肠菌群;多管发酵法;纸片快速法【作者】黄晓容【作者单位】重庆市黔江区环境监测中心站，重庆409000【正文语种】中文【中图分类】X8我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过Ⅴ类水质标准数万倍［2］。

我国粪便微生物指标的评价还处于起步阶段，水质评价多以常规理化指标为主，对微生物指标的评价有待进一步加强。

目前水中粪大肠杆菌群检测方法主要有传统的滤膜法及多管发酵法，并且已经列入环保行业标准方法（HJ/T347-2007），此两种传统方法被国内环境监测部门广泛采用，但上述方法操作时间需2-5天，步骤较为繁琐，需验证试验。

多管发酵法每100毫升水样中最低检出限为2个粪大肠菌群［1］。

冯青英等人对传统的多管发酵法进行了优化，将水样接种至乳糖蛋白胨培养液后，在44.5℃±0.5℃培养箱中培养24h后直接读取结果［3］。

多管发酵法不受浊度的影响，可以对浊度较大的污水水样进行监测。

纸片法培养时间对阳性管率有明显影响，适用于测定受粪便污染程度较轻的水体［4］。

多管发酵法和纸片快速法均为行业标准，对粪大肠菌群的检测做出了详细的规定，现就两个标准中的异同做以下探讨。

抑菌效果的检测方法：将抗生素菌株进行平板划线分离，长出单菌落后，在421房间的超净工作台上找到直径7mm的打孔器（只有一个，请大家不要拿到其它地方去！），用该打孔器在单菌落上打取菌落块，若菌落块卡在打孔器内，请用接种针挑出来，将菌落块以菌落面向上的方式放置在已经涂布有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的平板上，培养48小时后测量抑菌圈的直径。

发帖位置: Tuesday, March 25, 2014微生物学实验安排及自主实验要求第6周：1.口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用；第7周：2.培养基的制备；3.高压蒸汽灭菌；第8周：4.土壤中微生物的分离；第9周：5.微生物菌落的观察；6. 微生物的分离纯化与菌种保存第10周：7.细菌的革兰氏染色；8.放线菌装片的制作及观察；第11周：9.酵母菌装片的制作及观察；10.霉菌装片的制作及观察；第12周：11.酸奶的制作第13周：12.水中大肠菌群的检测；第12-14周：自主实验——抗生素产生菌的分离纯化及抗菌活性测定；第15周：实验考核（无菌操作、制片、染色、油镜观察）；各组提交自主实验项目总结报告，要求按照正式发表的科研论文进行写作；自主实验总结汇报。

要求：1.以一个班为单位，3~4人一组（即每张桌子上的同学分成两个自主实验小组2.禁止选择以青霉为筛选目标的实验方案，各组自己查阅相关资料然后设计实验方案主要包括样品的采集、所用的培养基配方、分离方法、鉴定的方法、活性测定的方法等方面；各组长在第9周上实验课时将纸质实验方案提交给指导教师(实验方案请标明：2012级*班*组+组长姓名+联系电话+组员姓名）发帖位置: Tuesday, March 25, 2014抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测1. 分离纯化获得1株以上具有明显抑制测试菌生长作用的产抗生素菌株，测试菌建议选用：金黄色葡萄球菌或大肠杆菌，只要对任何一种测试菌有比较明显的抑菌圈就可以了。

2. 对上述菌株进行初步鉴定，包括菌体形态、大小、菌落形态等、以及一些本实验室可以完成的生理生化反应，在此基础上对上述菌株鉴定到属名。

南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的：1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2．了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。

但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。

我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。

细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。

然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。

三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

四、实验步骤：1．水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。

为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。

条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。

（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。

简述食品中大肠杆菌的快速检测方法相关研究进展摘要：大肠菌群的快速检测是食品、药品卫生监督检验迫切需求，本文从免疫学技术，酶学的技术，分子生物学技术，传统检测方法改进技术，物理化学技术，其它技术方面对大肠菌群快速检测方法研究进展进行综述，并对其存在问题及应用前景进行分析。

这些方法各有优缺点，免疫学技术和分子生物学技术灵敏度高，但假阳性率高，无法区分死活菌；酶学的技术和物理化学技术特异性好，省时省力，但这些方法成本较高，不适合基层实验室使用；传统检测方法改进技术结果准确，但费时费力。

因此，仍需要发展一种新的方法解决所存在的问题。

要真正实现大肠菌群的快速检测还需要不断进行科学研究，以寻找一种能够真正实现成本低、灵敏度好、准确性高并且检测速度快的更合适的方法。

关键词：食品；大肠菌群；快速检测；研究1引言大肠菌群为一群在37C、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌的统称。

这些细菌多存在于温血动物粪便中，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然存在的主要原因。

因此，大肠菌群被国际上公认为检测各种水质、医药及食品在流行病学上安全性的指示菌。

如果检测到大肠菌群呈阳性结果，那么便表明食品、药品或者水质存在大肠菌群，已经被粪便污染。

大肠菌群的数量与受到的污染程度成正比，数量越多，受污染越严重。

目前我国国家标准主要用多管发酵法来检测大肠菌群多管发酵法作为一种传统的检测方法已沿用多年，其准确性、权威性无可质疑，但该方法费时费力，而且检测所需的费用较高，已无法满足人们对食品、药品安全现场监测的要求，因此，现在食品、药品卫生监督检验迫切需要一种更加有效、快速的大肠菌群检测方法。

近年来，世界各国针对大肠菌群的快速、定量检测技术都进行了专门的研究，本文综述了大肠菌群快速检测技术的研究进展，并对其存在问题及应用前景进行分析。

2大肠菌群主要的快速检测方法2.1免疫学技术免疫学方法检测原理是依据抗原和抗体特异性反应。

《食品微生物检验技术》课程标准课程编号：SP3301适用专业：食品药品监督管理教学模式：“工学交替，教、学、做一体化”计划学时：64一、课程性质《食品微生物检验技术》是食品药品监督管理专业的核心专业课程。

作为一门工学结合的学习领域课程，《食品微生物检验技术》在食品专业群的课程体系中占有重要地位，同时也是国家食品检验职业资格考核的三大内容之一。

先修课：《无机化学》、《有机化学》、《食品生物化学》后续课：《食品安全与质量控制》二、课程目标结合食品检验工的国家职业标准，《食品微生物检验技术》从三个方面培养学生的职业能力和职业素质。

经过学习，学生应具备代表性样品采取、微生物检验操作与分析和质量控制的能力；为通过职业资格考试储备知识和技能；对实习或毕业后从事食品微生物检验工作所需的职业技能进行了充分的熟练，可胜任乳品、肉品、粮油或酿造食品等多种食品原料至成品的微生物检测工作。

（一）知识目标认识微生物的类群与形态，理解微生物营养与生长，了解微生物对食品、食品工业及人体健康的影响，了解相关国家标准，理解食品微生物检验的基础知识。

（二）能力目标能设计微生物检验方案，掌握微生物检验的镜检、染色、灭菌和消毒、培养基制备、接种、培养分离、纯化与保藏等基本操作技能，能完成常规食品微生物检验项目。

（三）素质目标增强食品质量与安全观念，形成严谨求实的科学态度，养成爱岗敬业的职业道德，保持互助合作的团队精神，具有可持续发展能力。

三、课程设计（一）课程设计的基本理念1. 坚持以高职教育培养目标为依据，遵循“结合理论联系实际，以应知、应会”的原则，以培养锻炼职业技能为重点。

2. 注重培养学生的专业思维能力和专业实践能力。

3. 把创新素质的培养贯穿于教学中。

采用行之有效的教学方法，注重发展学生专业思维和专业应用能力。

4. 、培养学生分析问题、解决问题的能力。

（二）课程的设计思路本课程从高技能人才的培养要求出发，以强化技术应用能力培养为主线，构建理论学体系和实践教学体系。

1.微生物检验一、微生物实验室概况食品微生物实验室主要负责各类微生物项目的检测，主要检测项目有菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、双歧杆菌、罐头商业无菌、致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等）。

微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。

这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。

二、微生物实验室功能分区（一）准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。

室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。

（二）洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。

由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。

因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。

室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。

（三）灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

（四）无菌室无菌室一般为4 - 5 平方米、高 2.5 米的独立小房间(与外间隔离)，专辟于微生物实验室内。

无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。

在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。

在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。

1. 无菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。

其基本要求有以下几点：（1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。

房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。

最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。

（2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。

（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。

无菌工艺模拟试验指南概要无菌工艺模拟试验指南概要概述：无菌工艺模拟试验是一种常用的评估无菌制剂生产工艺的方法。

它通过模拟实际生产过程中的各种参数和条件，确定工艺的有效性和可重复性，并评估其对微生物污染的控制能力。

本文将简要介绍无菌工艺模拟试验的指南，包括试验设计、操作步骤和数据分析等内容。

一、试验设计1. 确定试验目的：明确评估的是哪个无菌工艺流程，并明确所要解决的问题或验证的假设。

2. 确定试验参数：根据实际生产工艺，确定需要模拟的各种参数和条件，例如温度、湿度、压力等。

3. 设计试验方案：根据所选参数，设计试验方案，包括样品数量、试验时间、无菌技术、培养基选择等。

二、操作步骤1. 准备样品和试验环境：获取适当数量的无菌制剂样品，并准备清洁、无菌的实验环境。

2. 模拟生产过程：按照设计的试验方案，模拟实际的生产工艺流程，包括无菌装瓶、灭菌、验收等步骤。

3. 采样和分析：在不同的试验时间点，取样进行微生物检测，包括菌落总数、大肠菌群、真菌等。

4. 数据记录和分析：记录采样数据，并进行数据分析，评估无菌工艺的有效性和可重复性。

三、数据分析1. 菌落总数统计：统计不同时间点的菌落总数，并根据合适的统计方法进行数据分析。

2. 菌种检测结果：分析不同菌种的检测结果，评估无菌工艺对不同微生物污染的控制能力。

3. 结果解释和讨论：根据数据分析结果，解释试验结果，并结合实际生产情况进行讨论和推论。

四、观点和理解无菌工艺模拟试验是无菌制剂生产中非常重要的一部分，它可以帮助评估工艺的可行性，并指导生产过程中的控制策略。

通过合理设计试验方案、严格操作和详细数据分析，可以得出准确的评估结果，并为工艺改进提供科学依据。

无菌工艺模拟试验也有助于减少生产过程中的微生物污染风险，提高产品质量和安全性。

无菌工艺模拟试验指南是一个有价值的工具，有助于评估和改进无菌制剂生产工艺。

通过合理的设计、执行和分析，可以获得准确、可靠的评估结果，并为工艺优化提供科学依据，从而提高产品质量和保证患者的安全性。

设计酒精浓度与消毒效果的实验
一、实施方案
1、在保证不污染车间产品的情况下，配置不同浓度消毒水对金葡、大肠杆菌进行杀灭实验。

二、实验报告
1、联系化验室准备金葡和大肠杆菌菌种以及蒸馏水。

2、拿回菌种后将菌种按照100倍和1000倍稀释。

3、配置酒精浓度75％、80％，消毒水浓度80ppm、130ppm和250ppm各一份。

4、将配置后的消毒水按照1：1的比例倒入菌液中杀菌，酒精按照1：2的比例倒入菌液中杀菌。

5、将原菌液和杀菌后的混合液送入化验室化验大肠杆菌和金葡。

三、取得成果(效益)
1、高浓度的消毒水和车间现在配置的75％、80％的酒精均能全部杀灭大肠杆菌和金葡，低浓度的消毒水80ppm无法有效杀灭大肠菌群和金葡。

四、实验结论
现在车间配置的手部消毒水的浓度无法有效杀灭大肠杆菌和金葡，工
人进厕所后消毒用的消毒水不能配置50－100ppm，应配置100－150ppm比较合适，车间对大肠杆菌和金葡控制不能仅仅依靠工人手部和围裙消毒，应保证加工过程中的产品和进车间后的工人完全没有大肠杆菌和金葡菌。

第1篇一、实验目的1. 掌握乳制品中常见微生物的检测方法。

2. 了解PCR技术在微生物检测中的应用。

3. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理本实验采用PCR技术检测乳制品中的沙门氏菌。

PCR（聚合酶链反应）是一种在体外条件下，模拟DNA复制过程的技术，通过扩增特定的DNA片段，实现对目标微生物的检测。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 乳制品样品- 沙门氏菌DNA提取试剂盒- PCR试剂- DNA模板2. 实验仪器：- PCR仪- 紫外可见分光光度计- 电泳仪- 凝胶成像系统四、实验方法1. 样品处理：- 取适量乳制品样品，加入无菌生理盐水，振荡混匀。

- 重复以上步骤，进行10倍梯度稀释。

2. DNA提取：- 按照试剂盒说明书提取乳制品样品中的DNA。

3. PCR反应：- 设计针对沙门氏菌特异性基因的引物。

- 将提取的DNA模板与PCR试剂混合，进行PCR反应。

4. 电泳检测：- 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。

- 观察电泳结果，分析目标微生物的存在情况。

五、实验结果与分析1. DNA提取：- 成功提取出乳制品样品中的DNA。

2. PCR反应：- 扩增出目标基因片段，大小约为500bp。

3. 电泳检测：- 在琼脂糖凝胶上观察到目标基因片段，与阳性对照一致。

六、实验结论本实验通过PCR技术成功检测出乳制品中的沙门氏菌。

结果表明，该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于乳制品中沙门氏菌的检测。

七、实验讨论1. 本实验采用PCR技术检测乳制品中的沙门氏菌，具有以下优点：- 灵敏度高：可检测到极低浓度的目标微生物。

- 特异性强：针对特定基因序列进行扩增，避免了假阳性的产生。

- 操作简便：实验步骤简单，易于掌握。

2. 实验过程中，需要注意以下几点：- 严格无菌操作，避免污染。

- 控制PCR反应条件，确保扩增效果。

- 电泳结果分析时，应结合阳性对照和阴性对照进行判断。

3. 未来研究方向：- 优化PCR反应条件，提高检测灵敏度。

卫生微生物学实验指导（仅供预防医学本科教学使用）姓名年级班级指导老师实验一自来水中指示微生物的检测—菌落总数的测定目的及意义掌握菌落总数实验的基本原理和意义；熟悉水样采集要求，熟悉菌落总数实验的全部过程和具体操作方法；了解无菌操作和避免污染的概念。

根据不同目的，选择有代表性的一种或一类微生物，对检测、研究对象中的该微生物状态进行定性或定量的描述，并赋予其特定的标志意义，这类微生物即所谓的指示微生物。

指示微生物在污水与饮用水处理、环境监测、产品质量控制、消毒灭菌、卫生监督等领域广泛应用。

最常用的为菌落总数和大肠菌群，菌落总数用于评价被检测样品的一般卫生微生物学质量，即微生物污染程度和安全性。

菌落总数是指被检测样品在单位重量（g）、溶剂（ml）、表面积（cm2）或体积（m3）内，所含有的能在某种培养基上经过一定条件培养后生长的微生物菌落总数。

仪器设备和试剂1.仪器设备电子天平、pH计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台。

2.器材和试剂100-1000μl移液器、1000μl吸头、广口旋塞试剂瓶、培养平皿；1.5%硫代硫酸钠溶液、营养琼脂。

实验方法一、样品来源内蒙古医科大学金山校区C座自来水二、实验准备1.配置1.5%硫代硫酸钠溶液2.取400μl 1.5%硫代硫酸钠溶液加入容积为250 ml的蓝盖试剂瓶中，该瓶作为为取样瓶（硫代硫酸钠的作用是中和自来水中的消毒剂）。

3.准备3个洗干净的培养平皿，用报纸包严。

4.配置80ml固体营养琼脂。

5.将上述取样瓶、营养琼脂和培养平皿101.3kPa高压蒸汽灭菌20分钟。

6.灭菌过程中将超净工作台或无菌室打开紫外灯照射30min。

三、样品采集1.先对欲采集样品的水龙头进行消毒，然后将水龙头完全打开，放水5分钟后收集样品，采水量为瓶容量的80%左右。

2.采样后及时做好标记，开始检测。

四、检测步骤1.将水样用力摇20～25次，使微生物充分的分散开来。

2.分别稀释水样10倍、100倍、1000倍与水样原液一起待检。

食品微生物实验室主要负责各类微生物项目的检测，主要检测项目有菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、双歧杆菌、罐头商业无菌、致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等）。

微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成.这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁,便于打扫卫生.微生物实验室选址三级生物安全防护实验室可与其他用途房屋设在一栋建筑物中,但必须自成一区.该区通过隔离门与公共走廊或公共部位相隔。

微生物实验室功能分区平面布局1。

三级生物安全防护实验室的核心区包括实验间及与之相连的缓冲间；缓冲间形成进入实验间的通道。

必须设两道连锁门，当其中一道门打开时，另一道门自动处于关闭状态.如使用电动连锁装置，断电时两道门均必须处于可打开状态。

在缓冲间可进行二次更衣；当实验室的通风系统不设自动控制装置时,缓冲间面积不宜过大,不宜超过实验间面积的八分之一；Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜的安装位置应远离实验间入口，避开工作人员频繁走动的区域，且有利于形成气流由“清洁”区域流向“污染"区域的气流流型。

准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。

室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。

洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。

由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。

因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室.室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等.灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

无菌室无菌室一般为4 —5 平方米、高2.5 米的独立小房间（与外间隔离），专辟于微生物实验室内.无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。

在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染.在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。

四、实习目的《食品安全检测技术实习》是不可缺少的实践性教学环节，是食品科学与工程的必修课。

根据教学大纲要求，通过二周的实习，学生对食品的生物安全性及其控制技术应加深理解，熟悉试样的采集、保存、制备方法，了解常规生物性危害项目，掌握常见分析检测方法及其操作，熟悉有关仪器设备的使用方法，并初步具有分析解决实际遇到的具体问题的能力。

实习中应注重培养和提高动手能力，进一步巩固和深化课堂理论知识，达到理论与实践相辅相成，融会贯通，为今后参加工作奠定一定基础，并通过实习培养学生良好的职业道德观。

五、实习内容、方式和要求（一）实习内容学生自主设计实验，将大肠菌群的定性鉴别方法以及大肠杆菌的鉴定方法整合为常见致病菌的分离及鉴定综合性实验，每组检测一种液体样品，如果汁、牛奶、饮用水、豆浆制品等。

通过这部分内容的实验教学使学生掌握食品的安全评价基本技术方法及基本的实验技能，同时将微生物的三大技术，即无菌操作技术、纯培养技术和计数技术，以及形态学观察和生化鉴定穿插各个环节，着重强调微生物检测的特殊性及规律性。

（二）实习方式开放实验室，提供实验用品，在老师的指导下，学生自主完成样品生物危害性项目的检测。

（三）实习要求1、掌握食品生产过程中的质量控制、突出食品安全检测技术特色及食品生产的特殊性；2、系统性解决食品中存在的某一问题；3、掌握食品中细菌总数的检测、大肠菌群的辨别和大肠杆菌的鉴定、霉菌酵母菌的测定等；4、熟悉常见食品微生物的分离和鉴定技术。

六、实习时间、地点和单位实习时间： 2013-2014年一学期第16-17周实习地点：生物与化学工程系微生物实验室七、指导教师和学生编组名单（一）指导老师吴菲菲、李化强（二）学生分组名单八、实习工作步骤及工作安排（一）实习前准备教师实习前一周写出实习计划（二）实习动员会1、时间：2013年12月9日2、内容：教师重申实习目的、内容和要求，强调实习纪律和安全，说明实习考核和成绩评定办法；（三）实习工作准备1、时间：3天2、内容：（1）学生分组制订详细的实习方案。