总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求lideman

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）
适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。

1.1产品规格
4×100mL；6×60mL；8×50mL；2×100mL
1.2产品组成成分
NaOH 600mol/L，硫酸铜12 mmol/L，酒石酸钾钠32 mmol/L。

2.1 外观
试剂为淡蓝色透明溶液。

2.2 装量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度
A≤0.15（光径1.0cm，波长540nm）。

2.4分析灵敏度
测定57.2g/L被测物时，吸光度变化在0.1631～0.2075范围内。

2.5 准确度
相对偏差应不超过±5%。

2.6 精密度
2.6.1 重复性
变异系数CV＜3%。

2.6.2 批间差
批间相对极差＜3%。

2.7 线性区间
a）（0，100]g/L。

在规定的线性区间内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应不低于0.990。

b）（0，30]g/L区间内，线性绝对偏差应不超过±3g/L；（30，100]g/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性
原装试剂2～8℃避光保存，有效期18个月，有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®总蛋白（TP）比色法测试盒(双缩脲法) Biuret Protein Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K165-S产品规格：100 assays(96 samples)/ 500 assays(480 samples)检测仪器：紫外-可见分光光度计（540 nm）使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、动植物组织样本中的蛋白含量。

检测原理凡分子中含有两个氨基甲酰基(-CONH2)的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称为双缩脲反应,蛋白质分子中有许多肽键(-CONH-)都能起此反应，各种蛋白显色程度基本相同。

测定样本总蛋白浓度：样本背景值较高时，推荐使用考马斯亮蓝法（货号：E-BC-K168-S）；样本蛋白浓度较低时，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。

提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器：紫外-可见分光光度计（540 nm）试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）试剂准备①试剂三从-20℃取出，放在冰上缓慢融化（避免反复冻融），其他试剂平衡至室温。

②规格(100 assays)试剂配制：试剂一工作液的配制：取一瓶试剂一用100 mL双蒸水溶解，2-8℃保存3个月。

试剂二工作液的配制：取一瓶试剂二用200 mL双蒸水溶解，2-8℃避光保存3个月。

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。

1.1产品型号/规格及其划分说明1.2主要组成成分2.1外观2.1.1 外观（液体单试剂）.R应为蓝色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.1.2 外观（液体双试剂）a）R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物；b）R2应为蓝色溶液，无混浊，无未溶解物；c）校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；d）试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量R和校准液的净含量不少于标示值。

R1、R2和校准液的净含量不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度在主波长540nm, 副波长700nm处（光径1cm），试剂空白吸光度A≤0.20。

2.4分析灵敏度测量1g/L的被测物时，吸光度变化△A≥0.0010。

2.5 线性区间在[10，110]g/L线性范围内，线性相关系数r≥0.990。

在[10,20]g/L范围内，绝对偏差不超过±2g/L；在(20,110]g/L范围内，相对偏差不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性重复测定(45±5)g/L、(70±10)g/L和 (100±10)g/L的样品，变异系数CV%≤5%。

2.6.2 批间差相对极差≤5%。

2.7 准确度测定标准物质BW3627-2，测定值与靶值的相对偏差不超过±10%。

2.8 稳定性原包装的试剂盒在（2～8）℃避光保存，有效期为18个月。

试剂盒在规定的储存条件下保存至有效期满后，检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。

总蛋白定量（TP）测试盒 比色法：100管/96样一、测定原理：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA 试剂形成紫色的络合物，562nm 处有最大吸收峰，依据吸光度与浓度成正比，通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。

二、试剂组成及配制：试剂一：粉剂×2 支，稀释液，12.5ml×2 瓶，4℃冷藏密封保存 6 个月。

试剂一应用液的配制：取试剂一粉剂 1 支与试剂一稀释液 1 瓶混匀，溶解完全后4℃待用。

试剂二：250μl×2 支，4℃冷藏密封保存 6 个月。

工作液的配制：按试剂一应用液：试剂二＝50∶1 的比例配制，混匀后待用，用多少配多少。

试剂三：终止剂贮备液20ml×1 瓶，4℃冷藏密封保存 6 个月。

终止剂应用液：取终止剂贮备液用双蒸水5 倍稀释后备用，4℃冷藏。

试剂四：524μg/ml 蛋白标准液0.2ml×1 支。

4℃保存1 个月。

三、样本前处理：详见试剂盒内说明书关于样本处理的说明。

四、操作步骤：空白管标准管测定管双蒸水（μl）20524μg/ml 标准品（μl）20待测样本（μl）20工作液（μl）250 250 250五、计算公式：总蛋白浓度 = 测定OD 值 -空白OD 值 ⨯ 标准品浓度 ⨯样本测试前（μg / ml ）　标准OD 值 -空白OD 值 （524μg / ml ） 稀释倍数漩涡混匀，37℃孵育 30 分钟 终止剂应用液（μl ） 750 750 750 漩涡混匀，静置 5 分钟，562nm 波长，0.5cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

2性能指标
2.1外观
试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，546 nm 波长条件下，吸光度应小于0.3 A。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为70 g/L 时，吸光度变化应不小于0.09 A。

2.5线性范围
试剂盒在（2～120）g/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.9900；
b)当样本浓度不大于67.5 g/L 时，线性绝对偏差应不大于±6.75 g/L；当样本浓度大于
67.5 g/L 时，线性相对偏差应不大于±10.0%。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 3.0％。

2.6.2批间差
相对偏差：R 应不大于 4.5％。

2.7准确度
测定校准品，测定结果与靶值的相对偏差应不大于±10.0%。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在250 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内、内源性酯浓度在2000 mg/dL 内、胆红素浓度在30 mg/dL 内、葡聚糖（分子量：7w 或4w）浓度在1000 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10%以内。

2.9校准品均一性
试剂盒校准品的均一性：CV 应不大于 3.0％。

1。

q 总蛋白测定（双缩脲法）SOP1.原理：所有蛋白质分子都含有肽键。

在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物。

蓝紫色化合物在546nm(540nm-560nm)处的吸光度与肽键的数量成正比关系，依次可以计算蛋白质的含量。

2.方法：双缩脲法3.试剂：总蛋白试剂其含量为氢氧化钠0.6mol/L酒石酸钾钠32mol/L碘化钾20mol/L硫酸铜12mol/L4.储存条件及有效期：（1）原包装试剂在2℃-8℃避光贮存，有效期36个月。

（2）试剂开盖后在2℃-8℃避光保存，稳定期30天。

5. 样本要求：（1）样本种类：新鲜无溶血血清。

（2）样本采集：取空腹静脉血 3.0ml，置于带分离胶试管中，标本采集后，3000r/min离心5min，分离血清，立即密封送检。

（3）样本干扰：对反应吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果，遇上述情况建议重新采集。

（4）样本保存：密封无蒸发条件下样本2℃-8℃可稳定3天。

6. 检验步骤：（1）开生化仪见生化仪的SOP。

（2）操作步骤：参数设置；试剂装载；校准；质控；样本装载；测定；结果审查；报告。

a.参数设置b.试剂装载每天在生化仪上进行试剂检查，检测的样本数，如发现量不多或不能满足当天需要，则需要加试剂，注意同一批号，不同批号的不能混用。

c.校准换一批新试剂或质控做的不理想需要校准。

d.质控在做样本之前每天做质控，质控符合要求才可以做样本，不符合要求需要做校准，做完校准后，用校准品当样本来测，做质控。

e.样本装载样本符合要求，放在试管架上，编号，上机检测。

f.测定g.结果审查h.报告7. 参考值55-85g/L8 .临床意义：+(1) 血清总蛋白浓度增高a.血清中水分减少，而使总蛋白浓度相对增高。

凡体内水分的排出大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩，尤其是急性失水时（如呕吐，腹泻，高热等）变化更为显著，血清总蛋白浓度有时可达100-150 g/L。

北京利德曼试剂盒说明书1. 产品介绍•本产品是北京利德曼公司生产的试剂盒，用于实验室研究和临床诊断中。

•本试剂盒经过严格的质量控制，保证了准确的结果和稳定的性能。

•本说明书旨在为用户提供使用本试剂盒的详细指导和操作步骤。

2. 试剂盒组成本试剂盒包含以下组分：1.试剂A：用于某种反应。

2.试剂B：用于另一种反应。

3.试剂C：用于补充某种物质。

4.标准品：用于校准试剂盒。

5.说明书：详细说明试剂盒的使用方法和技巧。

3. 试剂盒存储和使用注意事项•试剂盒应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。

•试剂盒在使用前应检查包装完整性，如有破损或过期，请勿使用。

•使用时应按照说明书中的方法和步骤操作，避免误操作导致结果不准确。

4. 试剂盒使用步骤步骤1：试剂盒准备和标准品校准1.打开试剂盒包装，检查试剂是否完整。

2.取出标准品，根据要求进行稀释，得到各种浓度的标准溶液。

步骤2：样品处理1.准备样品，按照要求进行处理和预处理，如稀释、加入试剂等。

步骤3：反应操作1.取出试剂A和试剂B。

2.按照比例将试剂A和试剂B加入样品中，并轻轻混匀。

3.待反应结束后，记录反应时间。

步骤4：结果读取1.将反应液转移到适合的仪器中进行测量。

2.根据标准曲线和仪器读取到的数值，计算出样品中目标物质的含量。

5. 注意事项•操作过程中应佩戴实验室常规的个人防护装备，如实验手套、防护眼镜等。

•试剂的处理应按照规定的方法进行，避免造成环境污染。

•未使用完的试剂应密封保存，避免受潮和污染。

6. 总结该试剂盒适用于实验室研究和临床诊断，具有准确性和稳定性。

使用该试剂盒前，请仔细阅读本说明书，并按照指导和步骤操作。

如有任何疑问或困惑，请及时联系北京利德曼公司的技术支持部门。

感谢您选择我们的产品！。

2性能指标
2.1外观
试剂1（R1）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂2（R2）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；包装标签文字符号应完整、清晰。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，546 nm 波长条件下，吸光度应小于0.200。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为70 g/L 时，吸光度变化应不小于0.150。

2.5线性范围
试剂盒在（2～120）g/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.995；
b)当样本浓度不小于30 g/L 时，线性相对偏差应不超过±6.0%；当样本浓度小于30 g/L 时，线性绝对偏差应不超过±3.6g/L。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 2.0％。

2.6.2批间差
相对极差：R 应不大于 4.5％。

2.7准确度
2.7.1国家标准品测试
测定国家标准品，测定结果与靶值的相对偏差应不超过±5.0% 。

2.7.2质控品测试
测定质控品，测定结果应在靶值范围内。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在250 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内、内源性酯浓度在1200 mg/dL 内、结合胆红素在21 mg/dL 内、非结合胆红素浓度均在21 mg/dL 内、葡聚糖（分子量：7w 或4w）浓度在3000 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10 .0%以内。

总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(T otal Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。

对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。

目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。

Leagene 总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。

可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm 。

双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取1ml 蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。

亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。

特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。

2、 样本处理：血清、血浆样本直接取50μl 检测。

对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水=1：9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS ，冰浴下匀浆后，2500g 离心10min ，取50μl 上清待检。

3、 TP 测定操作，按下表依次加入试剂：编号 名称TC0547100T TC0547200T Storage试剂(A): 双缩脲试剂 250ml 500ml 4℃ 试剂(B): 蛋白标准(BSA) 20mg 20mg RT 试剂(C): 蛋白标准配制液 1.5ml 1.5ml RT 试剂(D): 双缩脲空白试剂 50ml 100ml 4℃ 试剂(E): ddH 2O 1ml2mlRT使用说明书1份空白管 标准管 待测管ddH 2O(ml)0.05 蛋白标准溶液(如1mg/ml)(ml) 0.05 待检样品(血清、血浆、组织)(ml)0.05双缩脲试剂(ml) 2.5 2.5 2.54、混匀, 37℃孵育。

血清总蛋白测定(双缩脲法)1.实验原理：凡分子中含有两个甲酰氨基( -CONH2- )的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称双缩脲反应。

蛋白质分子中有许多肽键( -CONH-），都能起此反应，而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.紫色复合物在540 nm 有吸收峰，并与蛋白含量成正比，通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。

因此，在严格控制条件下，双缩脲反应可作为血浆蛋白总量测定的理想方法，从测定的吸光度值计算出蛋白质含量。

吸光度的大小与试剂的组分、pH值、反应温度有关。

蛋白质+ 铜离子NaOH紫红色络合物2.标本采集及存放：无特殊要求，最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

离心后采集血清或肝素抗凝的血浆。

血清标本20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。

3.实验试剂及仪器：3.1 试剂：使用北京利德曼总蛋白试剂盒。

试剂组成如下3.2仪器及参数：3.2.1使用凯美雅生化分析仪，具体的操作详见生化分析仪作业指导书.3.2.2 分析参数：4.质量控制：在测定每一批标本前先做正常值和异常值来两个水平的质控品，以2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程）。

在控后方可进行标本测定，若失控，查明原因并采取措施。

5. 计算方法：样本总蛋白含量＝×C0△At----------标本管的吸光度变化；△As----------标准管的吸光度变化；C0-----------标准液的浓度；6. 参考值范围：健康成人走动后血清总蛋白浓度为 64～83 g/L ，健康成人静卧时，血清总蛋白浓度为60～78 g/L。

7. 临床意义:血清总蛋白有生理性波动，直立体位由于体液分布的原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位相对稀释。

因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低3～5g/L；新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g/L；60岁以上老人约比成人低2g/L。