Waters 600 Controller高效液相色谱仪维护保养规程

文件制修订记录建立一个对液相色谱仪预防性维护检修程序，以保证仪器和部件的操作性能，延长其寿命。

保证某些仪器和系统长期的可靠性。

【范围】适用于 Waters 液相色谱仪。

【职责】质量控制部负责起草、修订、审核本程序，质量控制部相关人员负责执行本程序。

技改设备部经理负责本规程的批准。

【程序】1 预防维护检修周期1.1 每三个月进行一次仪器预防维护。

1.2 新购仪器 IQ/OQ/PQ 确认完毕一年以后开始预防维护工作。

2 预防维护检修内容2.1 对仪器进行一般性检查。

2.1.1 清洁仪器的外表面、键盘，是否在有效状态。

2.1.2 把系统断电，打开仪器泵的舱门清理的灰尘。

2.1.3 在超声波浴中用溶剂清洗过滤部件，如果被腐蚀了就要更换。

2.1.4 清洗再线过滤器和单向阀。

2.1.5 给仪器通电并观察通电后的自检，此时确认固件的可用性。

2.1.6 准备一个异丙醇的烧杯，清洗所有的溶剂进口过滤部件，并灌注所有的通道。

2.1.7 检查氘灯的使用时间。

2.1.8 检查柱箱运转情况。

2.1.9 检测器流通池的清洁。

3 维护检修程序3.1 准备工作3.1.1 提前通知岗位仪器停止分析。

3.1.2 对仪器进行一般性检查，把仪器表面擦干净。

接通电源，打开仪器和电脑，启动工作站，看是否通过自检。

3.2 部件的拆卸3.2.1 再线过滤器和单向阀拆下后用纯化水超声清洗。

3.2.2 其它如果对仪器结构不熟悉，禁止随意拆卸。

4 维护检修标准4.1 仪器性能测试应通过各技术指标要求（见液相色谱仪检定/测试操作程序）4.2 如不能通过，查找原因，排除故障，继续测试；如不能排除故障，则拨打 800请求 Waters 工程师技术支持。

4.3 仪器性能测试失败时，则仪器不得进行分析化验。

5 做好年度和季度预防性维护检修计划。

【相关文件】《实验室仪器、设备管理制度》《液相色谱仪检定/测试操作程序》【相关记录】《Waters 液相色谱仪预防性维护检修记录》Waters液相色谱仪预防性维护检修记录表《年度液相色谱仪预防性维护检修计划》《季度液相色谱仪预防性维护检修计划》。

WATERS 600高效液相色谱仪使用说明书（用前必读）青岛科技大学化工测试中心2009-07-17安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。

注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。

注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。

注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。

小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。

小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。

小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。

目录第一章WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第五章Millennium 32 4.02版本（中文版）安装要点及有关事项 (47)第一章WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。

该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。

该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。

建立色谱库后可以实现定性分析。

第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。

2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。

用前均需过0.45µm 滤膜。

2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。

一、LC-600高效液相色谱仪保养1．LC-600高效液相色谱仪的日常操作条件：温度：10—30℃；相对湿度<80％；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。

2．泵的保养：1)使用流动相尽量要清洁；2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3)流动相交换时要防止沉淀；4)避免泵内堵塞或有气泡;3．进样器的保养：1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；4．柱的保养：1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3)要注意流动相的脱气；4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5)进样样品要提纯；6)严格控制进样量；7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；5．检测器(UV)的保养：1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。

2)样品池要保养。

二、高效液相色谱输液泵常见故障的判断和排除LC-600高效液相色谱输液泵常见故障的判断和排除现象原因排除方法1、压力高于正常值（1）流量设定位有误（2）泵出口过滤器堵塞（3）柱头被杂质堵塞（4）柱前过滤器阻塞（1）重新调整（2）拆下过滤器用硝酸超声清洗（3）拆开柱头，清洗柱头过滤片；如杂质颗粒已进入柱床堆积，应小心翼翼地挖去沉积物和已被污染的填料，然后用相同类型的凝胶填料补平，切勿使柱头留下空隙。

（4）清洗柱前过滤器，清洗后如压力还高可换上新的过滤器 2、压力低于正常值或者流量小于设定值（1）某联接处泄漏 （2）柱塞密封处泄漏 （1）将泄漏处重新拧紧或更换密封环，也可缠一点聚四氟乙烯薄膜临时解决问题，待以后再作处理 （2）更换新柱塞密封圈 3、在无流速时，压力表高于或低于零点压力传感器输出未调好 用小螺丝刀调节压力传感器螺丝，直到指示表头为零 4、柱压升高柱流量减少（1）柱子、保护柱或预柱部分堵塞 （2）检测池或检测器的入口管，部分堵塞 （1）清洗或更换柱入口过滤片；更换柱子 （2）拆卸并清洗检测池和（或）管路 5、柱压波动（1）高压系统中有泄露（入口隔膜、进样阀、入口紧固件等） （2）单向阀被污染，部分堵塞 （1）查出并修理泄漏 （2）观察柱塞推杆的动作，向前推压力下降，入口阀有问题；向后退压力下降，出口阀有问题。

1 目的建立本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作，确保仪器能正常使用。

2 适用范围适用于本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作。

3 责任者本实验室所有操作高效液相色谱仪人员。

4 操作规程高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.1 对仪器的一般要求和色谱条件所用的仪器为高效液相色谱仪。

仪器应定期检定并符合有关规定。

4.1.1 色谱柱反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm（1nm=10A）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10um之间。

粒径更小（约2um）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。

流动相的PH值应控制在2~8的。

当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH 小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。

Waters液相色谱仪的日常维护与保养
1.分析检测前，至少须让检测器或D2灯源“热机”30分钟以上。

2. 所使用的流动相需先过滤，再超声5分钟，方可使用。

3. 当使用盐类流动相后，须以超纯水冲洗30分钟，再以甲醇冲洗30分钟。

4.每周日定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，将管路A、B、C、D捆绑抽液，在流速1.0ml/min的状态下先用超纯水冲洗30分钟，然后用30%磷酸（色谱级）冲洗30分钟，再用超纯水冲洗至流出液为中性，最后用甲醇冲洗30分钟。

5. 每周日定期清洗在线过滤器：把在线过滤器卸下，先用甲醇超声30分钟，最后用超纯水超声30分钟。

6. 每月一号定期交换流动相的管路：管路A、B、C、D互换使用，以防管路堵塞。

高效液相色谱仪维护保养规程文件编号：SOP-EQ-001 00版目的：指导化验员正确的维护和保养高效液相色谱仪，提高仪器使用寿命，使仪器稳定的工作得到稳定可靠的数据。

一；检测器的维护和保养1.检测器是高效液相色谱仪器的数据收集部分，由很多的电子和光学元件组成。

禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。

2.仪器内部的流通池是流动相流过的元件，样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池，导致无法检测或检测结果不准，所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。

3.当仪器检测数据出现明显波动，基线噪音变大时要冲洗仪器管路冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量，如果能量不足就因更换新的氘灯。

4.仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路，保证下次使用时管路和系统的清洁。

二；高压恒流泵的维护和保养1，高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。

高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。

在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

2，在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。

三；色谱柱的维护和保养1，所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。

而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

2，所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。

并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。

3，本公司检验项目中所使用到的最大流速为1.0ml/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4，在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。

高效液相色谱仪安全操作及保养规程前言高效液相色谱仪（HPLC）是一种用于化学分析和检测的重要工具。

为了确保高效液相色谱仪的安全运行和最佳性能，需要遵守一系列的安全操作和保养规程。

本文档提供了详细的操作和保养步骤，以协助用户正确地使用和保护高效液相色谱仪。

安全操作规程操作前1.确保操作人员已经接受了高效液相色谱仪的操作培训并掌握了正确的操作方法。

2.在操作前检查仪器的电源是否正常，仪器的机械结构是否稳定，是否有明显损坏或松动的部件。

3.确保试剂和溶剂的选择和准备符合分析要求，并遵守相关安全规程，如使用防护手套和护目镜。

4.加载样品前必须确定样品的性质和浓度，并根据需要适当稀释和过滤。

操作时1.操作人员应当始终注意安全。

在操作过程中避免直接接触样品和溶剂，避免口误和吞咽样品或溶剂。

2.操作过程中，若发现异常状况，如机器停滞或跑偏、压力急剧增高等，应立即停止操作并检查仪器或相关部件。

3.调整某些参数时，如流速、温度、压力等，应尽量保持小幅度调整，避免快速快速调整。

4.操作结束后，必须关闭仪器并注销相关操作，清理工作区域和操作台面，清洗使用的管道、器皿和附件，并将物品归位。

操作恢复1.若长时间未使用高效液相色谱仪，请在使用前仔细检查机器各部位是否存在异常。

2.重新启动仪器时，请按照操作手册上的步骤重新进行仪器的初始化和调试。

废物处理高效液相色谱仪所使用的溶剂和其他化学废物，必须按照当地的环保规定进行处理和处置。

在处理前应该咨询相关专业人员。

保养规程日常检查和保养1.每天开始操作前，检查仪器的所有零部件是否齐全，零部件是否完整，清洁状态如何。

2.操作后，每天对样品室、管路等部位进行清洁，确保无污物堆积和管路没有堵塞现象。

3.每周对色谱柱进行洗涤和清洁，可以使用去离子水和乙醇为主要清洗溶剂，以确保柱子的性能和使用寿命。

4.定期对机械结构和电子部件进行检查和保养，保证设备运行的稳定性。

液路检查和保养1.定期检查操作中常温箱的工作状态和温度。

保养维护高效液相色谱仪的要点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量分析仪器。

为了保证其正常运行和延长使用寿命，需要进行定期的保养和维护。

下面是保养维护高效液相色谱仪的主要要点：1.保持色谱仪周围环境清洁干燥：色谱仪应该放置在无尘、无水、无振动、无干扰的环境下。

养成定期清理仪器外壳和工作台面的习惯，防止灰尘和异物进入仪器内部。

2.定期检查和更换耗材：液相色谱柱是色谱仪的核心部件，需要定期检查柱子的状况，包括柱液的流量、背压、峰形等参数。

当出现异常时，需要及时检查和更换柱子。

此外，溶剂瓶、垫片、接头和密封件等耗材也需要定期检查和更换。

3.保持良好的进样系统：进样系统是色谱仪样品进入柱子的关键部件。

需要注意致样器、进样针和进样管的清洁和灵敏度。

定期检查进样系统的各个部件，保证样品进入柱子的准确性和稳定性。

4.注意溶剂和流速的选择：溶剂和流速的选择对色谱分离的质量和分析结果有很大的影响。

应该选择优质的溶剂，在使用过程中定期更换，并注意保持合理的流速。

在使用有机溶剂时，要避免过高浓度的有机溶剂对仪器造成损害。

5.定期校准和质控：定期校准色谱仪可以保证分析结果的准确性和可靠性。

常见的校准包括柱液流量校准、波长和检测灵敏度的校准等。

此外，在样品分析过程中应该加入合适的质控标准品，并定期检查质控品的回收率和重复性。

6.注意样品的准备和处理：样品的准备和处理对HPLC分析结果有直接影响。

样品准备过程中应注意去除杂质和颗粒，避免对色谱柱和检测器造成污染或损坏。

对有机样品，要避免过高浓度的有机溶剂对进样系统造成损害。

7.定期维护仪器：除了日常保养，还应定期对仪器进行维护和检修。

定期检查和更换仪器中的各种装置、阀门、泵、检测器等关键部件。

根据仪器厂家的推荐，进行润滑和清洗等维护工作，保持仪器的正常运行。

8.进行严格的记录和文档管理：在使用和维护过程中应该做好记录和文档管理。

高效液相色谱系统的维护与保养大连依利特分析仪器有限公司１．　流动相Ø保持贮液瓶清洁，定期清洗或更换；Ø尽量使用ＨＰＬＣ级溶剂和试剂；Ø含有缓冲盐和非ＨＰＬＣ级的流动相一定要过滤；Ø含有缓冲盐的流动相应现用现配，防止微生物生长和组分改变。

更换流动相注意事项高效液相色谱常用的流动相包括多种有机溶剂、水、各种缓冲溶液等，它们之间存在互溶性的问题，同时也存在缓冲溶液盐析出的问题。

将新流动相置于储液瓶中。

１．打开放空阀，启动泵使新的流动相从放空阀出口流出２０ｍＬ左右。

２．关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于进样阀的出口处。

３．启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出１０ｍＬ左右。

４．重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约３０倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，流动相更换完毕。

更换非互溶性流动相１．用中介溶剂更换泵中的旧流动相（不要接色谱柱）。

２．如果色谱柱中流动相也需要更换，用该溶剂冲洗色谱柱。

３．用新流动相更换中介溶剂。

１．用５％～２０％甲醇水更换色谱系统中缓冲液（包括色谱柱）　。

（非常重要）２．用新流动相更换过渡溶剂。

３．由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液时容易将缓冲液中的盐结晶出来，而结晶盐对密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子和定子都有很大的损坏，也容易阻塞输液管路，因此要特别仔细操作。

４．用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵，照以上步骤更换溶剂，然后用纯甲醇或乙腈冲洗。

２．泵头泵的密封圈是泵最易磨损的部件泵的密封圈的维护保养：Ø每天要把泵中的缓冲液冲洗干净，防止盐沉积；Ø用ＨＰＬＣ级试剂；Ø用烧结不锈钢吸液过滤头；３．　进样阀Ø最易磨损：转子密封Ø保养事项：１、样品进样前要过滤；２、停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留样品和缓冲盐；３、不要用气相色谱用的尖头针进样。

４．　检测器Ø保持检测器清洁，每天与色谱柱一同清洗；Ø用脱过气的流动相，防止空气卡在检测池内；Ø检测器灯有一定寿命，不用时不要打开灯。

高效液相色谱仪的维护和保养高效液相色谱仪是一种复杂的的分析设备，需要定期进行维护和保养，以确保其长期稳定运行和准确结果。

以下是一些建议的维护和保养步骤：
1、定期清洗系统：定期清洗系统可以清除色谱柱和流路中的残留物质，包括流动相、样品和清洗液。

这可以防止堵塞和污染，并保持系统的清洁和高效。

2、定期更换流动相：流动相是高效液相色谱仪运行的关键组成部分。

建议定期更换流动相，以避免其变质或受到污染。

3、定期检查和更换泵密封垫：泵密封垫是防止流动相泄漏的关键部件。

建议定期检查和更换泵密封垫，以避免其磨损或老化。

4、定期校准系统：定期校准系统可以确保色谱仪的准确性和重复性。

建议定期进行校准，并使用已知的标准物质进行校准。

5、定期检查和更换流路配件：流路配件是高效液相色谱仪的重要组成部分，需要定期检查和更换。

例如，过滤器、单向阀、密封圈等都需要定期更换或修理。

6、保持电源和仪器连接稳定：保持电源和仪器连接稳定可以避免仪器故障和数据失真。

建议使用UPS电源，并定期检查电缆和接口是否松动或损坏。

7、定期进行软件和硬件更新：高效液相色谱仪需要进行软件和硬件更新以保持其最新状态和功能。

建议定期检查和更新软
件和硬件。

总之，高效液相色谱仪的维护和保养是非常重要的的工作，需要专业人员进行定期维护和保养。

建议用户根据自身的实际情况，制定一个合理的维护和保养计划，并严格执行。

高效液相色谱仪维护保养规程一、检测器的维护和保养1. 检测器是高效液相色谱仪器的数据收集部分，由很多的电子和光学元件组成。

禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。

2. 仪器内部的流通池是流动相流过的元件，样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池，导致无法检测或检测结果不准，所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。

3. 当仪器检测数据出现明显波动，基线噪音变大时要冲洗仪器管路冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量，如果能量不足就因更换新的氘灯。

4. 仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路，保证下次使用时管路和系统的清洁。

二、高压恒流泵的维护和保养1. 高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。

高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。

在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

2，在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。

三、色谱柱的维护和保养1. 所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。

而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

2. 所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。

并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。

3. 本公司检验项目中所使用到的最大流速为1.0ml/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4. 在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。

四、常见故障及日常维护下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出了的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。

高效液相色谱仪的维护与保养液相色谱仪应该进行适当的维护保养，维护保养按照维护频率分为日常维护、每周维护及每月维护。

每周维护、每月维护活动均应记录在仪器维护记录本上。

1日常维护1.1溶剂配制所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水。

溶剂必须经过滤膜过滤，过滤水和有机相时应该选用不同的滤膜。

纤维素膜主要用于水溶液，尼龙滤膜和PTFE膜均是通用型滤膜。

常用0.45μm滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，建议使用0.22μm滤膜。

溶剂使用前必须脱气，常用超声脱气20-30min。

1.2开机准备新鲜的纯水和有机溶剂以及方法所需的溶液。

按顺序打开仪器各组件电源→电脑电源→打开工作站。

确认工作站和仪器连接正常，通过工作站或手动打开排气阀，将需要用到的通道分别100%以流速3ml/min~5ml/min排气。

（所需流量参考日常工作的排气流量）（多个泵同时排气容易对泵造成损耗，不建议！）确认各通道排气完成后，关闭排气阀。

用20倍以上的柱体积的有机溶剂冲洗系统。

（注意：有机溶剂冲洗前需确认之前关机时已经移除系统中的缓冲盐）调用运行方法，使用5~10倍柱体积的方法所需流动相比例平衡系统。

平衡系统前用所需方法的流动相比例在排气阀打开的情况下以3ml/min~5ml/min运行一段时间，让泵中的流动相比例快速达到所需的流动相比例。

更换洗针溶剂、更换密封垫清洗溶剂。

1.3试验中注意1.3.1流动相在选择A、B、C、D泵放置流动相时，将盐溶液连接在一个底部梯度阀端口上，有机溶剂连接在一个上部梯度阀端口上。

最好使有机溶剂通道位于盐溶液通道的正上方。

最好不要将纯水溶液作为流动相的一组，如果使用了水相作为流动相的一组，应注意定期更换、过滤溶剂，不应超过2天，避免阳光直接照射。

如果试验允许，可向水相中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。

1.3.2色谱柱使用流动相前千万注意，流动相与色谱柱内的保存溶剂和系统内存留溶剂的混溶性，避免形成乳化小液滴，从而毁坏柱子。