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紫外分光光度法测定康丽胶囊中总黄酮的含量林君红;叶珍珍;崔升淼【摘要】Objective To establish a method for the determination of total flavonoids content in Kangli capsule. Methods The detection was set at 504 nm with rutin as reference by ultraviolet spectrophotometry. The content of the total flavonoids was employed as the index to investigate the adsorption and elution of them on polyamide. Results The method was linear within the range of 6. 891 -34. 456 μg/mL. The average recovery of the assay was 102. 4% and RSD was 1. 9% . Conclusion The method was simple, highly accurate and nontoxic, which may be used in the assay of total flavonoids in Kangli capsule.%目的建立康丽胶囊中总黄酮含量测定的方法.方法采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,于504 nm测定总黄酮质量分数,并研究聚酰胺吸附与洗脱总黄酮的行为.结果芦丁质量浓度在6.891 ～34.456μg/mL范围内,线性关系良好.平均加样回收率为102.4％,RSD值为1.9％.结论该方法简便、准确、安全无毒害,可用于测定康丽胶囊中总黄酮的质量分数.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2012(028)006【总页数】4页(P619-622)【关键词】紫外分光光度法;康丽胶囊;总黄酮;聚酰胺;芦丁【作者】林君红;叶珍珍;崔升淼【作者单位】广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R917康丽胶囊由菟丝子、灵芝、白术、茯苓、五味子、党参等中药组成。
食品科技紫外分光光度法在保健食品检测中的应用罗婷婷（广西华测检测认证有限公司，广西南宁 530000）摘 要：紫外分光光度法是一种常用的光谱分析技术，可以用于分析物质的结构、浓度、纯度等参数。
在保健食品的检测中，紫外分光光度法有着广泛的应用，可以用于检测保健食品的成分含量、质量和安全性等。
本研究简单分析了紫外分光光度法在保健食品检测中的应用，讨论了紫外分光光度法在保健食品检测中的必要性，探讨了紫外分光光度法在保健食品测定中的应用，旨在为我国未来保健食品的生产与管理提供帮助与参考。
关键词：紫外分光光度法；保健食品；检测分析；食品安全管理Application of Ultraviolet Spectrophotometry in the Detectionof Health FoodLUO Tingting(Guangxi Huace Testing and Certification Co., Ltd., Nanning 530000, China) Abstract: Ultraviolet spectrophotometry is a commonly used spectral analysis technique that can be used to analyze parameters such as the structure, concentration, and purity of substances. In the detection of health food, ultraviolet spectrophotometry is also widely used, which can be used to detect the content, quality, and safety of ingredients in health food. This study briefly analyzed the application of ultraviolet spectrophotometry in the detection of health food, discussed the necessity of ultraviolet spectrophotometry in the detection of health food, and discussed the application of ultraviolet spectrophotometry in the determination of health food, aiming to provide assistance and reference for the future production and management of health food in China.Keywords: ultraviolet spectrophotometry; health food; detection analysis; food safety management紫外分光光度法是一种常用的光谱分析技术，利用化合物分子在紫外区或可见光区的吸收特性，通过检测样品溶液中不同波长光线的吸收强度，确定分子的结构、浓度、纯度等参数[1]。
可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论
大山楂丸中总黄酮的含量可以采用可见分光光度法来测定。
1. 实验目的：测定大山楂丸中总黄酮的含量。
2. 实验原理：可见分光光度法利用物质对可见光的吸收特性来测定物质的浓度。
总黄酮具有一定的吸收特性，可以通过测量吸光度来计算其浓度。
3. 实验步骤：
a. 准备样品：将大山楂丸样品粉碎并称取适量。
b. 提取黄酮：使用适合的溶剂（如乙醇）将黄酮提取出来。
c. 制备标准曲线：准备一系列不同浓度的黄酮标准溶液，然后使用分光光度计分别测量吸光度。
d. 测量样品吸光度：将提取的样品溶液使用分光光度计测量吸光度。
e. 计算黄酮含量：根据标准曲线的吸光度-浓度关系，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。
4. 实验结果：根据测量得到的吸光度值和标准曲线，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。
5. 实验讨论：
a. 实验方法的准确性和重复性：可以进行重复实验，计算相对标准偏差或百分相对标准偏差来评估方法的准确性和重复性。
b. 实验条件的选择：实验中需要选择合适的波长和溶剂，并对提取方法进行优化，以获得最佳的测量结果。
c. 样品处理的改进：可以尝试不同的提取方法，如其他溶剂或萃取工艺，以提高黄酮的提取效率。
d. 可行性和适用性分析：可以对其他样品进行类似实验，评估方法的适用性和可行性。
保健食品总黄酮测定方法
保健食品是指具有保健功能的食品，其中总黄酮是一种常见的保健成分。
总黄酮是指一类具有黄酮骨架结构的化合物，包括黄酮类、异黄酮类、花青素类等多种物质。
总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健作用，因此被广泛应用于保健食品中。
为了保证保健食品中总黄酮的含量符合标准，需要进行总黄酮测定。
总黄酮测定方法主要有两种：分光光度法和高效液相色谱法。
其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，适用于大批量样品的测定。
该方法的原理是利用总黄酮与铝离子形成络合物，使样品溶液的吸光度增加，从而测定总黄酮的含量。
该方法的操作简单，但对样品的前处理要求较高，需要去除干扰物质，否则会影响测定结果的准确性。
高效液相色谱法是一种准确、灵敏、选择性好的测定方法，适用于复杂样品的测定。
该方法的原理是利用高效液相色谱仪对样品中的总黄酮进行分离和检测。
该方法的优点是测定结果准确可靠，但需要较长的分析时间和较高的仪器成本。
总黄酮测定方法的选择应根据实际情况进行，以保证测定结果的准确性和可靠性。
同时，保健食品生产企业应严格按照国家标准进行总黄酮含量的测定，确保产品质量符合标准，保障消费者的健康。
大豆中总黄酮的测定——分光光度法大豆是一种常见的食物，含有丰富的营养成分，其中总黄酮是一种重要的营养成分。
总黄酮是指在植物中广泛分布的一类黄色化合物，是一种天然的抗氧化剂，能够保护人体免受游离基的损害，具有抗衰老、抗肿瘤、降低血脂等多种保健功效。
因此，测定大豆中总黄酮的含量对于评价大豆的营养价值和保健功效具有重要意义。
目前，常用的测定大豆中总黄酮含量的方法有高效液相色谱法、毛细管电泳法和分光光度法等。
其中，分光光度法是一种简便、经济、准确度高、灵敏度高的方法，因此是一种常用的测定大豆中总黄酮含量的方法。
下面，将对分光光度法的原理、操作步骤和注意事项进行详细介绍。
一、原理分光光度法是利用物质的吸收光谱特征来测定物质的含量的一种方法。
黄酮类化合物在紫外光区域有吸收峰，其波长范围在200~400nm，且波长在270nm处具有最大吸收峰。
因此，可以通过分光光度法测得样品在270nm处的吸光度值，从而推算出样品中总黄酮的含量。
二、操作步骤1.准备样品将大豆样品加入适量的乙醇中，并放入超声器中超声提取30min，然后用离心机离心10min，取上部透明液体即可。
2.制备标准曲线将标准物质不同浓度的溶液分别取1.0ml，加入10ml的乙醇中，摇匀后，用超声波清洗30s。
然后用1ml移液管取出每个浓度的标准物质溶液置于1cm的光程比色皿中，加入足量的乙醇至刻度。
然后利用紫外分光光度计在270nm处进行测定，记录吸光度值，制成标准曲线。
3.测定样品将经过提取的大豆样品取适量，按2中方法进行测定，在270nm处记录吸光度值。
4.计算结果根据标准曲线的结果计算样品中总黄酮的含量。
三、注意事项1.制备标准曲线时，应尽量选择与样品同一提取方法的标准物质进行测定。
2.制备样品时应充分超声，并注意结果的重现性，避免出现因提取不彻底或过度提取等问题导致的误差。
3.操作时应注意仪器的正确使用和光路的清洁与校准，以保证测量结果的准确性和可靠性。
总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。
分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。
从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。
式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。
样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。
２９１ 前言总黄酮是很多保健食品中的重要功效成份，能促进胰岛素的亲和力，在降压、降脂、降血糖方面有显著效果，同时还具有增强毛细血管通透性等作用。
因此，测定其含量对于保健食品的品质和功效具有重要的意义。
但目前国内还没有保健食品中总黄酮测定方法的国家标准。
国内外对保健食品中总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及平行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。
但是，总黄酮这种天然植物的组分非常复杂，分光光度法在实测过程中会产生各种干扰，影响结果的准确性，本方法有针对性地对此开展了研究，进行了创新并取得了较好的结果，建立了一个高效、准确的测定方法。
目前总黄酮的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、聚酰胺薄层分析法等。
但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免实测过程中会产生各种干扰。
因此比较而言，本方法立足于用常规的化学及物理检测方法，采用了超声波提取、聚酰胺吸附法经过改进系统，试验得到了快速、简易、良好的效果，在实际测定、应用中，具有更大的意义。
２ 检测方法２．１ 试剂与仪器２．１．１ 试剂与材料ａ）无水甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯甲烷，均为分析纯，以下用水除特殊说明外，均为ＧＢ／Ｔ ６６８２－２００８中规定的三级水。
ｂ）聚酰胺粉：过８０目～１００目筛。
ｃ）５ ％亚硝酸钠溶液：称取５．００ ｇ亚硝酸钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀，当天配制。
分光光度法测定保健食品中总黄酮孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心黑龙江）ｄ）１ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４．００ ｇ氢氧化钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｅ）１０％硝酸铝溶液：称取１０．００ ｇ硝酸铝，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｆ）３０ ％乙醇溶液：吸取３０．０ｍｌ无水乙醇，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｇ）芦丁标准对照品：９９．５％ｈ）芦丁标准溶液：精确称取经１０５℃干燥至恒重并按其纯度折算为１００ ％质量的芦丁标准对照品０．０１５０ ｇ，加无水甲醇溶解并定容至１００ｍｌ，此溶液浓度为１５０ μｇ／ｍｌ，０℃～４℃密封保存，保存期为两个月。
可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量实验五可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量⼀、⽬的要求1、掌握⽤分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。
2、掌握可见分光光度计的使⽤⽅法。
⼆、基本原理⼤⼭楂丸由⼭楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消⾷，其中⼭楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维⽣素。
黄酮类化合物具有邻⼆酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等⾦属盐类试剂反应，⽣成有⾊配合物，可⽤可见分光光度法测定其含量。
本实验利⽤黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产⽣⾼灵敏度的橙红⾊配合物（λmax=510nm），从⽽⽤可见分光光度法（⽐⾊法）测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量。
三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、索⽒提取器。
2、⼄醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。
3、槲⽪素（中国药品⽣物制品检定所）。
4、⼤⼭楂丸（市售品）。
四、操作步骤1、标准液的配制：精密称取槲⽪素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%⼄醇50ml使溶解，然后加50%⼄醇稀释⾄刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。
2、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%⼄醇溶液使成5ml，精密加⼊5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加⼊10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加⼊1%氢氧化钠溶液4ml，分别⽤50%⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，放置15分钟。
以第⼀瓶作空⽩，⽤可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归⽅程）。
3、样品液的制备：精密称取120℃⼲燥2⼩时的⼤⼭楂丸6.5g，置索⽒提取器中，⽤95%⼄醇125ml回流提取1.5⼩时，将提取液移⾄250ml容量瓶中，补加蒸馏⽔⾄刻度，摇匀即得。
4、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备⽅法进⾏测定，并由标准曲线或回归⽅程计算样品中总黄酮的含量。
紫外可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点一、本文概述紫外可见分光光度法是一种基于物质对紫外和可见光的吸收特性进行定量分析的方法。
在生物化学和药物分析中，这种方法被广泛应用于测定各类化合物的含量，其中包括黄酮类化合物。
黄酮类化合物，也称为黄酮或黄碱素，是一类具有广泛生物活性的天然产物，它们广泛存在于植物中，并具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，对黄酮类化合物进行准确、快速的定量分析具有重要意义。
本文旨在探讨紫外可见分光光度法在测定总黄酮含量中的应用，并对其方法学进行考察。
我们将详细介绍紫外可见分光光度法的基本原理、实验操作步骤，以及影响测定结果的各种因素。
我们还将讨论该方法的优点和局限性，以及在实际应用中可能遇到的问题和解决方案。
通过对这些内容的全面探讨，我们希望能够为相关领域的研究人员和技术人员提供有益的参考和指导，推动紫外可见分光光度法在黄酮类化合物分析中的应用和发展。
二、紫外可见分光光度法的基本原理紫外可见分光光度法（UV-Vis spectrophotometry）是一种基于物质对紫外和可见光区域内特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法。
该方法基于朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），即溶液对光的吸收与溶液的浓度成正比，与光通过溶液的路径长度也成正比。
在紫外可见分光光度法中，当一束单色光通过被测溶液时，部分光能会被溶液中的吸光物质吸收，导致光强减弱。
吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）和光程长度（l）之间的关系可以表示为 A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数，它表示单位浓度、单位光程长度下的吸光度。
对于总黄酮含量的测定，黄酮类化合物在紫外可见光区域内有特定的吸收峰，通过测量这些吸收峰处的吸光度，并结合标准品的工作曲线，可以实现对总黄酮含量的定量分析。
紫外可见分光光度法还具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在黄酮类化合物含量测定中得到了广泛应用。
需要注意的是，紫外可见分光光度法只能测定那些具有吸光特性的物质，且受到溶液的颜色、浊度以及其它共存物质的影响。
２９１ 前言总黄酮是很多保健食品中的重要功效成份，能促进胰岛素的亲和力，在降压、降脂、降血糖方面有显著效果，同时还具有增强毛细血管通透性等作用。
因此，测定其含量对于保健食品的品质和功效具有重要的意义。
但目前国内还没有保健食品中总黄酮测定方法的国家标准。
国内外对保健食品中总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及平行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。
但是，总黄酮这种天然植物的组分非常复杂，分光光度法在实测过程中会产生各种干扰，影响结果的准确性，本方法有针对性地对此开展了研究，进行了创新并取得了较好的结果，建立了一个高效、准确的测定方法。
目前总黄酮的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、聚酰胺薄层分析法等。
但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免实测过程中会产生各种干扰。
因此比较而言，本方法立足于用常规的化学及物理检测方法，采用了超声波提取、聚酰胺吸附法经过改进系统，试验得到了快速、简易、良好的效果，在实际测定、应用中，具有更大的意义。
２ 检测方法２．１ 试剂与仪器２．１．１ 试剂与材料ａ）无水甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯甲烷，均为分析纯，以下用水除特殊说明外，均为ＧＢ／Ｔ ６６８２－２００８中规定的三级水。
ｂ）聚酰胺粉：过８０目～１００目筛。
ｃ）５ ％亚硝酸钠溶液：称取５．００ ｇ亚硝酸钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀，当天配制。
分光光度法测定保健食品中总黄酮孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心黑龙江）ｄ）１ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４．００ ｇ氢氧化钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｅ）１０％硝酸铝溶液：称取１０．００ ｇ硝酸铝，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｆ）３０ ％乙醇溶液：吸取３０．０ｍｌ无水乙醇，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。
ｇ）芦丁标准对照品：９９．５％ｈ）芦丁标准溶液：精确称取经１０５℃干燥至恒重并按其纯度折算为１００ ％质量的芦丁标准对照品０．０１５０ ｇ，加无水甲醇溶解并定容至１００ｍｌ，此溶液浓度为１５０ μｇ／ｍｌ，０℃～４℃密封保存，保存期为两个月。
２．１．２ 仪器设备ａ） 天平：感量０．１ ｇ和０．０００１ ｇ。
ｂ）分光光度计。
ｃ）超声波发生器。
ｄ）恒温水浴锅。
ｅ）涡旋混合器。
ｆ）抽滤装置：真空泵、抽滤瓶、布氏漏斗、定量滤纸。
ｇ）层析柱：２０ ｃｍ以上内径为１ ｃｍ的玻璃管。
ｈ）蒸发皿：规格１００ｍｌ。
ｉ）具塞比色管：规格１０ｍｌ和５０ｍｌ。
２．２ 操作步骤２．２．１ 提取２．２．１．１ 固体样品取有代表性样品， １ ｇ～５ ｇ（精确至０．０１ ｇ）于５０ ｍｌ具塞比色管中，加入３０ ｍｌ无水乙醇，涡旋混匀３ ｍｉｎ。
超声提取３０ ｍｉｎ，抽滤，用无水乙醇淋洗比色管、残渣及抽滤瓶，收集全部滤液于１００ ｍｌ蒸发皿中，加１ ｇ聚酰胺粉，缓慢摇匀。
于５０ ℃水浴上挥去乙醇。
摘要 研究各种操作条件对分光光度法测定保健食品中总黄酮的影响， 得到了较有价值的结论。
关键词 总黄酮；保健食品；分光光度法３０２．２．１．２ 液体样品取有代表性样品，１ ｍｌ～１０ ｍｌ（精确至０．１ ｍｌ）于５０ ｍｌ具塞比色管中，加入３０ ｍｌ无水乙醇，涡旋混匀３ ｍｉｎ。
超声提取３０ ｍｉｎ，抽滤，用无水乙醇淋洗比色管、残渣及抽滤瓶，收集全部滤液于１００ ｍｌ蒸发皿中，加１ ｇ聚酰胺粉，缓慢摇匀。
于５０℃水浴上挥去乙醇，再调节水浴至８０℃蒸干。
２．２．２ 净化在层析柱下端填入少量脱脂棉。
用７５ ｍｌ三氯甲烷将蒸发皿中的残留物全部转入层析柱中，洗去脂肪，弃去滤液。
用４０ ｍｌ无水甲醇再次冲洗蒸发皿，并转入层析柱中，控制洗脱流速小于６０ ｄ／ｍｉｎ，收集全部洗脱液于５０ ｍｌ容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，待测。
２．２．３ 标准工作曲线的配制及测定分别吸取标准溶液０ ｍｌ、０．５ ｍｌ、１．０ ｍｌ、２．０ ｍｌ、３．０ ｍｌ、４．０ ｍｌ，相当于芦丁含量为０ μｇ、７５ μｇ、１５０ μｇ、３００ μｇ、４５０ μｇ、６００ μｇ，分别置于６个１０ ｍｌ刻度比色管中，加入３０％乙醇溶液至 ５ ｍｌ。
各加５ ％亚硝酸钠溶液０．３ ｍｌ，振摇后放置５ ｍｉｎ。
加入１０％硝酸铝溶液０．３ ｍｌ，摇匀后放置６ ｍｉｎ。
加１．０ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液２ ｍｌ， 用３０ ％乙醇定容至刻度，摇匀，以零管为空白，用１ ｃｍ比色皿，在５０２ｎｍ处进行吸光度测定（比色测定操作须在６０ ｍｉｎ内完成），并绘制芦丁含量（μｇ）与吸光度的标准曲线。
２．２．４ 样品的测定根据样品中总黄酮含量，取待测液１ ｍｌ～５ ｍｌ（精确至０．１ ｍｌ）于１０ ｍｌ刻度比色管中，以下按标准曲线的测定（２．２．３）操作步骤进行测定。
同时另取同体积未加铝盐试剂的样液（补加０．３ ｍｌ水），作为样品基体空白，与标准工作曲线相比较定量。
２．３ 结果计算样品中总黄酮的含量（以芦丁计）按式（１）计算： ……………………（１）式中：Ｘ —样品中总黄酮的含量（以芦丁计），单位为克每１００克或克每１００毫升（ｇ／１００ｇ或ｇ／１００ｍｌ）；Ｃ —从标准曲线上查得的被测液中总黄酮含量，单位为微克（μｇ）；Ｃ０—从标准曲线上查得的被测液中样品基体空白含量，单位为微克（μｇ）；Ｖ２—样品定容体积，单位为毫升（ｍｌ）；Ｖ１—取待测液体积，单位为毫升（ｍｌ）；ｍ—称取样品质量或体积，单位为克或毫升（ｇ或ｍｌ）。
计算结果保留至小数点后两位。
３ 方法的主要技术研究过程３．１ 测定原理根据资料，将样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，黄酮类化合物中的３－羟基，４－羟基或５－羟基，４－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。
用分光光度法于５０２ ｎｍ波长下测定其吸光度，与芦丁标准对照品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。
３．２ 对样品中总黄酮的提取工艺的研究总黄酮（Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）是具有苯骈吡喃环结构的一类天然化合物的总称，基本母核可认为是无苯基色原酮，广泛的存在于天然植物中，组分非常复杂。
一般都具有４位羰基，大多数以苷的形式存在且呈现黄色。
有的具有良好的心脑血管药理活性，有的具有抗菌消炎作用，有的具有保肝作用。
黄酮类化合物是用有机溶剂从植物中提取，再经纯化、干燥所得的黄色粉状品，是一种天然化合物，在食品加工中是很多保健食品添加的重要功效成份。
总黄酮纯化过程中多以乙醇提取为佳。
其根本原因，是由于黄酮类化合物中的游离苷元难溶或不溶于水，但易溶于乙醇，因此常用不同浓度的乙醇提取总黄酮；而黄酮类化合物中的黄酮苷类一般可溶于水也可溶于醇，因此也可用水或不同浓度的乙醇提取。
而且，用水煎煮提取，亦将蛋白质、糖类等水溶性杂质一同提出，可用醇沉法、丁醇萃取法、聚酰胺柱层析法进行分离纯化，过程比较复杂；用乙醇提取，亦将树脂、蜡质、叶绿素、植物甾醇等脂溶性杂质提出，可用水沉法、碱溶酸沉法、丁醇萃取法、聚酰胺吸附层析法、交联ＰＶＰ吸附层析法等分离纯化，过程相对简单。
上述是一般情况，对某一含黄酮的具体保健品而言，应根据所含黄酮的水溶性及其含量的多少，除黄酮外的其有效部分及其性质、所含蛋白质、鞣质、树脂等杂质的情况以及药材所属植物部位不同（全草、根、茎、叶）等具体情况设计出不同的溶剂提取和不同的分离纯化工艺，经筛选试验，最终才能获得适宜的溶剂提取工艺和分离纯化工艺。
３．３ 对样品中总黄酮提取条件的选择以下选取以银杏叶、淫羊霍、黄芩为主要成分的三种有代表性的总黄酮保健食品为例，尽管以上三位药均含黄酮为主要有效成分，但由于在加工过程中使用的药用部位的不同（银杏叶使用的药用部位是叶，淫羊霍为全草、黄芩为根茎），加工过程中提取溶剂和提取工艺的不同，加工过程中分离纯化工艺的亦不同，导致在实验中得到的结果略有差异，见表１提取条件的选择。
例如，银杏叶胶囊除含黄酮有效成分外，还含有难溶于水的萜类内酯有效成分，银杏叶既含有游离黄酮也含有黄酮苷，因此，不宜用水提取，经试验，用水煎煮提取３次，黄酮的提取率仅为４５％左右；用７０％乙醇回流提取２ｈ，７５％乙醇和无水乙醇超声提取３０ｍｉｎ，总黄酮提取率才可达９０％以上所以根据试验结果，对某一含总黄酮的具体成分而言，应根据所含黄酮的水溶性及其含量的多少，除黄酮外的其有效部分及其性质、所含蛋白质、鞣质、树脂等杂质的情况以及药材所属植物部位不同（全草、根、茎、叶）等具体情况综合选取提取溶剂，经以上筛选试验，最终获得最适宜的溶剂提取条件为，用无水乙醇超声提取３０ｍｉｎ。
３．４ 标准对照品的选择芦丁属黄酮类，带有明显的黄酮苷集团，是目前国际上最常用的标定总黄酮的标准对照品。
由于，总黄酮（Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）是具有苯骈吡喃环结构的一类天然化合物的总称，基本母核可认为是无苯基色原酮，一般都具有４位羰基，大多数以苷的形式存在且呈现黄色。
而其组分非常复杂，含有大量未知成分（目前还没有任何科学手段能对其全部组分进行测定）。
选用芦丁作总黄酮的标准对照品，是因为芦丁不但有较优的化学稳定性，且其组份与大多数总黄酮类化合物最为接近，其在光谱扫描中的特征吸收区与总黄酮类化合物也最为接近。
那么，在目前的科学手段还无法全部的测定总黄酮组分时，只能以选取一种最接近其组成的标准对照品来参照标定其含量。
所以，在本标准的制定中，我们选用芦丁作为标定总黄酮的标准对照品（本标准测定的总黄酮含量以芦丁计）。
３．５ 测定波长的选择由于黄酮类化合物中的３－羟基，４－羟基或５－羟基，４－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成稳定的红色络合物。
所以，对芦丁标准品、和含有总黄酮的保健品样品，经显色后进行紫外光谱分析扫描，如图１、图２、图３，由于总黄酮和保健品中组份都很复杂，可见在２７８ｎｍ～４４０ｎｍ处有较大干扰，所以选其最佳吸收峰为５０２ｎｍ。
表１ 提取条件的选择图１ 芦丁标准品紫外光谱扫描图图２ 银杏叶胶囊紫外光谱扫描图图３ 黄芩口服液紫外光谱扫描图３１３．６ 线性相关性、标准曲线配制、线性方程及相关系数确定标准溶液的配制方法，并配制不同浓度的标准溶液进行测定，画出不同浓度范围内的标准曲线，计算其相关系数。
３．６．１ 标准溶液的配制３．６．１．１ 标准溶液的配制方法（同２．１．１中ｈ）芦丁标准溶液的配制）３．６．１．２ 标准溶液的稳定性试验将浓度为１５０μｇ／ｍｌ的芦丁标准溶液，在０℃～４℃密封条件下保存，每次测定前取出，恢复到室温，吸取１ｃｍ与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成稳定的红色络合物，在５０２ｎｍ处进行吸光度测定（同２．２．３），与标准曲线相比较定量，并计算回收率，如表２。
结果表明，浓度为１５０μｇ／ｍｌ的芦丁标准溶液，在０℃～４℃密封条件下保存，最佳保存时间为两个月。
３．６．２ 标准工作曲线的配制及测定３．６．２．１ 对标准工作曲线配制条件的验证确定标准曲线的含量范围０μｇ～６００μｇ，取６００μｇ为测定峰值，分别确定亚硝酸钠、硝酸铝溶液 、氢氧化钠、乙醇加入的量对显色和测定的影响进行验证：①显色剂用量的选择及稳定性试验吸取１５０μｇ／ｍｌ的总黄酮标准溶液４ｍｌ于１０个１０ｍｌ比色管中，各加一定量的５％亚硝酸钠溶液，振摇后放置一段时间，加入一定量的１０％硝酸铝溶液，摇匀后放置一段时间，加一定量的１．０ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液，各加入３０％乙醇定容至刻度，以试剂空白为空白，摇匀后于５０２ｎｍ处用１ｃｍ比色杯测定其吸光值，如下表３。
