专性厌氧菌

ANAEROBIC/HYPOXEMIC WORKSTATION历史：所有这些罐子，其培养皿/样本操作均在有氧环境中进行，而仅在培养时才置于厌氧环境中。

ELECTROTEKELECTROTEK完善的厌氧培养技术始于适当的样本采集和运输。

适当地采集试样，并快速置于厌氧运输小瓶中ELECTROTEK厌氧罐由于不能提供操作过程的厌氧环境，并且因容量的限制而无法实现灵活的样本厌氧培养，故其应用也越来越受到限制。

一台允许所有操作与培养综合功能的厌氧工作站使厌氧菌实验避免了氧气暴露的风险。

因不当的制备或贮存，使培养介质含有氧气或氧化性物质，最终将抑制厌氧菌的生长。

任何时候都应当使用经预还原处理的厌氧培养介质。

ELECTROTEK专性厌氧菌培养最好是在经预还原处理且厌氧灭菌的培养基上（PRAS培养基）。

养肉汤。

预还原是指氧气通过培养基组分物质化学移除。

ELECTROTEK以下为常见的主要用于临床标本厌氧菌分离的培养基：1、布鲁氏菌血琼脂2、卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB琼脂）3、拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE琼脂）4、苯乙醇琼脂（PEA琼脂）5、硫乙醇酸钠肉汤ELECTROTEKELECTROTEK布鲁氏菌血琼脂：含有血细胞允许溶血试验，可使特定微生物快速生长非选择性培养基，所有厌氧菌均能很好生长同样，疾病预防控制中心的厌氧菌血琼脂也可被使用。

ELECTROTEK卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB ）：革兰氏阴性厌氧杆菌选择性培养基。

绝大多数的革兰氏阴性兼性厌氧杆菌被卡那霉素抑制，绝大多数革兰氏阳性菌被万古霉素抑制。

产色厌氧菌（如普雷沃菌属和卟啉单胞菌属）在KVLB 琼脂上产生许多色素。

ELECTROTEK 拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE ）：绝大多数厌氧菌被庆大霉素和胆汁抑制，只有脆弱拟杆菌群作为唯一的厌氧菌能在此琼脂上快速生长。

当细菌（如脆弱拟杆菌群）分解七叶甙而生长于此琼脂上时，将显现深棕色反应。

ELECTROTEK苯乙醇琼脂（PEA ）：该介质支持绝大多数专性厌氧菌生长且抑制兼性厌氧菌生长（如肠杆菌科），专性厌氧菌可呈弥漫性或过度生长。

好氧菌、微好氧菌、耐氧厌氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌好氧菌亦称需氧菌、需氧微生物。

在有氧环境中生长繁殖，氧化有机物或无机物的产能代谢过程，以分子氧为最终电子受体，进行有氧呼吸。

包括大多数细菌、放线菌和真菌。

进行有氧呼吸，但没有线粒体。

如：链霉素、红霉素，弗兰克氏菌微好氧菌性质：仅能在较低氧分压下正常生活的微生物。

正常大气的氧分压为0.2Pa，而微好氧菌仅生活在0.01～0.03Pa下。

例如发酵单胞菌属和弯曲杆菌属等。

如：醋杆菌属嗜酸菌属酸单胞菌属热酸菌属土壤单胞菌属产碱菌属交替单胞菌属氨基杆菌属(胺杆菌属)水螺菌属氮单胞菌属固氮根瘤菌属固氮菌属耐氧厌氧菌代表菌种为溶组织梭菌。

这类细菌不能利用氧，在无氧条件下生长好，而在有氧条件下生长不佳。

如：破伤风芽胞杆菌专性厌氧菌是指在无氧的环境中才能生长繁殖的细菌。

此类细菌缺乏完善的呼吸酶系统，只能进行无氧发酵，不但不能利用分子氧，而且游离氧对其还有毒性作用。

如破伤风杆菌、肉毒杆菌、产生荚膜杆菌等。

只能在没有游离氧存在的环境中生存的微生物。

甲烷菌即属此类细菌。

人们利用甲烷菌等产生沼气，利用厌氧菌处理各种有机废物和废水。

兼性厌氧菌又称兼嫌气性微生物，兼嫌气菌。

在有氧或无氧环境中均能生长繁殖的微生物。

在有氧（O2）或缺氧条件下，可通过不同的氧化方式获得能量。

如酵母菌在有氧环境中进行有氧呼吸，在缺氧条件下发酵葡萄糖生成酒精。

许多肠道细菌，如大肠杆菌等均属此类。

兼性厌氧菌兼有需氧呼吸和无氧发酵两种功能，不论在有氧或无氧环境中都能生长，但以有氧时生长较好。

大多数病原菌属于此。

第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。

致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。

感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。

适宜标本血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等不宜标本鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

产甲烷菌胡俊英 222010328210116动医二班摘要：产甲烷菌（Methanogenus），是专性厌氧菌，属于古菌域，广域古菌界，宽广古生菌门。

1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》（第八版）中将其归属于1科、3属、9种。

截至1992年已发展为3目、7科、19属、70种。

截至2009年已发展为4目、12科、31属。

1979年，Balch和Wolfe通过16S rRNA测序将产甲烷菌发展为3目（甲烷杆菌目、甲烷球菌目、甲烷微菌目）4科7属14种。

1993年，Boone将甲烷八叠球菌科上升为一个目，建立了火热产甲烷菌目，至此产甲烷菌发展为5目10科25属59种。

2001年，Bergey's Manual of Systematic Bacteriology将产甲烷菌放在宽广古生菌门（Euryarchaeota）中，至此产甲烷菌发展为3纲，5目，10科，26属，78种。

产甲烷菌属于古菌域（Archaea），广域古菌界（Euryarchaeon），宽广古生菌门（Euryarchaeota）。

关键词：产甲烷细菌，厌氧分离技术，产甲烷作用产甲烷菌（Methanogenus），是专性厌氧菌，属于古菌域，广域古菌界，宽广古生菌门。

1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》（第八版）中将其归属于1科、3属、9种。

截至1992年已发展为3目、7科、19属、70种。

截至2009年已发展为4目、12科、31属。

1979年，Balch和Wolfe通过16S rRNA测序将产甲烷菌发展为3目（甲烷杆菌目、甲烷球菌目、甲烷微菌目）4科7属14种。

1993年，Boone将甲烷八叠球菌科上升为一个目，建立了火热产甲烷菌目，至此产甲烷菌发展为5目10科25属59种。

2001年，Bergey's Manual of Systematic Bacteriology将产甲烷菌放在宽广古生菌门（Euryarchaeota）中，至此产甲烷菌发展为3纲，5目，10科，26属，78种。

厌氧性细菌及检验考点总结一、厌氧菌概述概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

分类：据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

二、厌氧菌感染（一）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型1.厌氧菌在正常人体的分布正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。

厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。

其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。

重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道芽胞菌革兰阳性杆菌梭状芽胞杆菌属0 0 ±＋＋±±无芽胞菌革兰阳性杆菌乳杆菌属0 0 ＋＋＋±＋＋双歧杆菌属0 0 ＋＋＋0 ±优杆菌属±±＋＋＋0 ±丙酸杆菌属＋＋＋＋＋＋？±放线菌属0 ±＋＋＋0 0无芽胞菌革兰阴性杆菌类杆菌属0 ＋＋＋＋＋梭杆菌属0 ＋＋＋＋＋±普雷沃菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋紫单胞菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋无芽胞菌革兰阳性球菌消化球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋消化链球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋2.外源性感染梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。

3.内源性感染无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

（二）临床意义1.厌氧菌感染的危险因素1）组织缺氧或氧化还原电势降低。

双歧杆菌的培养和分离双歧杆菌是专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，双歧杆菌的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。

双歧杆菌的最适生长温度37℃~41℃，最低生长温度25℃~28℃，最高43℃~45℃。

初始最适pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生长。

其细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。

单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。

革兰氏阳性，不抗酸，不形成芽孢，不运动。

双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地。

双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌，定殖于肠道内，是肠道的优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92%。

该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。

该菌可以在肠粘膜表面形成一个生理性屏障，从而抵御伤寒沙门氏菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡；能激活巨噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力；能合成B族维生素、烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。

双歧杆菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。

本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管内的菌都不会干扰厌氧条件。

近年来兴起的一种新的RAPD等分子生物学技术对双歧杆菌进行基因指纹图谱的构建，分析不同双歧杆菌种间存在的同源性和多态性；RAPD技术也可用于双歧杆菌菌种鉴定及分型。

一般来讲，我们都应用适合鉴定所有厌氧菌的方法，主要包括双歧杆菌特定酶的检测、乙酸、乳酸等有机酸的测定、糖发酵试验和其他相关指标等。

Forma厌氧工作站在纯生啤酒微生物检测方面的应用福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司技术质量部孙黎琼【摘要】在纯生啤有害菌检测中，厌氧菌是一个十分重要的指标。

如何正确选择厌氧菌培养装置，有效控制纯生啤微生物，是纯生啤微生物检测的关键之一。

【关键词】厌氧菌厌氧工作站啤酒检测随着啤酒生产技术的发展，纯生啤酒的生产越来越普遍，纯生啤微生物控制不再单纯是细菌总数、大肠菌群两个指标的检测控制，厌氧菌是控制纯生啤的一个重要指标。

按照微生物与氧的关系可以把微生物分为专性好氧菌、兼性厌氧菌、微好氧菌、耐氧菌、专性厌氧菌。

对于啤酒来说较有害的为后四类，因为它们都可以在啤酒的微氧或无氧的环境中生长，也是我们实验室检测的重点。

培养厌氧菌首先需要特殊的培养装置。

目前大概有交层琼脂柱、Hungate滚管技术、厌氧培养皿、厌氧罐与厌氧工作站等几种厌氧培养装置。

我公司使用的是Forma公司的厌氧工作站。

1、厌氧工作站简介厌氧工作站（Anaerobic System），主要由培养室和隔离室两部分组成（如图1）。

培养室为严格的无氧环境。

操作时把样品放在隔离室内，经过3次抽真空、2次充氮气、1次混合气体（N2/CO2/H2 ，85/5/10）制造无氧环境。

然后打开内门把样品放入培养室培养。

微量的氧气是在钯的催化下使氧气与氢生成水，然后被干燥剂吸收。

厌氧工作站示意图12． Forma厌氧工作站的优点2．1 厌氧工作站使培养专性厌氧菌成为可能。

专性厌氧菌是一种危害很大的啤酒有害菌。

它只有在其深层的无氧或低氧化还原势的环境下才能生长。

即使短期接触空气也会抑制其生长甚至致死。

对于厌氧工作站来说，样品从隔离室进入培养室只需要几分钟。

厌氧罐是通过反应袋反氧除掉而达到厌氧环境，而使用反应袋制造无氧环境需要150分钟以上。

所以对于专性厌氧菌来说，厌氧工作站的培养环境优于厌氧罐，能准确地把专性厌氧菌检测出来，这对纯生啤的微生物控制是非常重要的。

取几瓶已发生生物混浊的瓶装啤酒，分别取1ml于NBB-A培养基平板中，同一试样分别置厌氧工作站和厌氧罐中培养5天观察，结果见表1从表1可以看出：同一试样，在厌氧工作站检测的厌氧菌数往往高于厌氧罐。

第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。

致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。

感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

厌氧菌的鉴定程序1 概述厌氧菌是一大群专性厌氧菌群，必须严格无菌环境才能生长。

主要分为两类：一类是革兰阳性有芽胞的厌氧梭菌，另一类是无芽胞的革兰阳性和阴性的球菌和杆菌。

大部分无芽胞厌氧菌为条件致病菌，所引起的感染可遍及临床各科和人体各部位，在人体寄居的厌氧菌比需氧菌在数量上占有明显的优势。

2 分类包括革兰阴性球菌和杆菌及革兰阳性球菌和杆菌。

分类主要依据形态、革兰染色、鞭毛、芽胞、荚膜及终末代谢产物来判断。

2.1 革兰阳性厌氧球菌主要包括消化球菌属和消化链球菌属；其镜下形态分别为圆形或卵圆形，排列成双，成链状，黑色消化链球菌排列常呈不规则。

在厌氧血琼脂平板上形成细小不溶血菌落。

生长温度范围25～38℃，最适生长温度为 35～37℃.生长缓慢，一般需要培养 48h 才能形成肉眼可见的小菌落。

在硫乙醇酸盐肉汤中呈现沉淀或絮状，但不浑浊。

2.2 革兰阴性厌氧球菌主要包括韦荣球菌属、氨基酸球菌属、巨球菌属等。

其中韦荣球菌属最为常见，与人体有关的有小韦荣球菌、齿蚀韦荣菌、不典型韦荣球菌和殊异韦荣球菌。

此处仅介绍韦荣球菌属。

韦荣球菌属镜下呈成双、聚集不规则及短链状排列，无动力，厌氧生长，最适温度 30～37℃。

该菌属氧化酶试验阴性，触酶试验不定，不分解碳水化合物，分解乳酸盐产生乙酸盐、丙酸盐、CO2 和 H2，培养时需 CO2才能生长。

初步鉴定根据菌落和镜下形态、革兰染色、对特定抗生素的敏感性和某些快速生化试验；确切鉴定包括糖类发酵试验和气相色谱技术。

该菌属特点为革兰阴性球菌，对多粘菌素和卡那霉素敏感，对万古霉素耐药，还原硝酸盐为亚硝酸盐；在厌氧血琼脂平板上菌落形态为细小、圆形、凸起、灰白色，可初步推断为韦荣球菌属。

2.3 厌氧革兰阴性无芽胞杆菌与人类致病性相关的只要包括拟杆菌属和梭杆菌属，拟杆菌属和梭杆菌属均为革兰阴性杆菌，拟杆菌为短小的规则杆菌，而梭杆菌为细长的梭形杆菌，均不产生芽胞，不能进行有氧代谢，严格无氧环境生长。

专性厌氧菌名词解释
专性厌氧菌指的是一类只能在完全缺氧的环境下生存和繁殖的微生物。

这些菌群对氧气敏感，无法使用氧气进行呼吸。

相反，它们通过使用无氧化合物，如硫化物、二氧化碳、硝酸盐等进行代谢来获得能量。

专性厌氧菌有很广泛的分布，可以在土壤、深海、沼泽、污泥等环境中找到。

它们在生态系统的物质循环和能量流动中起到重要的作用。

另外，一些专性厌氧菌还可以协助其他微生物完成复杂的生态过程，如互利共生、共同降解有机废物等。

专性厌氧菌根据它们利用的无机化合物的种类和代谢特点可以分为不同的类型。

例如，硫酸盐还原菌利用硫酸盐进行呼吸作用，产生硫化氢。

硝酸盐还原菌则利用硝酸盐代谢产生氮气。

此外，还有一类称为甲烷菌的专性厌氧菌，它们能够利用二氧化碳和氢气产生甲烷气体。

专性厌氧菌对环境中的有机物质降解有着重要的贡献。

在缺氧环境中，它们可以降解有机物质，并将其转化为二氧化碳、甲烷等无机物质，从而完成有机物质的循环。

这对于维持环境的健康状态和生态平衡具有重要意义。

除了在自然环境中的作用，专性厌氧菌还对一些工业过程具有应用潜力。

例如，在污水处理中，专性厌氧菌可以利用有机废水进行降解，减少有机物质的排放量。

此外，在生物能源的开发中，甲烷菌的产甲烷能力也可以被利用来生产可再生能源。

总之，专性厌氧菌是一类只能在无氧环境中生存和繁殖的微生物。

它们通过利用无氧化合物代谢来获得能量，并在物质循环和能量流动中起到重要作用。

了解这些菌群的生态特征和应用潜力有助于我们更好地理解和利用微生物的作用。