小鼠染色体的制备观察染色

科目细胞生物学实验题目小鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名***系年级2011级生物基地学号*** 同组者***日期2013/05/23、302013/05/30小鼠染色体标本的制作、染色与观察【实验目的】1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。

【实验原理】凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。

在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。

给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2.用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。

主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

【实验材料】1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液。

2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等。

动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。

实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。

染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。

在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。

为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。

实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。

2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。

3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。

4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。

5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。

实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。

通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。

同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。

结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。

观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。

同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。

题目：小鼠细胞染色体染色观察一．O bjectives:1.Learn the method of preparation of mouse chromosome frommarrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。

2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。

二．实验原理1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。

纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。

易溶于水、乙醇和氯仿。

味苦，有毒。

秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。

这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。

在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。

2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。

固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。

活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。

三．实验材料及设备1.实验材料：a)秋水仙素稀释液b)小鼠一只c)75mM KCl低渗溶液d)固定液e)Giemas染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器。

c)酒精灯d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。

2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。

3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。

4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。

5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，1000r/min离心8分钟6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。

2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。

简述小鼠染色体制备的流程小鼠染色体制备。

选只小鼠，得挑健康的，不能是病怏怏的那种。

然后，得给它打麻药，让它舒舒服服地睡一觉。

这样咱们就能轻松取得细胞了。

取细胞这活儿，得迅速。

从骨髓或者脾脏里取，这得看实验需求。

取出来后，咱们得让细胞在低渗环境里待会儿，这样染色体就能胀大，看得更清楚。

然后，用固定液固定一下，这样细胞形态就稳定了。

接下来，就是染色和观察了。

用专门的染料给染色体上色，让它们变得五彩斑斓的。

然后，在显微镜下瞅瞅，看看这些染色体长啥样，数数有多少个。

这可得细心点，不能漏看了。

说起来，小鼠染色体制备这事儿，看着简单，其实挺考验技术的。

得选对小鼠，还得会取细胞、染色、观察。

不过，只要技术到位，就能得到清晰的染色体，为后面的研究打好基础。

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。

2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。

骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。

3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。

注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。

秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。

2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。

3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。

低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。

4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。

【实验题目】染色体标本制作与察看【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，认识各操作步骤的原理。

2、认识常用实验动物染色体的数目及特色。

3、认识不一样生物染色体的特色，学会做染色体组型图。

【实验资料与用品】器械：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心计、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等资料：小鼠试剂：蒸馏水、%NaCl溶液、%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件细胞拥有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）想法获得大批的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。

真核细胞染色体的数目和构造是重要的遗传特征之一。

制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优秀的染色体系片是进行染色体显带、组型剖析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上能够从全部发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中获得。

最常用的门路是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培育的细胞中制备染色体。

本实验采纳的方法是从小鼠的睾丸细胞中获得。

染色体的形态构造在细胞增殖周期中是不停的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨识和划分。

所以，制备染色体标本获得的是中期细胞。

染色体特色：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒地点（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和地点、带型剖析描绘染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。

②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数能够用来确立臂的长度。

③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数能够决定着丝粒的相对位置。

④染色体臂数（NF），依据着丝粒的地点来确立。

三、操作原理小型动物的染色体系片最好最有效的资料就是骨髓组织（因为分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术固然需要离心以及仔细的操作，但基本程序其实不复杂。

小鼠染色体标本制作、染色及观察小鼠是生产药物和进行基因研究的重要实验动物之一。

了解其染色体特征和行为对于生物学和医学研究非常重要。

本文将介绍如何制作小鼠染色体标本，以及染色和观察的步骤。

制作小鼠染色体标本需要使用小鼠肺部组织。

以下是制作步骤：1. 首先将小鼠处死，取出肺部组织并剪成小块。

2. 将肺组织移入一个离心管中，并添加10毫升10％KCl溶液。

3. 用注射器向管中注入溶液，轻轻摇动以使组织浸泡在KCl中。

4. 将溶液和组织离心5分钟，然后倒掉上层液体。

5. 用少量冰冷等渗氨水将沉淀悬浮并再次离心。

6. 倒掉上层液体，重复该步骤直到样品中不含有明显的碎片和其他杂质。

7. 最后，在离心管中滴加10毫升3：1（甲醇：冰醋酸）混合液，并轻轻混合。

8. 将混合液沿离心管壁滴加，使其缓慢地沉淀到底部。

变态反应需要放置在-20°C 的60分钟以上。

9. 滴掉液体，并用75％乙醇固定沉淀。

染色将固定的小鼠染色体标本染色需要的材料如下：1. 铬酸盐染液2. 蒸馏水3. 复方玫瑰红4. 静电纸和制作装置染色步骤如下：1. 将铬酸盐染液溶解在蒸馏水中（比例为1：3），搅拌混合。

2. 将小鼠染色体标本放在静电纸上，用制作装置连接到正离子极板上。

3. 用玫瑰红溶液覆盖标本，使其均匀覆盖。

4. 将正极板移动到离开标本1-2厘米的位置，并接通电源。

5. 在2-5分钟内，染色体将升起并接触到铬酸盐染液，染色体将呈现出不同的条纹状。

观察1. 显微镜2. 移相仪1. 将小鼠染色体标本放在显微镜上，并使用20倍至100倍的放大倍数进行观察。

2. 用相机或移相仪将图像捕捉下来以进行记录和分析。

总结小鼠染色体标本制作、染色和观察需要精细的技术和专业知识。

掌握这些技能对于研究小鼠染色体特征和行为非常重要。

希望本文的介绍有助于读者理解有关小鼠染色体标本制作、染色和观察的相关知识。