小鼠精巢细胞减数分裂标本制备与观察

— 435 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.42 No.5 2019 解剖学杂志 2019年第42卷第5期* 2018年甘肃省高校科研基金项目（2018A-144，2018A-146） 第1作者E-mail ：wmxie2014@△通信作者，E-mail ： 2531295072@收稿日期：2019-03- 27；修回日期：2019-06-26doi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.05.001·论 著·小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别*谢文美 周凤娟△ 王 强 赵小荣 朱春燕（甘肃医学院，1 遗传病研究室，2 基础医学院生物教研室，平凉 744000）摘要 目的：识别鉴定哺乳动物小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相细胞。

方法：结合减数分裂过程染色体变化及秋水仙素抑制纺锤体形成原理，分析观察改良制作小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体标本，比较各时期细胞及染色体形态变化。

结果：鉴定出小鼠减数分裂第1次分裂、第2次分裂及精子形成过程各细胞形态特征图谱，并详细解析了识别各时期细胞染色体构型变化要点，同时也简要阐述了秋水仙素的应用对识别细胞各时相染色体的影响。

结论：小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体变化复杂，建立完整的清晰图谱可为减数分裂课程教学及染色体异常研究提供参考。

关键词 减数分裂；秋水仙素；染色体；性泡；小鼠Identification of the meiotic events in mouse spermatogenesis *Xie Wenmei ，Zhou Fengjuan △，Wang Qiang ，Zhao Xiaorong ，Zhu Chunyan（1. Laboratory of Genetic Disease ，2. Department of Basic Medical Science ，Gansu Medical College ，Pingliang 744000，China ）Abstract Objective ：To identify the chromosomal behavior characteristics of meiotic events in mouse spermatogenesis. Methods ：The chromosome changes of the mouse germ cells in meiosis were systematically observed by modified methods of germ cells in mice based on the changes of chromosome in meiosis process and the inhibition of spindle formation by colchicine. Results ：All the morphological characteristics of cells in the first division ，second division and sperm formation of mice were established ，and the main changes of cell chromosome configuration were analyzed. The effects of colchicine on cells to identify the chromosome changes were briefly described. Conclusion ：The establishment of complete and clear cell map in meiosis in mouse spermatogenesis provides reference for the teaching of meiosis course and the study of chromosome abnormalities.Key words meiosis ；colchicine ；chromosome ；sex body ；mouse减数分裂过程中不同时相染色体变化复杂，染色体减数分裂异常也是许多人类遗传病发生的主要原因之一。

小白鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名：学号：实验时间：1.实验目的（1）初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

（2）了解常用实验动物染色体的数目及特点。

（3）认识不同生物染色体的特征。

2.实验原理凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，均可用于染色体分析。

在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。

给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。

主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

3.实验材料和用品（1）材料：小白鼠（2）试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液（3）器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等4.实验步骤（1）小白鼠染色体标本制作①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。

Isolation and staining of mouse meiotic metaphasechromosomes小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa.学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes观察小鼠染色体的数目及形态特征【实验材料】【Reagents】秋水仙素colchicine solution吉姆萨染液Giemsa stains solution生理盐水physiological saline氯化钾溶液KCl solution固定液fixation solution【Tools and equipments】Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh.解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网【实验原理】meiosis is a process of reductional division in which the number ofchromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。

实验二减数分裂的制片与观察PB12210261 徐导中国科学技术大学生命科学学院【摘要】本实验选取玉米雄花作为实验材料，首先将已固定好雄花的花药剥离出来，然后通过对花粉母细胞进行解离、染色、压片来观察细胞减数分裂的全过程。

【关键词】减数分裂细线期偶线期粗线期双线期终变期【Abstract】In this experiment, we chose Zea mays as the material. We got a lot of cells in meiosis. Then we disposed the cells in order to observe the whole processes of the meiosis.【Key words】Meiosis leptonema zygonema pachynema diplonema diakineses【实验部分】一、实验目的1、了解植物生殖细胞的形成过程；2、熟悉减数分裂各时期的特点，加深对减数分裂的认识；3、掌握植物花粉母细胞的压片技术和方法。

二、基本原理减数分裂（meiosis）,又称成熟分裂（maturation division）是在性母细胞成熟时，配子形成过程中所发生的一种特殊方式的有丝分裂。

性母细胞（2n）连续进行两次核分裂（第一次分裂和第二次分裂），形成四个染色体数目减半的配子(n)。

经过受精，雌雄配子（n）融合为合子，又恢复了体细胞染色体数目（2n）。

确保了亲代与子代间染色体数目的恒定性，从而保证了物种相对的遗传稳定性。

在适当的时候采集植物的花蕾制备染色体标本就可在显微镜下观察到植物细胞的减数分裂。

整个减数分裂可分为下列各个时期：第一次分裂前期Ⅰ减数分裂的特点之一就是前期Ⅰ特别长，而且又较复杂。

通常根据细胞核内结构变化特征又将这一期分成五个时期，即细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。

细线期（leptotene）：这是减数分裂的开始时期，染色质开始浓缩为细而长的丝状，首尾不分，且细线局部可见到念珠状颗粒，即染色粒。

小鼠细胞分裂标本的制备与观察一、实验目的a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。

b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。

c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。

二、实验原理a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。

减数分裂远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ，两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。

b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化成精子。

c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期的标本。

三、实验试剂及仪器a)材料：成年雄性小白鼠b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、离心管、离心机、玻片等。

c)试剂：1、100μg/ml秋水仙素。

2 、2％柠檬酸钠溶液3、 0.075M的KCI4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液6、Gimesa原液7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓冲液，混匀。

工作液应现用现稀释。

四、实验步骤a)细胞收集i.小鼠精巢细胞收集1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。

(试验前4－5小时，小鼠腹腔注射秋水仙素0.5ml（100μg/ml）。

2.取睾丸并清洗。

断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞外脂肪等物。

3.挑出曲细精管并剪碎。

弃污液，另加柠檬酸钠溶液1 ml，用尖头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。

4.游离并收集细胞。

一、实验目的1. 了解减数分裂的基本过程和特点；2. 观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段；3. 分析减数分裂过程中染色体的行为变化。

二、实验原理减数分裂是有性生殖过程中的一种特殊细胞分裂，其主要目的是将一对同源染色体分离，从而产生具有遗传多样性的配子。

在减数分裂过程中，染色体经历了两次分裂，形成了四个单倍体的配子。

本实验通过观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段，了解减数分裂的过程和特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：小白鼠睾丸组织、生理盐水、70%酒精、卡诺氏固定液、Hoechst33342染液、显微镜等；2. 实验仪器：解剖显微镜、显微镜、离心机、冰箱等。

四、实验方法与步骤1. 小白鼠处死，取出睾丸；2. 将睾丸放入生理盐水中清洗，去除多余组织；3. 将清洗后的睾丸放入70%酒精中固定，放置4℃冰箱过夜；4. 将固定好的睾丸取出，放入卡诺氏固定液中浸泡，放置4℃冰箱过夜；5. 取出睾丸，制成切片；6. 将切片放入Hoechst33342染液中染色，室温放置30分钟；7. 将染色后的切片取出，用蒸馏水清洗，去除多余染液；8. 将切片放入显微镜下观察，记录减数分裂各个阶段染色体的行为变化。

五、实验结果与分析1. 早期减数分裂（减数分裂I前期）在早期减数分裂阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。

同源染色体开始配对，形成四分体。

本阶段观察到的染色体行为有：染色体凝缩、同源染色体配对。

2. 中期减数分裂（减数分裂I中期）在中期减数分裂阶段，同源染色体排列在赤道板上。

此时，染色体行为有：染色体排列在赤道板上、同源染色体分离。

3. 晚期减数分裂（减数分裂I后期）在晚期减数分裂阶段，同源染色体分离，分别移向两极。

此时，染色体行为有：同源染色体分离、染色体移向两极。

4. 早期减数分裂（减数分裂II前期）在早期减数分裂II阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。

此时，染色体行为有：染色体凝缩。

5. 中期减数分裂（减数分裂II中期）在中期减数分裂II阶段，染色体排列在赤道板上。

姓名系年级组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察一．实验目的1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。

2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。

3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。

二．实验原理（一）染色体染色体是基因的载体。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。

制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。

本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。

因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。

染色体特征：1.数目（2n=？）2.长度（绝对长度、相对长度）3.着丝粒位置（M/SM/ST/T）4.随体与次溢痕的数目、大小和位置5.带型分析（二）操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。

利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。

在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。

通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。

用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。

由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。

哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。

课程教学C ur r i cul um T e ac hi ng 爝煎逦尉动物遗传学教学实验‘q、鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作，方法改进的研究张燕军赖双英苏蕊张文广(内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018)摘要“减数分裂期染色体制备实置F’是动物遗传学实验课程重要内容。

本文介绍了小鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作的改进方法，通过本方法可制备和观察到大量分散良好、背景清晰、染色体结构紧凑的睾丸细胞减数分裂各期分裂相，得到较好的实验效果。

关键词动物遗传学睾丸细胞减数分裂染色体改进中图分类号：G424文献标识码：AA ni m al G enet i cs T eachi ng Exper i m ent’’M ous e Tes t i s M ei ot i cC hr om os om e Speci m en’’M et hods I m pr ovem entZ H A N G Y anj un，L灿Shuangyi ng，SU R ui，Z H A N G W enguang(C ol l ege of A ni m al Sci e nce，I n ner M ongol i a A gr i cul t ur al U ni ve r s i t y,H ohhot，I nne r M ongol i a010018)A bs t r ac t’’P r epa ra t i on of m ei ot i c cl l r om os om es e xper i m e nt”i s al l i m port a nt pa r t of ani m al ge net i c s experi m ent cour se．Thi sar t i cl e des cr i bes t he m ous e t est i s m ei ot i c chr om os om e s peci m en of t he i m pr o ved m et hod，can be prepar ed by t hi s m e t hod and obs erved a l ar ge num be r of w el l—di sper s ed，cl ea r backgr ound，com pact t es t i cul ar m ei ot i c cl l r om os om e st r uct ur e of e ach phas e of t he di vi s i on，ge t be t t e r ex per i m ent al r es ult s．K ey w or ds ani m al gen et i cs；t est i cul a r cel l s；m ei osi s；cl l r om os om e；i m pr ovem ent遗传学既是一门历史悠久的学科，又是一门发展迅速、实践性很强的学科，研究范围正在不断拓宽和深化，新技术、新方法不断涌现。

小鼠细胞减数分裂标本的制作遗传学教材中，一般是用蝗虫做动物减数分裂实验材料的。

本文介绍一种用雄性小鼠细胞制作减数分裂标本的方法，整个制作过程用时较短，方法也很简单，一般生物教学实验室都能完成。

1.方法和步骤（1）选雄性成年小鼠1只，腹腔注射秋水仙素溶液（约2 μg/g体重）。

2～3h后处死动物，立即取出睾丸，洗净血液，剪开白膜，夹出曲精细管，放入盛有10mL 2% 枸缘酸钠溶液的研钵内。

（2）用剪刀将曲精细管剪成1mm左右的短管，随即适度研磨8min左右，倒入离心管，300 r/min离心3min，吸取中层细胞悬液3～5 mL，弃去组织块沉淀。

加入3～5mL蒸馏水，置37 ℃水浴中低渗处理15～20 min。

（3）800 r/min离心5 min，吸去上清，留细胞沉淀。

加入新鲜配制的3∶1甲醇冰醋酸固定液3～5 mL，固定20 min，其间用小吸管慢慢将细胞团轻轻打散。

（4）500 r/min再将离心5 min，弃上清液留细胞沉淀，另加上述固定液1～2 mL，制成较浓的细胞悬液。

（5）取预冷洁净玻片，滴1滴细胞悬液，立即用口吹散细胞，酒精灯上微热烤干。

用Giemsa染液（Giemsa染液用pH6.8的磷酸缓冲液稀释，每1 mL加1滴Giemsa母液制成）染色5～10 min，自来水洗3～5次，晾干后置于显微镜下仔细观察各期染色体情况（2n＝40）。

2.注意事项（1）研磨睾丸组织时，速度和用力一定要适度。

速度太快或用力过大，细胞易破裂；用力不足或速度太慢，不能将细胞从曲精细管中压出来。

（2）在染色时必须将材料面朝下，放在玻璃上，中间垫两个牙签，用滴管将染液从旁边滴进去。

这样可以防止染料沉淀在载玻片上影响观察。

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细胞减数分裂标本制备与观察实验心得减数分裂标本的制作与观察.txt世上最珍贵的不是永远得不到或已经得到的，而是你已经得到并且随时都有可能失去的东西！爱情是灯，友情是影子。

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实验四减数分裂标本的制作与观察一、实验目的通过本实验，掌握减数分裂标本的制作方法，观察减数分裂过程中染色体的动态变化。

了解减数分裂在遗传学中的意义和重要性。

二、实验原理减数分裂是配子形成过程中所特有的细胞分裂方式。

减数分裂过程中，染色体只复制一次，核分裂两次，形成的配子中染色体的数目变为原来的一半，雌、雄配子的结合就保证了染色体数目的恒定。

在分裂过程中可以辨认染色体形态和数量上的动态变化，从而为遗传学研究中远缘杂中的分析、染色体工程中的异系鉴别，常规的组型分析以及三个基本归路的论证，提出了直接与间接的依据。

三、实验材料、用具和药品1. 材料植物花及花序，性成熟的蝗虫2．用具显微镜、剪刀、镊子、单面刀片、载玻片、盖玻片等3．药品卡诺氏固定液、醋酸洋红染色液四、实验步骤（一）花药涂压法1. 取材：选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键步骤，减数分裂时的植株形态和花蕾的大小，依植物种类和品种不同，须经过实践记录，以备后来参考。

通常应从最小的花蕾起试行观察，在花冠现色和花药变黄（或红、紫）之前为好。

凡是白天开花的，可在上午7—10时固定。

2. 固定：卡诺固定液中固定2-24h。

固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。

3. 染色与压片：1）取固定好的花蕾置载玻片上，吸去多余的保存液，用解剖刀及刀片解剖出一个花药，视花药大小横切为3—4段（纵切）。

2）加一滴染液，用解剖针轻压花药，使花粉母细胞从切口出来，静置染色5~10分钟，此时可从不同大小的花中连续取出几个花药，进行同样的染色处理。

3）依次将载玻片在酒精灯上来回移动几次轻微加热，同时用解剖针轻微拨动花药以促进着色，进一步去除残存的花药壁，滤纸吸去多余染液。

[计划]实验七小鼠染色体制备与观察小鼠染色体制备与观察【实验目的】1. 了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。

2. 初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。

3. 观察动物细胞染色体的数目和形态。

【实验原理】染色体是遗传物质的载体，它具有种属特异性，通常不同物种以不同亚种的核型是不同的。

通过对各种动物染色体核型的研究可以丰富物种的信息系统，对了解物种的遗传变异进化以及物种的分类均有一定的意义。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。

制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。

小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。

骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或、其它组织那样要经过体外培养;对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点:1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处;2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上;3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

制作染色体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能力选择活跃的组织:胸腺，骨髓，睾丸，小肠施加药物使细胞分裂:PHA2. 设法得到大量的中期细胞:秋水仙素A( PHA:粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞B( 秋水仙素:破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。

C( 低渗作用:水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开D( 空气干燥:使细胞和染色体展开E(固定:用甲醇:冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

— 104 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.2 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第2期两种小鼠生精细胞染色体制备方法的探讨与评价*卢文亮 孟卫京 薛春梅 杨 静 宁伟霞 毛国丽 郭兴萍△（山西省生殖科学研究所，太原 030006）摘要 目的：比较改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法制作小鼠生精细胞减数分裂中期染色体标本的优劣。

方法：选用8~12周龄雄性Balb/c 小鼠，分别采用改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法进行减数分裂中期染色体制备，并用Giemsa 染色。

光镜下观察小鼠生精细胞减数分裂不同阶段分裂相细胞染色体形态并计数，计算各分裂相细胞的检出率。

结果：体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法对生精细胞减数分裂中期染色体核型的检出率分别为10.37%和6.46%。

秋水仙素处理小鼠的最适浓度是4 mg/kg ，体内注射秋水仙素制备法制得的核型分裂相比空气干燥直接制备法多，直接制备法得到的染色体核型边缘清晰，更便于计数。

结论：体内注射秋水仙素制备法的优势在于核型分裂相多，而空气干燥直接制备法的优势在于染色体核型边缘清晰，更便于计数，可根据不同实验需求进行选择。

关键词 生精细胞；减数分裂；标本制备；小鼠Discussion and evaluation on chromosome preparation methodsof spermato genic cells in two groups of mice *Lu Wenliang ， Meng Weijing ， Xue Chunmei ， Yang Jing ， Ning Weixia ， Mao Guoli ， Guo Xingping △（Shanxi Institute of Reproductive Science ， Taiyuan 030006， China ）Abstract Objective ： To compare the advantages and disadvantages of the modified colchicine injection and the direct air drying methods for preparing meiotic metaphase chromosome of mouse spermatogenic cells. Methods ： Male Balb/c mice aged 8 to 12 weeks were used to prepare meiotic metaphase chromosomes by the modified colchicine injection and air drying ， respectively ， and stained with Giemsa. Under light microscope ， the chromosome morphology was observed and the mitotic phase cells were counted at different stages of meiosis in spermatogenic cells ， and the rate of cells in each phase was calculated. Results ： The detection rate of chromosome karyotypes in meiotic metaphase of spermatogenic cells by two methods was 10.37% and 6.46% respectively. The optimum concentration of colchicine for the mice was 4 mg/kg ， and the karyotype obtained by injection of colchicine in vivo was more than that by direct preparation. The chromosome karyotype obtained by direct preparation had clear edges and was easier to count. Conclusion ： Colchicine injection in vivo can obtain more karyotypes ， while air drying direct preparation can obtain clear chromosome karyotype edge ， which is easier to count ， and can be selected according to the different experimental requirements.Key words germ cell ； meiosis ； specimen preparation ；mousedoi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.02.003·论 著·*山西省卫生健康委科研项目（2019004）第1作者E-mail ：*****************△通信作者，E-mail ：***************收稿日期：2020-07-16；修回日期：2020-11-15生精细胞减数分裂期染色体分析是遗传学、组织学胚胎学、细胞生物学和生殖生物学研究的重要手段[1-2]。

细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。

2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。

染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。

（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。

（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。

②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。

我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。

在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。

③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。

PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。

与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。

可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。

④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。

科目细胞生物学实验题目小鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名***系年级2011级生物基地学号*** 同组者***日期2013/05/23、302013/05/30小鼠染色体标本的制作、染色与观察【实验目的】1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。

【实验原理】凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。

在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。

给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2.用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。

主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

【实验材料】1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液。

2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等。