小鼠染色体的制备观察、染色

【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。

【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。

制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。

本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。

因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。

染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。

②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。

③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。

④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。

三、操作原理小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。

小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。

染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。

本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。

1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。

（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。

取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。

（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。

（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。

待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。

2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。

裂解时间一般为5-10分钟。

（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。

对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。

（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。

使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。

3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。

（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。

观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。

（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。

总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。

题目：小鼠细胞染色体染色观察一．O bjectives:1.Learn the method of preparation of mouse chromosome frommarrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。

2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。

二．实验原理1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。

纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。

易溶于水、乙醇和氯仿。

味苦，有毒。

秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。

这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。

在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。

2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。

固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。

活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。

三．实验材料及设备1.实验材料：a)秋水仙素稀释液b)小鼠一只c)75mM KCl低渗溶液d)固定液e)Giemas染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器。

c)酒精灯d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。

2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。

3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。

4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。

5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，1000r/min离心8分钟6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。

[计划]实验七小鼠染色体制备与观察小鼠染色体制备与观察【实验目的】1. 了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。

2. 初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。

3. 观察动物细胞染色体的数目和形态。

【实验原理】染色体是遗传物质的载体，它具有种属特异性，通常不同物种以不同亚种的核型是不同的。

通过对各种动物染色体核型的研究可以丰富物种的信息系统，对了解物种的遗传变异进化以及物种的分类均有一定的意义。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。

制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。

小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。

骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或、其它组织那样要经过体外培养;对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点:1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处;2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上;3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

制作染色体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能力选择活跃的组织:胸腺，骨髓，睾丸，小肠施加药物使细胞分裂:PHA2. 设法得到大量的中期细胞:秋水仙素A( PHA:粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞B( 秋水仙素:破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。

C( 低渗作用:水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开D( 空气干燥:使细胞和染色体展开E(固定:用甲醇:冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。

2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。

简述小鼠染色体制备的流程小鼠染色体制备。

选只小鼠，得挑健康的，不能是病怏怏的那种。

然后，得给它打麻药，让它舒舒服服地睡一觉。

这样咱们就能轻松取得细胞了。

取细胞这活儿，得迅速。

从骨髓或者脾脏里取，这得看实验需求。

取出来后，咱们得让细胞在低渗环境里待会儿，这样染色体就能胀大，看得更清楚。

然后，用固定液固定一下，这样细胞形态就稳定了。

接下来，就是染色和观察了。

用专门的染料给染色体上色，让它们变得五彩斑斓的。

然后，在显微镜下瞅瞅，看看这些染色体长啥样，数数有多少个。

这可得细心点，不能漏看了。

说起来，小鼠染色体制备这事儿，看着简单，其实挺考验技术的。

得选对小鼠，还得会取细胞、染色、观察。

不过，只要技术到位，就能得到清晰的染色体，为后面的研究打好基础。

小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。

染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。

染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。

②整倍性改变：染色体成倍增加。

☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。

3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。

4.无着丝点环：成环状结构。

5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。

检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。

☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。

G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。

端着丝粒染色体。

小鼠染色体标本制作、染色及观察小鼠是生产药物和进行基因研究的重要实验动物之一。

了解其染色体特征和行为对于生物学和医学研究非常重要。

本文将介绍如何制作小鼠染色体标本，以及染色和观察的步骤。

制作小鼠染色体标本需要使用小鼠肺部组织。

以下是制作步骤：1. 首先将小鼠处死，取出肺部组织并剪成小块。

2. 将肺组织移入一个离心管中，并添加10毫升10％KCl溶液。

3. 用注射器向管中注入溶液，轻轻摇动以使组织浸泡在KCl中。

4. 将溶液和组织离心5分钟，然后倒掉上层液体。

5. 用少量冰冷等渗氨水将沉淀悬浮并再次离心。

6. 倒掉上层液体，重复该步骤直到样品中不含有明显的碎片和其他杂质。

7. 最后，在离心管中滴加10毫升3：1（甲醇：冰醋酸）混合液，并轻轻混合。

8. 将混合液沿离心管壁滴加，使其缓慢地沉淀到底部。

变态反应需要放置在-20°C 的60分钟以上。

9. 滴掉液体，并用75％乙醇固定沉淀。

染色将固定的小鼠染色体标本染色需要的材料如下：1. 铬酸盐染液2. 蒸馏水3. 复方玫瑰红4. 静电纸和制作装置染色步骤如下：1. 将铬酸盐染液溶解在蒸馏水中（比例为1：3），搅拌混合。

2. 将小鼠染色体标本放在静电纸上，用制作装置连接到正离子极板上。

3. 用玫瑰红溶液覆盖标本，使其均匀覆盖。

4. 将正极板移动到离开标本1-2厘米的位置，并接通电源。

5. 在2-5分钟内，染色体将升起并接触到铬酸盐染液，染色体将呈现出不同的条纹状。

观察1. 显微镜2. 移相仪1. 将小鼠染色体标本放在显微镜上，并使用20倍至100倍的放大倍数进行观察。

2. 用相机或移相仪将图像捕捉下来以进行记录和分析。

总结小鼠染色体标本制作、染色和观察需要精细的技术和专业知识。

掌握这些技能对于研究小鼠染色体特征和行为非常重要。

希望本文的介绍有助于读者理解有关小鼠染色体标本制作、染色和观察的相关知识。

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。

观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。

利用显微照相技术对所得切片进行照相。

二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。

因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。

进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。

如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。

这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。

对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。

对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。

人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。

三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。

2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。

收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。

3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。

4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。

5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。

体的制备观察GE GROUP system office room [GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-Life Science College实验报告姓名：柳伟雄学号：201300140062 班级：2013级生科一班 同组者：曾玮皤山东大学实验报告 2015年6月1日姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮墙 科目：细胞生物学实验 题目：小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求1. 初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa 染色法，了解各操作步骤 的原理。

2. 了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3. 认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。

二、原理凡处于活跃増殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂， 均可用于染色体分析。

在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。

给动物注射 —定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法 制备染色体，细胞生物学即可得到大量可分析的染色体标本。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道面处；2.用低渗法使细胞膨胀，以至于在滴片时细胞被胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上；3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。

主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

三、试剂和器材1•试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的立C1溶液）、0.3WKC1低渗溶液、固定液（甲醇:冰醋酸二3 : 1）、Giemsa染液Giemsa染液的配制:吉姆萨粉（Giemsa stain）甘油（AR）甲醇（AR）将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再分批加入甘油，放56/温箱中2h后，分批加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内（最好于0~4C。

姓名 ### 班级 生命基地班 学号 201000140### 同组者：#####科目 细胞生物学实验 题目 小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察 组别 ###小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察【实验目的】1. 掌握染色体的制备方法；2. 观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征；【实验原理】A. 染色体染色体是基因的载体。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。

制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。

本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。

因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。

染色体特征：1. 数目（2n=？）2. 长度（绝对长度、相对长度）3. 着丝粒位置（M\SM\ST\T ）4. 随体与次溢痕的数目、大小和位置5. 带型分析B. 操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。

利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。

在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂图1染色体形态类型姓名 ### 班级生命基地班学号 201000140### 同组者：##### 科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察组别 ###和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。

通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。

用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。

由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。