人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程

人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmo l辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2 热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3 分批同制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4 半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

人血白蛋白生产流程如下：
1.血浆采集筛选：从健康献血员处采集新鲜血浆或保存期不超过
2年的冰冻血浆。

2.分离提取：用低温乙醇蛋白分离法分段沉淀提取白蛋白组分。

3.病毒灭活：将提取的白蛋白组分进行60℃灭活病毒至少10小
时。

4.超滤或冷冻干燥：对经过病毒灭活的白蛋白组分进行超滤或冷
冻干燥脱醇处理。

5.浓缩与稳定剂添加：对处理后的白蛋白组分进行浓缩，并添加
适量稳定剂。

6.灭菌与包装：将白蛋白溶液进行高温高压灭菌或辐射灭菌，然
后分装到无菌注射瓶中。

7.质量检查：逐瓶检查外观是否符合规定，确保产品质量。

人血白蛋白Renxue BaidanbaiHuman Albumin本品系由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他分离法分离纯化，并经60℃ 10小时加温灭活病毒后制成。

含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。

1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2 制造2.1 原料血浆2.1.1 血浆的采集和质量应符合“血液制品生产用人血浆”的规定。

2.1.2 低温冰冻的血浆保存期应不超过3年。

2.1.2 组分Ⅳ沉淀为原料时，应符合本品种附录“组分Ⅳ沉淀原料质量标准”。

2.1.3 组分Ⅳ沉淀应冻存于-30℃以下，运输温度不得超过-15℃。

低温冰冻保存期不得超过1年。

2.1.4 组分Ⅴ沉淀应冻存于-30℃以下，并规定其有效期。

2.2 原液2.2.1 采用低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他分离法制备。

生产过程中不得加入防腐剂或抗生素。

组分Ⅳ沉淀为原料时也可用低温乙醇结合柱色谱法。

2.2.2 经纯化、超滤、除菌过滤后即为白蛋白原液。

2.2.3 原液检定按3.1项进行。

2.3 半成品2.3.1 配制制品中应加适量的稳定剂，按每1g蛋白质加入0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠。

按成品规格以注射用水稀释蛋白质浓度，并适当调整pH值及钠离子浓度。

2.3.2 病毒灭活每批制品必须在60℃±0.5℃水浴中连续加温至少10小时，以灭活可能残留的污染病毒。

该灭活步骤可在除菌过滤前或除菌过滤分装后24小时内进行。

2.3.3 半成品检定按3.2项进行。

2.4 成品2.4.1 分批应符合“生物制品分批规程”规定。

2.4.2 分装应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。

2.4.3 培育分装后，应置20～25℃至少4周或30～32℃至少14天后，逐瓶检查外观，应符合3.3.2.1和3.3.2.2项规定。

出现浑浊或烟雾状沉淀之瓶应进行无菌检查，不合格者不能再用于生产。

文件名称人血白蛋白工艺规程（试行）文件编号第一版起草：年月日颁发部门质量保证部审查：年月日分发部门质量保证部、生产技术部审核：年月日版本状态2008 年版批准：年月日页码第1页共33页执行日期：年月日文件依据《中国药典》（2005 年版三部）、《GMP》（98 版）目的：规范人血白蛋白的生产和质量管理。

适用范围：适用于生产技术部、质量保证部及各相关部门。

责任人：生产操作人员、质监员、低温车间主任、分包装车间主任、生产技术部长、质量保证部长。

正文：一、产品概述1、产品名称人血白蛋白2、剂型、规格2.1剂型：注射剂2.2规格2.2.1每瓶含蛋白质 10g，蛋白质浓度为 20%。

2.2.2每瓶含蛋白质 5g，蛋白质浓度为 20%。

2.2.3每瓶含蛋白质 2g，蛋白质浓度为 20%。

3、处方或工艺配方3.1人血白蛋白 10g辛酸钠 0.266g加注射用水至 50ml3.2人血白蛋白 5g辛酸钠 0.133g加注射用水至 25ml3.3人血白蛋白 2g辛酸钠 0.053g加注射用水至 10ml处方依据：《中国药典》 2005 年版三部4、产品的性状、功能与主治4.1性状本品为略黏稠、黄色或绿色至棕色澄明液体，不应出现浑浊。

4.2功能与主治（1）失血创伤、烧伤引起的休克；（ 2）脑水肿及损伤引起的颅压升高；文件依据《中国药典》（ 2005 年版三部）、《GMP》（98 版）第2页共33页（3）肝硬化及肾病引起的水肿或腹水；（4）低蛋白血症的防治；（5）新生儿高胆红素血症；（6）用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合征。

5、批准文号及标准演变情况5.1批准文号10g：国药准字 S1*******5g：国药准字 S1*******2g：国药准字 S1*******5.2标准演变情况执行标准由《中国生物制品规程》2000 年版《中国药典》 2005 年版三部6、保存、运输及有效期室温（不超过 30℃），避光保存和运输。

目 的：规范人血白蛋白的生产和质量管理。

适用范围：适用于生产技术部、质量保证部及各相关部门责 任人：生产操作人员、质监员、低温车间主任、分包装车间主任、生产技术部长、 质量保证部长。

正 文：一、产品概述1、 产品名称 人血白蛋白2、 剂型、规格2.1剂 型：注射剂2.2规 格2.2.1每瓶含蛋白质10g ，蛋白质浓度为20%2.2.2每瓶含蛋白质5g ,2.2.3每瓶含蛋白质2g ，3、处方或工艺配方3.1人血白蛋白10g3.2人血白蛋白5g3.3人血白蛋白2g 处方依据：《中国药典》2005年版三部4、产品的性状、功能与主治 4.1性 状本品为略黏稠、黄色或绿色至棕色澄明液体，不应出现浑浊4.2功能与主治（1）失血创伤、烧伤引起的休克；（2）脑水肿及损伤引起的颅压升高;蛋白质浓度为20% 蛋白质浓度为20%辛酸钠0.266g 辛酸钠0.133g 辛酸钠0.053g 加注射用水至50ml 加注射用水至25ml 加注射用水至10ml（3）肝硬化及肾病引起的水肿或腹水；（4）低蛋白血症的防治；（5）新生儿高胆红素血症；（6）用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合征。

5、批准文号及标准演变情况5.1批准文号10g :国药准字S1*******5g：国药准字S1*******2g：国药准字S1*******5.2标准演变情况执行标准由《中国生物制品规程》2000年版——《中国药典》2005年版三部6、保存、运输及有效期室温（不超过30C）,避光保存和运输。

自分装之日起有效期为3年。

二、基本要求1、厂房设施及生产环境符合《药品生产质量管理规范》（98版）的要求，并取得《GMP 认证证书》。

生产用设施及设备应专用，不得与其他制品混用。

2、关键性设备应经验证合格才能投入使用，已投入使用的设备要定期进行再验证或回顾性验证。

3、生产车间的人流、物流分开。

人流、物流各行其道，洁净区与非洁净区用明显的色标加以区别。

人血白蛋白低温乙醇法制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2 热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4 半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2 热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4 半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

实验方案_低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白的实验方案：实验目的：通过低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白，获取纯度较高的免疫球蛋白样品。

实验原理：低温乙醇法是一种常用的蛋白质沉淀方法，其基本原理是在低温下，添加适量的乙醇，使蛋白质发生沉淀，从而实现分离纯化目的。

实验步骤：1.实验前准备：1.1.预先配制10%的乙醇溶液，使用冷藏保存。

1.2.准备人血清样品。

1.3.准备离心管和离心机。

2.实验操作：2.1.取一定体积的人血清样品，将其转移到离心管中。

2.2.在离心管中加入等体积的10%乙醇溶液。

2.3.混匀溶液，并在4℃下静置20-30分钟，使免疫球蛋白发生沉淀。

2.4.将离心管放入离心机中，以1500-2000g的速度离心15分钟，沉淀免疫球蛋白。

2.5.将上清液倒掉，并用凉蒸馏水轻轻洗涤沉淀2-3次，以去除杂质。

2.6.加入一定储存缓冲液（如磷酸盐缓冲液）重悬沉淀，得到免疫球蛋白样品。

2.7. 可进一步使用其他方法（如电泳、Western blot等）检测免疫球蛋白的纯度和活性。

3.结果分析：通过低温乙醇法提取的免疫球蛋白样品，可以通过其他实验方法来检测其纯度和活性。

同时，实验中的收率和纯度也可以根据实验结果进行分析和评估。

注意事项：1.实验操作要在低温下进行，以避免免疫球蛋白的降解和失活。

2.实验过程中离心操作要平稳，避免产生气泡和颗粒。

3.在操作过程中要小心避免受到污染，以确保提取的免疫球蛋白的纯度。

4.提取的免疫球蛋白样品可以进一步保存、分析和应用于实验研究中。

总结：低温乙醇法是一种简便、经济、有效的免疫球蛋白提取方法，适用于从人血清等样品中提取纯度较高的免疫球蛋白样品。

通过该实验方案，可以得到稳定、纯度较高的免疫球蛋白样品，为后续实验研究提供基础数据和支持。

需要注意的是，在实验过程中要严格控制实验条件，以确保实验结果的可靠性和有效性。

人血丙种球蛋白制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法提取的免疫球蛋白制剂。

含两种球蛋白90%以上。

用于常见病毒性感染的被动免疫，主要用于预防麻疹和传染性肝炎。

1 制造1.1制造要求与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1项规定相同。

1.2制造工艺1.2.1采用低温乙醇法。

可含适宜稳定剂（如含甘氨酸，应为0.3或0.4mol/L）。

1.2.2分批每批制品最少应由1000名以上健康献血员的血浆（清）混合制成。

同一制造工艺同一空中溶解稀释的制品作为一批，不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.3半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述实验。

1.2.4 冻干半成品经检定合格后及时分装，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。

2。

5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。

1.3剂型与规格1.3.1剂型分为液体及冻干两种。

1.3.2规格液体制剂蛋白质浓度为10%。

液体和冻干制剂每瓶（支）蛋白质装量均为150mg、300mg。

1.4制品重滤和再制与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.4项相同。

2 成品检定2.1抽样每批成品应抽样做全面检定，不同机柜冻干的制品应分别抽样做无菌试验及水分测定。

2.2物理检查2.2.1外观冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，无融化迹象。

液体制剂和冻干制剂溶解后溶液应为接近无色，可带乳光，或淡黄色澄明液体，不应含有异物、混浊或摇不散的沉淀。

2.2.2冻干制剂溶解时间冻干制剂加入20～25℃标示量的灭菌注射用水后，应在15分钟内完全溶解。

2.2.3热稳定性试验液体制剂置57±0.5℃水浴保温4小时后，应无凝胶化或絮状物。

2.3化学检定按《生物制品化学检定规程》进行。

2.3.1水分冻干制剂的水分含量应≤3%（g/g）。

低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白一、实验目的利用低温乙醇法从人血清中分离出免疫球蛋白（Ig），并获得副产物血清白蛋白。

二、实验原理（1）低温乙醇法Cohn6法：美国哈佛大学Ｅ·Ｊ·COHN教授研究组，在短短两年建立了低温乙醇分段提取法。

方法原理：往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂，如乙醇、丙酮等，主要是降低水分子的活度，降低溶液的介电常数，从蛋白分子周围排斥水分子，使蛋白分子之间通过极性基团的相互作用，在范德华力作用下，发生凝聚。

不过由于有机溶剂存在，降低了蛋白分子表面憎水基团的作用，因而引起蛋白分子聚集的主要极性基团的相互电荷之间的引力。

（文献20）分离过程中，二法通过五个因素的变动(五变系统)，使很多血浆蛋白质得以分离。

这五个因素及其各自的作用是；①乙醇：使蛋白质分子“脱水”；⑦pH值；蛋白质在等电点时易于沉淀；②电解质浓度：在低离子浓度下，对蛋白质溶解度有较大影响；④蛋白质浓度：浓度越低，其沉淀作用越小；⑥温度：在低温下，可避免乙醇对蛋白质的变性作用。

同时，蛋白质溶解为吸热反应，溶解度随温度上升而增高。

经实验得知，利用低温乙醇法能将血清蛋白分成六个组分（Ⅰ~Ⅵ），其中免疫球蛋白IgG主要存在于Ⅱ+Ⅲ中，白蛋白Alb主要存在于Ⅴ中。

(2) Cohn氏9法；该法对Cohn氏6法的组分Ⅱ+Ⅲ作进一步分离和提纯，可获得组分Ⅱ—l，2，3(Y—G)，组分Ⅲ一1(同种凝集素)，组分Ⅲ—2(凝血酶原)，组分Ⅲ—3(血浆酶原)等产品。

其工艺流程见图:乙醇法生产中所用的乙醇是通过予冷、慢速搅拌滴入的。

其体积可按下式计算：式中V＝所需乙醇体积；V0＝原来溶液体积；C1＝原来溶液乙醇浓度；C2＝所需达到乙醇浓度；C3＝加入乙醇的浓度。

三、材料和试剂3.1 血清：100 mL3.2 相关试剂：95%乙醇，pH4. 0醋酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液Ⅰ，磷酸盐缓冲液Ⅱ，3 mol/L NaCl溶液，1 mol/L NaHCO3，生理氯化钠溶液，麦芽糖，3.3 实验仪器：四、方法与步骤基本思路：血清的初处理——利用Cohn6法得到组分Ⅱ+Ⅲ——利用Cohn9法得到IgG——IgG沉淀的保存（浓缩蛋白液或冻干品）——Ig物理性状及生化检定（蛋白含量、纯度、免疫活性、稳定性）4.1 血清的初处理（文献[4]，名词.txt中关于血清的部分）（1）将血清从冷冻箱（-5C至-20℃）取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解（2）在室温下使之全溶。