LD50序贯法

特点如下
固定剂量法设固定剂量以观察动物的试验反应, 观察指标是“明显毒性” ( clear sign on toxicity ) , 不以死亡为依据, 而是按毒性症状来判断受试物质的毒性, 故结果不是具体的LD50 值。 结果判定分为高毒、有毒、有害和毒性未分类等。
毒性等级法
1、背景 毒性等级法(Acute toxic class method)最初由Samiey 于1990 年提出, 用于危害评估危害分类以及危 险度评价, 它是以动物死亡作为实验终点的分阶段试验法。OECD于1992年采用了ATC，2001年更 新列为指南TG423，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1tris。 2、原理 该法每次只选用3 个设定剂量( 25, 200, 2000 mg/kg) 之一, 单性别3 只动物进行试验, 根据上一个 步骤有无死亡以及死亡的动物数, 决定下一步的试验。根据预先设计好的判别表格进行毒性分级。 有3 种可能的结局: (1)无需进一步试验即可分级；(2)同一剂量水平再做3只动物； (3)在高一级或低一级剂量水平另做3只动物。
特点如下
大大减少实验动物的使用，不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50及其可信限。 适用于动物染毒后1d~2d内死亡的受试物，对预期染毒死亡延迟至5d以上(含5d)的受试物不适用。
固定剂量法
1、背景 固定剂量法(fixed dose procedure, FDP),英国毒理学会于1984 年正式提出。 OECD于1992年采用了FDP，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1bis, OECD 于2001年作为指南TG420。 2008年我国采用该方法为国家标准。 2、原理 使用一组固定的剂量( 5, 50, 500或2000 mg/kg), 分预试验与主试验两个阶段进行。 预试验采用单性别1只动物循序进行, 一般用雌性, 除非有资料和指征提示雄性更敏感。如受试剂 量无中毒表现, 而高一档剂量有动物死亡, 则需在其间插入剂量。 主试验根据预试验结果, 一般只需一个剂量, 雄雌动物各5 只。观察出现“明显毒性”, 实验终止; 不出现中毒表现, 需提高一档剂量试验; 出现死亡, 需降低一档剂量试验; 如2000 mg/kg预试验和 主试验都不出现中毒体征, 试验终止。结果以不出现与受试化学物相关死亡的最高剂量表示。

3. 观察注射不同剂量的药品时小 白鼠所产生的急性毒性反应、
出现反应的时间以及死亡情况。
实验材料
2.实验仪器
实验原理
序贯法：选择一系列按等比级数排列的药物 剂量，将动物一只一只序贯地进行试验。
先选择一个近50%反应率的剂量，当动物出 现阴性反应时就选用较高一级的剂量给予下 一只动物； 当出现阴性反应时，就选用较低一级的剂量 给予下一只动物。
序贯法测定半数致死量（������������������������）
目录
1. 实验目的
2. 实验材料
3. 实 结果讨论与分析
1.基本掌握半数致死量 (������������50)的测定方法
4.加深理解 ������������50的意义。
实验目的
2.学习小鼠 的基本实验 技术
Copyright © 白亮亮 2017
实验方法
随机取鼠
腹腔注射 0.2mL/10g
观察 10min
阳性：降低一级药 物浓度注射下一只
阴性：增加一级药 物浓度注射下一只
记录数据
计算
实验结果
结果讨论
1.随着药物剂量的增加，小鼠的反应如何？ 2.本实验测出的LD50与书本上的是否相同？ 为什么？有哪些因素影响了实验结果？ 3.LD50的测定有何意义？

药理学实验课讲义（24学时）-1实验一：不同给药途径对药物作用的影响【目的】1．掌握硫酸镁的药理作用。

2．掌握小鼠灌胃给药及腹腔注射的方法。

3．观察硫酸镁不同给药途径产生的药理作用是否相同。

【原理】硫酸镁是一个典型的不同给药途径产生不同药理作用的药物，其口服在胃肠道形成高渗透压，使肠腔外水份向肠腔内渗透，最终导致肠容积增大，对肠壁刺激增加，导致肠蠕动加快，出现泻下作用。

静脉注射硫酸镁主要作用有：抑制中枢神经系统、扩张血管降低血压、阻断神经肌肉接头产生肌松作用等。

【材料】1. 动物小白鼠6只2. 药品 15%硫酸镁3. 器材小鼠灌胃器、注射器、针头、小天平【方法】1. 小白鼠标号、称重、分组。

2．Ⅰ组 i.p. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10gⅡ组 i.g. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10g3．以存活或死亡观察小鼠灌胃及腹腔注射等量硫酸镁所致药物效应不同。

【思考题】1．给药途径不同，为什么会影响药物作用？2．比较各种给药途径的优缺点？实验二：有机磷农药中毒与解救【目的】观察有机磷农药中毒的症状及阿托品、解磷定二药对有机磷农药中毒的解救效果，初步分析其解救原理。

【实验原理】有机磷农药能与胆碱酯酶牢固结合，使之失去水解Ach的活性，造成突触间隙Ach大量堆积而产生一系列中毒症状（M样、N样症状等）。

阿托品是M受体阻断药、氯磷啶是胆碱脂酶复活药，可不同程度的解救其中毒症状。

如阿托品解除M样症状，但对肌震颤无效；解磷定可使胆碱酯酶复活，对肌震颤有效。

【材料】1．动物：家兔2．药品：10%敌百虫溶液、0.1%硫酸阿托品溶液、2.5%解磷定溶液3．器材：兔箱、注射器、5#针头、台式磅秤、瞳孔尺【方法】1．取家兔1只，称重后分别观察下列各项指标：全身状况、活动情况、呼吸（次数、有无呼吸困难、呼吸道有无分泌等），瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等，记录在表内。

2．耳缘静脉注射10%敌百虫溶液1ml/kg，密切观察上述的各项指标。

序贯法测定LD50
药理学教研室
一、原理

LD50概念：使群体动物50％死亡的剂量 群体动物最小致死量的几何均数
二、实验方法
【实验目的】 【实验材料】 实验药品：普鲁卡因 实验动物：小鼠 【实验步骤】 ⒈ 预先拟定剂量分组； ⒉ 选取任一剂量组，按0.2ml/kg对小鼠腹 腔注射，观察动物死亡与否（10min）； ⒊ 根据上一动物死亡情况确定下一动物剂 量，依次进行至最后一只动物。
1 2 3 4
＋
－ ＋ ＋ － ＋ － － － ×
5
6
－
【实验结果计算】
剂量 (D) mg/kg 1 2 3 4 5 6 lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r
＋ － ＋
＋
－
－
＋
＋ ＋ ×
—
LD50 lg 1
X r r
序贯法测定LD50操作示意图
剂量 (D) lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r
1 2 3
＋ － ＋ －剂量单位为mg/kg；本例仅为模式图
特殊情况处理
剂量 (D)
lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r

1 2 3 4
＋
－ ＋ ＋ － ＋ － － － ×
5
6
－
【实验结果计算】
剂量 (D) mg/kg 1 2 3 4 5 6 lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r＋ － ＋＋来自－－＋
＋ ＋ ×
—
LD 50 lg
1
X r r
序贯法测定序贯法测定ld50ld50操作示意图操作示意图剂量1011特殊情况处理特殊情况处理剂量1011实验结果计算实验结果计算剂量mgkglgd101150lg
序贯法测定LD50
药理学教研室
一、原理

LD50概念：使群体动物50％死亡的剂量 群体动物最小致死量的几何均数
二、实验方法
【实验目的】 【实验材料】 实验药品：普鲁卡因 实验动物：小鼠 【实验步骤】 ⒈ 预先拟定剂量分组； ⒉ 选取任一剂量组，按0.2ml/kg对小鼠腹 腔注射，观察动物死亡与否（10min）； ⒊ 根据上一动物死亡情况确定下一动物剂 量，依次进行至最后一只动物。
序贯法测定LD50操作示意图
剂量 (D) lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r
1 2 3
＋ － ＋ － － ＋ ＋ ＋ ＋ － ×
4
5 6
注：剂量单位为mg/kg；本例仅为模式图
特殊情况处理
剂量 (D)
lgD (X)
实验结果
S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 F r X*r

药理学实验指导
实验一 半数致死量的测定
半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。它表示能使 全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。由于生物间存在个体差异性，因此 LD50 需用一批 相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物对不同实验对象的 LD50 值不同。
【实验目的】 1. 掌握半数致死量测定的基本方法和寇氏法的适用条件。 2. 熟悉动物的常用分组方法。 3. 了解寇氏法公式的推导过程。 【实验条件】 寇氏法（Kärbar 氏法） 测定 LD50 的方法有很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法、序贯法以及 Bliss 法等。其中 Bliss 法为最经典、最准确的方法，但需要用计算机和相应软件来完成。由 于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。 【实验条件】 1. 剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。 2. 各组动物数应相等。 3. “反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为 0％，最大剂量组 的死亡率（Pm）应为 100％；如果 Pn < 20% 或 Pm > 80% 需用校正公式计算；如 Pn > 20% 或 Pm < 80% 则不能用此法计算。 【实验动物】 小白鼠 【实验药品】 不同浓度敌百虫、苦味酸 【实验器材】 鼠笼、动物天平、1ml 注射器、电子计算器 【实验步骤】 １．预备实验 ①摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个 动物也不死亡的最大剂量(Dn)。方法是据经验或文献定出一个估计量， 观察 2～3 只动 物的死亡情况。如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出 Pm = 100 % 和 Pn = 0% 的剂量，此两量分别为上下限。
⑷计算注意事项：①发令后开始计算；时间到，立即停止计算。 ②实验开始后，一定尽全力进行计算。③中间对计算结果不能修改，否则统计时按 错误计算。

n=实验动物数+1
表2 尼可刹米的LD50实验用表
剂量(mg/kg)
实验结果
F S R X*R
1430
1000 +① +③
20 2 6
- 700
+④ +⑥ +⑩ 3 1 4 11.38
② 490
- - +
+ 1 2 4 10.76
343
⑤ - ⑨ ⑦
0 1 1 2.535
⑧ LD50=lg-1( C/n )
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
▪掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） ▪熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)： 在一定的实验条件下,一定数量的动物 用药后，约半数实验动物出现疗效的药 物剂量。
LD50(median lethal dose)：
治疗指数(therapeutic index TI)： LD50和ED50的比值，药物安全性指
标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意 义
▪ 反映药物急性毒性大小和药理作用的强弱
生理科学实验的实验设计
医学实验研究的基本程序 实验设计的三大要素 实验设计的三大原则 实验设计的纲要
医学实验研究的基本程序
⑴立题 ⑵建立假说 ⑶实验设计 ⑷实验准备
医学实验研究的基本程序
⑸预备实验 ⑹正式实验 ⑺结果的分析处理 ⑻撰写论文
1.立题
医学科 学研究
在医学实践中暴露出来的矛盾，一些想解 释又无法解释的现象，想解决又无法解决的问 题，都是医学研究的课题。

半数致死量计算方法有各种，其中寇氏法最 为惯用，目测概率单位法最为简便，序贯法最节 约试验动物。下面将分别介绍这三种方法。
一、寇氏法 寇氏法是Kaeber（1931年）提出，又称平均法
它是依据对数剂量与致死百分数呈S形曲线， 由S形曲线包含面积推导出致死百分率为50%相 当剂量。
药理实验半数致死量专家讲座
第九章 半数致死量
药理实验半数致死量专家讲座
第1页
本章重点
✓半数致死量基本概念 ✓寇氏法、目测概率单位法和序贯法等计算半数 致死量方法 ✓半数致死量试验设计方法。
药理实验半数致死量专家讲座
第2页
第一节 半数致死量概述
在动物毒理学和药理学研究中，通惯用试验动 物对某种药品、毒物、细菌及理化刺激等反应来测 定其效力或毒性。
药理实验半数致死量专家讲座
第13页
第二节 半数致死量测定方法
【例】 为了研究铵碘消毒剂对建鲤毒力影响，随机
捞取210尾规格基本一致鲤鱼，放入缸内，每缸30尾，
1组对照，6组处理。以等对数间距设置6个剂量水平
（单位：
）分mL别/ m为3：40.000、47.156、55.592、
65.538、77.262、91.085，量取药液并加入缸内，搅
第29页
第二节 半数致死量测定方法
三、序贯法 序贯法是最能节约试验动物一个方法，又称“上下
法在”确。定因为其L时把D含50计有量很集高中效用率在。50%反应率上下，所以 其普通方法是：依据以前经验选择一个近50%反应
率等比级数剂量组，通惯用4-6个剂量组，然后将动物 一只一只有序地进行试验，当动物出现阴性反应时， 就选取较高一级剂量给予下一只动物，当出现阳性反 应时，就选取较低一级剂量给予下一只动物，直到试 验结束，试验所需动物总数n应在试验开始前决定。

LD50的测定⽅法
LD50的测定⽅法
LD50的测定⽅法有三种：概率单位法（Bliss法）、累计法（Reed-Muench、Karber）、序贯法概率单位法：
1、进⾏实验：死亡率为10%-50%、50%-90%的组数各占⼀半。

死亡率为
0%和100%时，舍去不⽤
2、数据转换：计算剂量对数x和死亡率概率单位y
3、对x和y进⾏回归分析，求出回归⽅程
4、由回归⽅程计算当y=5时的x值
5、取x值的反对数得到LD50
如某农药对急性⼤⽩⿏的LD50测定计算
得：
累积法测定LD50
1、剂量组按等差或等⽐级数分5-8组
2、死亡率在0-100%之间
3、分别累计各组动物死亡总数和存活总数
4、分别求各组的累计动物死亡率
5、⽤线性插值法求半数致死量
例：
序贯法测定
1、做实验:从接近LD50的各组动物组数n剂量开始，等⽐级数分4-6组；⼀只⼀只动物进⾏，阳性，下⼀只动物⽤低⼀级剂量，反之，则相反
2、计算各组动物数
3、计算各组动物组数n与剂量对数x的乘积之和：∑nx
4、计算LD50的对数值：∑nx/∑n
5、取反对数得到LD50。

半 数 致 死 量引言半数致 Nhomakorabea量的基本介绍
半数致死量的应用
存在的争议
引言
在动物毒理学和药理学研究中，通常用试验动 物对某种药物、毒物、细菌及理化刺激等反应来测
定其效力或毒性。
常用的指标是半数效量(median effective dose:
ED50)：指使半数实验动物发生特定效应的剂量，
如半数治愈量、半数麻醉量、半数感染量、半
随着药物剂量的增加，动物死亡的头数也 随之增加，当药物剂量增加到一定程度时动物 全部死亡，这时的毒物剂量称为绝对致死量 （LD100）。
二、半数致死量的应用
1．毒力比与效力比
ED50与 LD50是衡量药物的效力
与毒力的指标，因此，当需要对两 种质量相同强度不同的药物或同一 药物对两种不同处理后的动物所起 的作用进行比较时，往往就利用ED50 与 LD50 的对比来进行。药物的效力 与毒力皆与其半数效量或半数致死 量的大小相反
目测概率单位法最为简便， 序贯法最节约实验动物。
补充：
在进行药物的毒力试验时，由于动物个体 的差异，药物致死剂量常常不同。对条件相同 或相近的动物用某种药物逐渐增加剂量 当毒物剂量较小时，动物具耐受性，随着 毒物剂量的增加，动物开始死亡，这时毒物的 剂量为最小致死量（minimum lethal dose： mLD）。
数惊厥量、半数致死量等等
一、半数致死量（median lethal dose， LD
1、定义：表示在规定时间内， 通过指定感染途径，使一定体重 或年龄的某种动物半数死亡所需 最小细菌数或毒素量。
在毒理学中，半数致死量，简 称LD50（Lethal Dose, 50‘）， 是描述有毒物质或辐射的毒性的 常用指标。按照医学主题词表 （MeSH）的定义，LD50是指能 杀死一半试验总体之有害物质、 有毒物质或游离辐射的剂量 。

Horn氏表 Horn氏表1-3 氏表1
各剂量组动物死亡数 (只) 1组 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 2组 0 1 1 2 2 2 3 0 1 1 2 2 2 2 3 1 3组 4 3 4 2 3 4 3 4 3 4 2 3 3 4 3 4
每组4只动物，组距3.16倍 每组4只动物，组距3.16倍
4 4 4 4 4 4 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
LD50 1.00 3.16 1.00 3.16 1.00 3.16 2.15 3.16 2.15 1.47 2.15 1.47 1.00 1.00 3.16 1.78 3.16 1.78 1.00 1.78 1.00 3.16 1.00 3.16 1.00 1.00
Horn氏表 Horn氏表1-2 氏表1
各剂量组动物死亡数 (只)
每组4只动物，组距3.16倍 每组4只动物，组距3.16倍
剂量1 剂量1＝0.316 剂量2 剂量2＝1.00 剂量3 剂量3＝3.16 剂量4 剂量4＝10.0 ×10t 剂量1 剂量1＝1.00 剂量2 剂量2＝3.16 剂量3 剂量3＝10.0 剂量4 剂量4＝31.6 可信限 0.100～ 0.100～10.0 0.221～ 0.221～45.2 0.0385～ 0.0385～26.0 0.122～ 0.122～82.1 0.0149～ 0.0149～66.9 1.07～ 1.07～9.36 1.29～ 1.29～3.59 0.779～ 0.779～12.8 0.649～ 0.649～7.15 0.654～ 0.654～3.30 0.556～ 0.556～8.34 0.442～ 0.442～4.87 0.412～ 0.412～ 2.43 0.338～ 0.338～2.96 0.621～ 0.621～16.1 0.778～ 0.778～4.01 0.386～ 0.386～25.9 0.288～ 0.288～11.0 0.196～ 0.196～5.09 0.229～ 0.229～13.8 0.122～ 0.122～8.18 0.122～ 0.122～82.1 0.0700～ 0.0700～14.3 0.0472～ 0.0472～212 0.0149～ 0.0149～66.9 0.0100～ 0.0100～100 LD50 3.16 10.0 3.16 10.0 3.16 10.0 6.81 10.0 6.81 4.64 6.81 4.64 3.16 3.16 10.0 5.62 10.0 5.62 3.16 5.62 3.16 10.0 3.16 10.0 3.16 3.16 可信限 0.316～ 0.316～31.6 0.700～ 0.700～143 0.122～ 0.122～82.1 0.385～ 0.385～260.0 0.0472～ 0.0472～212.0 3.38～ 3.38～29.6 4.08～ 4.08～11.4 2.46～ 2.46～40.6 2.05～ 2.05～22.6 2.07～ 2.07～10.4 1.76～ 1.76～26.4 1.40～ 1.40～15.4 1.30～ 1.30～7.67 1.07～ 1.07～9.36 1.96～ 1.96～50.9 2.49～ 2.49～12.7 1.22～ 1.22～81.8 0.911～ 0.911～34.7 0.621～ 0.621～16.1 0.725～ 0.725～43.6 0.386～ 0.386～25.9 0.385～ 0.385～260 0.221～ 0.221～45.2 0.149～ 0.149～669 0.0472～ 0.0472～212 0.0316～ 0.0316～316 ×10t

第六章主要内容第一节毒理学实验基础知识第二节急性毒性作用第三节局部刺激试验第四节亚慢性和慢性毒性作用第二节急性毒性作用第二节急性毒性作用1概念急性毒性:机体一次接触或24小时内多次接触化学物后在短期(<14天)内所发生的毒性效应。

⏹几个问题:急性接触的次数一次或多次中毒效应出现的时间<14天中毒效应的强度严重毒性上限参数致死剂量：①绝对致死量（L D100）②半数致死剂量或浓度（L D50或L C50）③最小致死量（M L D，L D01）③最大耐受剂量（M T D，L D0）毒性下限参数（1）急性毒性（L O A E L）观察到有害作用的最低剂量（2）有害作用阈（t h r e s h o l d）（3）急性毒性（N O A E L）未观察到有害作用剂量毒性参数和安全限值的剂量轴的计算方法--经典方法L D50HORN’S法寇氏法机率单位法-对数图解法Bliss法序贯法设计要点：染毒途径：模拟人可能接触途径吸收速率比较：静脉注射>吸入>肌内注射>腹腔注射>经口>皮内注射>经皮试验剂量和方法（视所选方法而定）i=(l g L D100-l g L D0)/(n-1)毒性作用观察◎中毒体征及发生过程动物常见表现：兴奋—抑制—死亡◎死亡情况和时间分布，死亡动物的解剖和病检◎体重观察时期和周期14天，例外（速杀型化合物）经典急性毒性试验和L D50的意义1.消耗的动物量大2.获得的信息有限3.L D50的波动性4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入详细的毒性信息。

⏹最大限量法⏹传统方法的一种特例。

急性毒性替代方法⏹固定剂量法急性毒性分级法上－下移动法⏹由第一只动物染毒后的反应决定第2只动物接受化学物的剂量，如果动物死亡，则下一个剂量降低，如果动物存活则下一个剂量增高。

该方法需要选择一个比较合适的剂量范围。

极量：指药物治疗的剂量限制，即安全用 药极量，超过极量就有发生中毒的 危险。
氢溴酸山莨宕碱注射剂 10.0mg×1支
Sig. 10.0mg
i.m st
例四、
某患儿，男，6月， 入院诊断为脑膜炎。 拟以头孢噻肟静脉滴 注治疗。请为患儿开 处一张三天量的处方。 （注射用头孢噻肟 钠，每瓶0.5g，1g。 儿童50-150mg/kg/日 分2-4次） 附：1～6月小儿体重 3＋月龄×0.7 （单位：公斤）
处方及LD50的测定
一.处方

1.处方的意义 2.处方的基本结构 3.处方的种类 4.处方书写的一般规则及注意事项 5.练习

1.处方的意义： 处方：是医师根据病人的病情开给药房要求配方、发 药的书面文件。 处方具有法律、经济、技术方面的意义。 法定处方（国家药典标准收载和规定， 制剂生产部门必须遵守） 种类 协定处方（医疗单位内部，协商议定 的制剂处方） 医疗处方（医师根据病人的治疗需要而 开写的处方）
R
1.阿司匹林片剂 Sig. 0.5g 0.5g ×9片 p.o tid
2.青霉素钠盐粉针剂240万U Vgtt q.d×3天 5%GS 500ml
A.S.T（-）
处方者 药费
XXX
发药者 圆 角
校对者 分
例三、
Cito!
某患者，男，20岁， 因腹部绞痛半小时入 院就诊。拟行解痉止 痛治疗。请为患者开 处山莨宕碱，立即肌 肉注射。（氢溴酸山 莨菪碱，注射剂， 1ml：5mg，1ml： 10mg ，1ml：20mg， 肌内注射：一次5-10 mg）
实验结果
S 6 7 8 9 10 11 F r X*r
2.477
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药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。

【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。

由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。

在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。

LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。

此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。

【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。

2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。

3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。

【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。

方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。

2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。

计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r =（G-1）√D m/D n再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1r; D3=D2r; D4=D3r; D5=D4r; ……DG=DG-1r。

药物急性半数致死量（LD50）的测定附子急性毒性测定一、目的：1.了解药物半数致死量(LD50)测定的原理和意义.2.通过实验掌握附子LD50 的测定方法,步骤和计算过程.二、原理：急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。

药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，致死量的测定常以半数致死量为标准(LD50)。

LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。

由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。

在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。

LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。

此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。

三、实验材料动物：KM小鼠，体重18-22g，雌雄各半。

器材：电子秤，小鼠鼠笼，1 ml注射器，5号针头，计时器，Bliss统计法软件包。

药品与试剂：附子浸提液(1g/mL)、蒸馏水。

四、方法与步骤（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。

按1：0.7的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。

2、确定组数，计算各组剂量：一般分5-8个剂量组。

配制等比稀释药液系列，使每只小鼠给药容量相等，一般为0.3mL/10g。

按比例配出不同剂量的附子提取液。

（二）正式实验1、分组编号：称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别用苦味酸做好标记。

再按确定组数（4组）分层随机分组，使各组平均体重及性别分布尽可能一致，每组4只小鼠（2只雄性，2只雌性）。

医学统计学序贯法
序贯法是一种简便、快速、粗略测定半数有效量的方法。

从若干个具有不同均值的正态分布中，挑选出其均值最大者。

序贯法治疗
集中临床各种有效的治疗方法，根据病人的具体情况设计综合的治疗方案，有效地避免了单科治疗局限性。

序贯法治疗顺序
第一，经肝胆外科专家确认肿瘤在技术上是否可以一期切除；第二，术前利用DSA血管造影技术精确了解肝癌有无侵犯血管、有无形成癌栓、肝内有无微小转移病灶等，第三，根据病人情况，采取手术切除；或超选择性肝动脉栓塞化疗、二期手术切除；或超选择肝动脉栓塞化疗加局部消融；或区域性生物治疗加局部消融等治疗；第四，术后根据情况采用区域性灌注化疗或生物治疗，或影像引导局部消融等措施，辅以中医中药、免疫治疗等方法防治复发。

剂量4＝10.0
1
2
3
4
LD50
可信限
2
2
2
4
1.00
0.100～10.0
3
0
2
4
3.16
0.221～45.2
3
0
3
4
1.00
0.0385～26.0
3
1
1
4
3.16
0.122～82.1
3
1
2
4
1.00
0.0149～66.9
0
0
3
3
3.16
1.07～9.36
0
0
4
3
2.15
1.29～3.59
0
1
2
3
3.16
3.16
0.122～82.1
10.0
0.385～260
Horn氏表2-2
各剂量组动物死亡数 (只)
1234 2224 3024 3034 3114 3124 0033 0043 0123 0133 0143 0223 0233 0243 0333 1033 1043 1123 1133 1143 1223 1233 2033 2043 2123 2133 2223
2
优缺点
1、使用动物数少； 2、可直接从Horn氏表查出LD50及其95％可信 限，不需计算，甚为简便。 3、但LD50的95％可信区间范围较大，方法精确 度尚不够。
Horn氏表1-2
每组4只动物，组距3.16倍
剂量1＝0.316
各剂量组动物死亡数 (只)
剂量2＝1.00 剂量3＝3.16
×10t
0.837～11.9
4