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![[课件]毒理学基础第6章(2)蓄积毒作用PPT](https://uimg.taocdn.com/81f3944aa45177232f60a2f9.webp)
毒理学基础各章节知识点毒理学（Toxicology）：研究外源性化学物质对生物机体的损害作用的学科(传统定义) 。
现代毒理学(modern Toxicology )：研究所有外源因素（如化学、物理和生物因素）对生物系统（living systems）的损害作用、生物学机制(biologic mechanisms)、安全性评价(safty evaluation)与危险性分析(risk analysis)的科学。
（二）研究内容毒理学两个基本功能：检测理化因素产生的有害作用的性质（危害性鉴定功能）评价在特殊暴露条件下出现毒性的可能性（危险度评价功能）三大研究领域：描述毒理学(descriptive toxicology)机制毒理学(mechanistic toxicology)管理毒理学(regulatory toxicology)从整体实验到替代实验，又称“3R”法，即优化试验方法和技术，减少受试动物的数量和痛苦，取代整体动物试验的方法。
第二章毒理学基本概念毒物(poison)：是指在一定条件下，以较小剂量进入机体就能干扰正常的生化过程或生理功能，引起暂时的或永久性的病理改变，甚至危及生命的化学物质。
毒性（toxicity）：指化学物质引起有害作用的固有能力。
剂量相同时，对机体损害能力越大的化学物质，毒性越高。
相对于同一损害指标，需要剂量越小的化学物质，其毒性越大。
中毒(poisoning)：是指生物体受到毒物作用而引起功能性或器质性改变后出现的疾病状态。
毒物：在一定条件下，以较小剂量进入机体干扰正常的生化过程或生理功能，引起暂时性或永久性病理变化甚至危及生命的化学物质。
毒效应（toxic effect）：又称为毒作用，是化学物质对机体所致的不良或有害的生物学改变。
毒效应是化学物质或代谢产物在作用部位达到一定数量并停留一定时间，与组织大分子成分互相作用的结果。
当改变暴露条件时，毒效应会相应改变。
毒性是一种能力，中毒是一种状态，毒效应是一种表现。
卫生毒理学――第六章化学毒物的一般毒性作用急性毒性(acute toxicity)是指机体(人或实验动物)一次接触或24小时内多次接触化学物后在短期(最长到14天)内所发生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
急性毒性试验(acute toxicity tests)是基础毒理研究的主要内容之一．其目的是：①测试和求出化学毒物对一种或几种实验动物的致死量(以LD50表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度．②并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。
③探求化学毒物急性毒性的剂量―反应关系与中毒特征。
④为亚慢性、慢性毒性作用试验的研究及其他毒理试验提供接触剂量和观察指标的选择提供参考依据。
⑤为毒理学机制研究提供线索。
常用参数最常用的是半数致死量(LD50)和急性毒作用带(Zac)。
Zac值的大小可反映急性阈剂量距离LD50的宽窄，即表示引起实验动物的死亡剂量与最低毒作用剂量之间剂量范围的宽窄。
zac值越大、表明化学物引起急性死亡的危险性越小，反之表明引起急性死亡的危险性越大。
实验方法的要点(一)实验动物[原则]：①急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表现与人的反应尽可能一致的实验动物。
②动物易于获得③品系纯化④价格较低和易于饲养等条件。
1．实验动物的种属不同种属的动物对化学物的反应可能有很大的差别，最好用两种种属的动物，包括啮齿类和非啮齿类。
实际工作中啮齿类多选用小鼠和大鼠，有些试验也可选用豚鼠或家兔，非啮齿类一般选用狗或猴。
一般来说，急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔．而急性吸人毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。
2．实验动物的年龄急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行实验，而且须是未曾交配和受孕的动物。
由于小动物年龄与体重相关．一般用体重表示。
《毒理学基础》重点大全：先说一句，六，七，八，十二章是本书重点中的重点。
注意详细看课本。
15.急性毒性实验的目的？a、通过实验测定毒物的致死剂量以及其他急性毒性参数，以LD50为最主要参数；b、通过观察动物中毒表现，毒作用强度和死亡情况，初步评价毒物对机体的毒作用效应特征、靶器官、剂量-反应关系和对人体产生所害的危险性；c、为后续的重复剂量、亚慢性和慢性毒性实验研究以及其他毒理实验提供接触剂量设计依据d、提供毒理学机制研究的初步线索。
16.常用的致突变试验？a细菌回复突变试验（Ames试验）；b微核试验：c染色体畸变分析；d姐妹染色单体交换试验SCE；e果蝇伴性隐性致死试验；f显性致死试验；g程序外DNA合成试验；h单细胞凝胶电泳试验。
17.微核试验的原理和其检测的终点是什么？原理：是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失整个染色体，在细胞分裂后期遗留在胞质中，单独形成的次核，因其比主核小，故称微核。
检测的终点：（1）染色体或染色单体的损伤（2）纺锤丝的损伤。
18、简述Ames 试验、微核试验的基本原理。
答：⑴Ames 试验，又称细菌回复突变试验，是利用突变体的测试菌株，观察受试动物能否纠正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其致突变性。
⑵微核试验MNT，是观察受试动物能否产生微核的试验，主要可检出DNA 断裂剂和非整倍体诱变剂。
19.发育毒性概念及表现？a、指出生前后接触有害因素，子代个体发育为成体之前诱发的任何有害影响。
b、表现：发育生物体死亡，生长改变，结构异常，功能缺陷。
20.举例说明致突变试验所反应的遗传学终点？a.DNA完整性的改变b.DNA重排或交换c.DNA碱基序列改变 d.染色体完整性改变e.染色体分离改变。
21.急性毒性试验的目的：急性毒性（acute toxicity）是指机体（实验动物或人）一次或24h 内多次接触一定剂量外源化学物后在短期内所产生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
《毒理学基础》重点大全：先说一句，六，七，八，十二章是本书重点中的重点。
注意详细看课本。
一.名词解析：1. 毒理学( toxicology )：的传统定义是研究外源化学物对生物体损害作用的学科，现代毒理学已发展为所有外源因素对生物系统的损害作用，生物学机制，安全性评价与危险性分析的学科。
2. 最大耐受剂量( maximal tolerance dose )：指化学物质不引起受试对象出现死亡的最高剂量3. 自由基(free radical) ：是独立游离存在的带有不成对电子的分子、原子和离子，它主要由化合物的共价键发生均裂而产生。
4. 易感生物学标志( biomarker of susceptibility )：是关于个体对外源化学物的生物易感性的指标即反应机体先天具有或后天获得的对暴露外源物质产生反应能力的指标。
5. 半减期( half life )：外源化学物的血浆浓度下降一半所需要的时间，它是衡量机体消除化学物能力的一个重要参数。
6•癌基因(Oncogene): 一类在自然或试验条件下，具有诱发恶性转化的潜在基因。
7. 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体(实验动物或人)一次或24 小时内接触多次一定剂量外源化合物后在短期内所产生的毒作用及死亡。
包括一般行为、大体形态变化及死亡效应。
8. 基准剂量BMD\benchmark dose :是依据动物试验剂量-反应关系的结果，用一定的统计学模式求得的引起一定比例动物出现阳性反应剂量的95%可信限区间的下限值。
9. 生物转化( Biotransformation ):又称代谢转化，指外源化学物在体内经历酶促反应或非酶促反应而形成的代谢产物的过程。
10. 代谢酶遗传多态性 :不同种属，不同个体内的同一种代谢酶的基因编码不同，从而导致了其功能的不同，这就是代谢酶遗传多态性11. 危险度(risk)：又称危险或危险性，指在特定条件下，因接触某种水平的化学毒物而造成机体损伤、发生疾病，甚至死亡的预期概率。
度理学基础学习指导第一章绪论【名词解释】1.毒理学2.现代毒理学3.卫生毒理学4.管理毒理学【问答题】1.毒理学、现代毒理学及卫生毒理学的任务和目的2.卫生毒理学的研究方法有哪几种？3.描述毒理学、机制毒理学、管理毒理学研究内容及相互关系4.如何理解毒理学的科学性与艺术性5.毒理学主要分支有哪些？【论述题】1. 试述毒理学发展趋势及有关进展。
第二章毒理学基本概念【名词解释】1.毒物2.biomarker3.medianlethaldose4.hypersensibility5.hormesis6 6.Zch7.靶器官8.毒性9.阈剂量10.最大无作用剂量11.剂量-效应关系12.剂量-反应关系13.危险度14.危害性15.安全性【问答题】1.毒理学中主要的毒性参数有哪些？2.一般认为哪些毒性作用有阈值，哪些毒性作用无阈值？3.为什么把毒效应谱看成连续谱？4.绘制一条典型的剂量-反应曲线。
标出阈值和饱和度。
标出二者轴线。
5.一个剂量-反应曲线能告诉毒理学者怎样的信息？6.NOEL, NOAEL, LOEL和LOAEL之间的区别是什么？7.生物学标志有哪几类？【论述题】1.试述描述毒物毒性常有指标及意义2.剂量反应关系曲线主要有哪几种类型及意义如何？第三章外源化学物在体内的生物转运与转化2.代谢活化3.物质蓄积4.功能蓄积5.生物转化【问答题】1.外源化学物吸收进入机体的主要途径有几种、是什么途径？2.外源化学物分布的特征和研究分布过程和特征的意义是什么？3.外源化学物经肾脏排泄的主要过程。
4.何谓肠肝循环？5.何谓肝外代谢？何谓生物转化的双重性？6.简述生物转化第一相反应的反应类型。
7.氧化反应的主要酶系是什么？8.简述细胞色素P-450酶系被诱导和抑制特性的毒理学意义。
9.简述生物转化第二相反应的类型。
10.为什么说呼吸道是气体、蒸气和气溶胶形态的环境污染物进入体内的主要途径11.列举出氧化反应的三种类型12.列举六种II 相反应。
毒理学第一章绪论要点：掌握毒理学的基本概念熟悉毒理学的研究领域和研究方法了解毒理学的过去、现在和未来发展趋势外/内源化合物、毒物、毒性、毒作用；毒理学、现代毒理学；外源性化合物：在人类生活环境中存在，可能与机体接触，并进入机体，在体内呈现一定生物学作用的化学物质。
内源性化合物：机体内原已存在的或代谢过程中形成的产物或者中间产物毒性：化学物质引起损害的能力。
同等剂量，损害能力越强的其毒性越高；相对同一损害，剂量越小毒性越大。
毒作用：化学物本身或代谢产物在作用部位到一定量并停留一定时间，与组织大分子相互作用的结果。
又称为毒效应，是化学物对生物体所致的不良或者有害的生物学改变-不良效应、损害效应毒物：较低剂量进入生命体能够引起疾病或者危及生命的物质毒理学:从生物医学角度研究外源化学物对生物机体的有害作用及其机制的科学。
现代毒理学：以毒物为工具，在实验医学和治疗学基础上，发展为研究化学、物理、生物因素对机体的损害作用、生物学机制、危险度评价和危险度管理的科学—基础学科、和生命大科学同步发展研究领域（分类）：描述毒理学、机制毒理学、管理毒理学研究方法：体内试验、体外试验、人体观察、流行病学研究毒理学替代法(3R原则)：优化、减少、替代、责任第二章毒理学基本概念目的要求：掌握毒物、毒性和毒效应的基本概念和意义；掌握剂量、量反应与质反应、剂量－量反应关系与剂量－质反应关系的概念；熟悉剂量－反应关系曲线的形式和转换；掌握常见毒理学参数的概念和意义；熟悉安全限值的有关概念。
重难点：毒性与毒效应的概念区别；损害作用与非损害作用的划分；剂量－效应关系与剂量－反应关系的概念和意义；LOAEL与NOAEL的概念和意义；外源化学物：在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触并进入机体，在体内呈现一定的生物学作用的一些化学物质，又称为“外源生物活性物质”。
内源化学物：机体内已经存在的和代谢过程中形成的产物或中间产物。
毒物：在一定条件下以较小剂量进入机体，能干扰正常生理功能或生化过程，引起暂时或永久性病理改变，甚至危及生命的物质（毒物无绝对）损害作用：指影响机体行为的生物学改变、病理损伤、功能紊乱，或者降低对外界环境的反应能力。
第一章绪论毒理学（Toxicology）：研究外源性化学物质对生物机体的损害作用的学科(传统定义) 。
现代毒理学(modern Toxicology )：研究所有外源因素（如化学、物理和生物因素）对生物体和生物系统的损害作用/有害效应与机制，以及中毒的预防、诊断和救治的科学。
现代毒理学的研究内容：三大研究领域：描述毒理学(descriptive toxicology)机制毒理学(mechanistic toxicology)管理毒理学(regulatory toxicology)。
描述毒理学工作者直接关注的是外源性物质的毒性鉴定，以期为xx评价和管理法规与措施的制订提供基础资料。
机制毒理学的研究重点旨在识别和了解外源和内源因素对生物系统产生损害作用的细胞、生化和分子机制。
管理毒理学根据描述毒理学和机制毒理学工作者提供的研究资料进行科学决策，协助政府部门制订相关法规条例和管理措施并付诸实施，以确保化学品、药品、食品等进入市场足够安全，达到保护人群健康的目的。
毒理学研究方法：动物实验或体内试验、体外试验、人体观察和流行病学研究。
毒理学应用：xx评价、危险度评定、危险性管理与交流。
毒理学替代法▲：“3Rs”法，即优化实验程序，提高实验动物xx，降低或消除动物疼痛或痛苦的方法；减少实验动物使用数量并能实现预期研究目标的方法，替代整体动物实验的方法，例如采用细胞、组织或特定的动物器官等进行的体外试验，选用昆虫等模型生物进行的体内试验，以及利用理化技术和计算模型预测独行的方法。
第二章毒理学基本概念外源化学物(xenobiotics)：是在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触并进入机体在体内呈现一定的生物学作用的一些化学物质，又称为“外源生物活性物质”。
毒性（toxicity）：指化学物质引起有害作用的固有能力。
剂量相同时，对机体损害能力越大的化学物质，毒性越高。
相对于同一损害指标，需要剂量越小的化学物质，其毒性越大。
根据实验结果对毒物进行毒性评价，称为一般毒性评价(evaluationfor general toxity)。
毒物的一般毒性作用研究是毒理学的重要内容；是化学物毒理学安全性评价和危险度评定的基础；防治毒物所致急、慢性中毒；制订卫生标准及管理毒理学决策均有重要意义。
一般毒性(general toxicity)分为:急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性所进行的用以观察毒效应、评价化学毒物综合毒性的哺乳动物试验分为：急性毒性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验一般毒性评价目的：1.确定受试物毒作用表现和性质；2.确定受试物毒作用剂量-反应/效应关系；3.确定毒作用靶器官；4.确定损害是否可逆。
一般毒性品评价试验动物选择：物种选择：1.吸收、代谢、生物化学和毒理学特征与人类最接近；2.易于饲养和操作；3.经济、易获得；4.自然寿命不太长。
品系：品系纯化，有稳定性和可比性；选用两种以上动物级别:清洁级或以上动物；SPF(无特殊病原体动物）及GF（无菌动物）性别：一般为雌雄各半；敏感性有性别差异时应选择敏感的性别年龄、体重：1.急性毒性评价试验用成年动物2.亚慢性、慢性评价试验用年幼或初断乳动物体重不超过平均体重20%，或按规定。
检疫：检疫期内出现异常者应放弃。
染毒方式：1.经口(胃肠道）染毒:喂饲、灌胃、吞咽胶囊；2.经呼吸道染毒：吸入接触（静式吸入动式吸入）、受试物注入动物气管3.经皮肤染毒：定性试验、定量试验4.经注射途径染毒：腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。
急性毒性(acute toxicity)：指机体(人或实验动物)一次接触或24h内多次接触化学物后，短期(14d内)发生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化及死亡效应。
一次接触指瞬间给实验动物染毒，如经口、经注射途径染毒。
但经呼吸道或经皮，则指在特定期间使动物持续接触化学物的过程。
“一次”含有时间因素。
此外，当化学物毒性很低需给予较大剂量时，可在24h内多次给予，这时的急性接触即为“多次”。
急性毒性试验的目的：○①测出化合物一种或几种动物的LD50及其它急性毒性参数，以了解急性毒作用强度；②探索急性毒性的剂量-反应关系，并通过观察中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官，初步评价对人损害的危险性。
③为进一步毒理学试验剂量设计提供参考。
④提供毒理学机制研究的初步线索。
急性毒性试验常用参数○1最常用的是LD50（或LC50）○2其次为Zac(LD50/Limac)○3在一些毒性上、下限指标中，目前主张用LD84/LD16或LC84/LC16的比值。
○4比较2种以上，LD50相同/近似的毒物的致死毒性时还可用毒物的剂量-反应曲线斜率(死亡率概率单位与剂量对数回归直线的斜率)表示。
急性毒性试验物种选择:以选择哺乳动物为主，首选大鼠：年龄与性别：成年大鼠，一般雌雄各半；雌、雄分别求LD50。
若是为致畸试验作准备，可仅作雌性LD50。
染毒剂量与分组：○1了解化学物的一般性质○2预实验剂量设计：有相关资料（找出近似化合物资料、设定预期毒性中值、以4倍计量差为组距设计剂量组）；无相关资料（最大耐受剂量试验、最低剂量组试验）○3正式试验剂量设计：寇氏法、改进寇氏法（又称Karber法或平均致死量法）；Horn 法；Bliss法（又称最大似然性法）。
○4经典方法替代方法：限量试验、固定剂量法、急性毒性分级法、上-下移动法【改进寇氏法：利用剂量对数与死亡率呈S型曲线设计，又称Karber法或平均致死量法。
优点：计算简便、准确率高。
要求：每组动物数相同，组距等比，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率＜20％，最高剂量组死亡率＞80％。
Bliss法：又称最大似然性法，是最精确的LD50计算方法。
我国《新药临床前毒理学研究指导原则》及《新药(西药)毒理技术要求规范》均推荐此法。
设计要求不像前三法那么苛刻。
但计算较复杂，多利用计算机软件(如中山医科大编制的《多功能半数致死量软件》)运算。
Horn氏法：利用剂量对数与死亡率的概率单位呈直线关系而设计，又称平均移动法或剂量递增法。
优点：省动物；可直接查表求出LD50及其95％可信限。
缺点：LD50的95％可信限范围大，方法精确度不够。
○1分4个剂量组；每组动物数相等，4或5只；○2剂量组距为等比；按剂量范围宽窄，分2个剂量系列（组距2.15倍或组距3.16倍）。
○3根依据每组动物数、组距和每组死亡数，查表求出LD50及其95％可信限。
序贯法：利用序贯设计原理，又称平均数法、阶梯法或上-下法，先用一剂量试验，若动物死亡，则用下一个较小剂量试验，若仍死亡则以更小剂量试探；如动物存活,则以较大剂量试探，依次类推,最终求出LD50。
优点：节省动物，一般12～14±只即够。
缺点：只适于快速出现中毒反应及死亡的毒物，不适合迟发性毒物。
】动物数与分组：根据评价程序规定采用的LD50计算方法。
○1概率单位法、改进寇氏法、Bliss 法要求5~7个剂量组，每组10只动物或10只以上；○2霍恩氏（Horn）法要求4个剂量组组动物，每组4或5只；○3序贯法（平均数法、阶梯法、上-下法）：由第一只动物反应决定第二只接受剂量，一般使用12~14只；○4固定计量法：4个剂量，每个剂量至少10只；○5急性毒性分级法：平均2~4个阶段，每阶段3只。
急性毒性替代试验：○1固定剂量法：预先选定或固定的一系列剂量染毒，观察化学物的毒性反应，进行分级。
不以动物死亡为观察终点。
○2急性毒性分级法：应用于啮齿类动物，以死亡为终点从三个固定剂量中选一个，分阶段进行。
每阶段3只，根据死亡动物数进入下一阶段，以较高或较低水平进行试验。
○3上下移动法：以死亡为终点，需要选择一个较合适的剂量范围。
根据资料初步确定第一个动物接受的剂量，由该动物染毒后反应，决定第2只动物接受的剂量。
试验周期与毒效应观察：○1LD50(LC50)，要求计算染毒后14d内的死亡数。
○2对速杀型毒物，可按24h死亡率求LD50(LC50)，与14dLD50(LC50)往往无明显差别，但报告中应注明为24hLD50(LC50)，便于毒性比较。
○3观察中毒表现，对了解急性毒作用特征很重要，可补充单纯以LD50(LC50)表示急性毒性的不足。
中毒表现：○1中毒症状：出现的中毒症状、时间、发展经过、死前特征及死亡时间等。
主要观察内容见表6-2。
○2体重：在观察期14d内称存活动物体重变化，以了解毒效应持续时间。
○3病理检查及其它指标：死亡动物及时作大体解剖和病理组织学检查，观察期结束时对存活动物进行大体病理检查，必要时做组织病理学检查。
○4死亡及死亡时间：观察和记录每只动物的死亡时间，特别是最早死亡时间及各组死亡数。
LD50 意义：○1标化化学物毒作用强度，评价毒性大小；○2计算毒性剂量距离；○3为后续的试验提供参考剂量；○4比较不同途径的LD50值，提供生物利用度信息；○5LD50试验结果外推至人的致死剂量和中毒症状。
LD50试验局限性：可提供的有效信息少；波动性大；物种差异、个体差异明显；经典试验耗费动物较多。
局部刺激试验（local toxic effect）：亦称局部刺激试验，指机体暴露与化学物后，在其接触和暴露部分造成的局部毒性损伤、刺激（如眼刺激、皮肤刺激）和或变态反应等。
局部刺激试验目的：○1了解外源化学物对皮肤、眼睛的局部刺激性和腐蚀性，包括眼刺激、皮肤刺激试验。
○2在我国，农药、化学品和消毒剂试验程序规定局部刺激试验为必做项目眼刺激试验观察终点：○1眼刺激：眼前表面接触受试物后眼睛产生可逆性炎症变化；○2眼腐蚀：眼前表面接触受试物后眼睛产生不可逆性组织损伤。
观察内容：○1结膜：红、球结膜水肿、分泌物○2角膜：混浊范围及程度○3虹膜：充血、肿胀、角膜周围充血。
观察期限：一般为7天，必要时可延长至21天皮肤原发性刺激试验观察终点：皮肤刺激和皮肤腐蚀；观察内容：色斑、水肿。
观察时间：症状消失或出现不可逆刺激，不超过14天。
不适宜做皮肤刺激试验情况○1强腐蚀性物质（pH<=2,pH>11.5)；○2急性经皮试验显示强系统毒性；○3急性经皮试验染毒剂量至2000mg/kg 时无皮肤刺激。
影响因素：1.皮肤完整性；2.固态受试物物理特性；3.受试物溶解状态；4.受试物染毒时封闭严密程度；5.实验动物年龄及受试部位；6.动物种属差异；7.个人主管判断差别；8.人实际接触受试物方式与试验动物接触方式差异。
皮肤反应敏感性顺序：兔>豚鼠>人>猪；试验结果外推至人时应注意眼刺激替代试验：鸡胚绒毛膜尿囊膜试验、绒毛膜尿囊膜苔盼蓝染色试验、荧光素漏出试验皮肤刺激替代试验：人工皮肤模型皮肤致敏：对化学物的免疫介导反应在皮肤上表现出一系列症状。
人体可见瘙痒、红斑、水肿、丘疹、小水疱、大疱等。
动物反应常仅见红斑和水肿。
皮肤致敏试验分为福氏完全佐剂法、不加佐剂法（不加佐剂，抗原量增大到10~20倍）皮肤致敏试验目的：预测化学物经皮接触对人引起皮肤致敏的危害皮肤致敏试验方法：检疫——脱毛、观察有无破损—（24小时后）—诱导接触—（10～14天）—激发接触—（24h后）—观察结果（24h、48h、72h）——分析评价。
观察内容：色斑、水肿皮肤刺激试验与皮肤致敏试验的区别：○1皮肤刺激试验：一次接触一定时间后观察可逆或不可逆作用，一般观察不超过14天；○2皮肤致敏试验：a诱导接触：低浓度或中等浓度受试物对皮肤重复染毒；b间隔10~14天；c激发接触：低于诱导剂量对动物未染过毒的皮肤涂抹，观察24h、48h、72h皮肤反应短期、亚慢性和慢性毒作用蓄积作用(accumulation)储存库(depot)。
物质蓄积(material accumulation)功能蓄积(functional accumulation)蓄积作用意义：○1蓄积作用是慢性中毒的基础。
○2求出蓄积系数K，了解化学物蓄积毒性的强弱，为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供基础资料。
应用：○1若大鼠经口LD50＞5000mg/kg，或已作过代谢试验有T1/2数据者，可不做蓄积毒性试验。
○2注意急性非致死性实验主要靶器官是否与亚急性试验一致。
蓄积系数法：以生物效应为指标，用经验系数(K)评价蓄积作用，即将多次染毒与一次染毒所产生的毒性效应(或死亡)进行比较。
蓄积系数(accumulation coefficient)：是多次染毒使半数动物出现效应(或死亡)的累积剂量[ED50(n)]与一次染毒使半数动物出现相同效应(或死亡)的剂量[ED50(1)]的比值，即K＝ED50(n)/ED50(1)，试验中多用小鼠或大鼠，以死亡一半为效应指标，K值计算公式也可改为K＝LD50(n)/LD50(1)蓄积系数分级标准：蓄积系数(K) 蓄积毒性分级＜1 高度蓄积1～明显蓄积3～中等蓄积5～轻度蓄积K值↓→蓄积性↑蓄积系数法优点：方法简便，对评价蓄积作用有一定价值。
