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多糖含量测定的方法综述
一、酚硫酸法
酚硫酸法是一种常用的多糖含量测定方法，适用于测定淀粉、纤维素等多糖物质的含量。
其原理是将多糖溶液与酚和浓硫酸混合后，形成酚硫酸复合物，从而产生深紫色的化合物，并通过分光光度计测定其吸光度，进而计算出多糖的含量。
酚硫酸法操作简便、结果稳定可靠，因此在食品和医药领域得到广泛应用。
多糖含量测定方法多样，各有特点，可以根据不同的多糖种类和样品性质选择合适的测定方法。
未来随着科学技术的不断发展，多糖含量测定方法也将不断完善和创新，为多糖相关研究和产业应用提供更加可靠、高效的技术手段。
改良的苯酚硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究一、本文概述多糖和寡糖作为生命体系中的重要组成部分，广泛存在于各类生物体内，具有多种生物学功能，如能量储存、细胞识别、信号传导等。
因此，准确测定多糖和寡糖的含量对于理解其生物学作用以及评估其在食品、医药等领域的应用价值具有重要意义。
传统的苯酚硫酸法是一种常用的多糖和寡糖含量测定方法，但由于其存在的一些局限性，如灵敏度低、抗干扰能力差等，使得该方法在实际应用中受到一定的限制。
因此，本文旨在研究改良的苯酚硫酸法，以提高其测定多糖和寡糖含量的准确性和稳定性，为多糖和寡糖的研究和应用提供更为可靠的分析方法。
本文首先将对传统的苯酚硫酸法进行详细的介绍和分析，阐述其原理、操作步骤以及存在的问题。
在此基础上，本文将详细介绍改良的苯酚硫酸法的具体实施方案，包括试剂的选择、反应条件的优化、干扰物质的排除等方面。
随后，本文将通过一系列的实验验证改良后的方法的可行性和准确性，包括标准曲线的绘制、精密度和稳定性的考察、实际样品的测定等。
本文将对改良的苯酚硫酸法的应用前景进行展望，探讨其在多糖和寡糖研究以及相关领域的应用价值。
通过本文的研究，期望能够为多糖和寡糖含量的准确测定提供一种更为可靠的分析方法，为相关领域的研究和应用提供有益的参考。
二、材料与方法本实验所使用的主要试剂包括苯酚、硫酸、多糖标准品（如葡萄糖、果糖等）以及待测的多糖和寡糖样品。
所有试剂均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。
实验所需设备包括电子天平、水浴锅、分光光度计、离心机等。
苯酚硫酸法是一种基于多糖和寡糖在浓硫酸作用下与苯酚发生显色反应的原理来测定其含量的方法。
在酸性条件下，多糖和寡糖会被硫酸水解成单糖，随后与苯酚发生缩合反应，生成有色化合物，其颜色深浅与多糖和寡糖的含量成正比。
（1）标准曲线的绘制：准确称取适量多糖标准品，用蒸馏水配制成不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液与苯酚硫酸试剂混合，于沸水浴中加热一定时间后冷却，用分光光度计测定各溶液在特定波长下的吸光度。
红参为五加科植物人参（panax ginseng C.A.M ey.）的栽培品经蒸制后的干燥根和根茎[1]。
红参具有抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、降血糖等功效[2~6]。
红参加工过程中，生产者为追求其表观质量、延长保存期，会适量加入外源糖，食用过程中会掩盖人参固有多糖活性，因此，建立红参外源糖添加量检测方法尤为必要。
3,5-二硝基水杨酸（DNS ）比色法是还原糖测定的一种常用方法。
蔗糖属非还原二糖，若要测定需要对样品进行水解，且步骤繁琐。
苯酚-硫酸比色法是用于溶液中总糖含量测定的常见方法，方法简便、测定速度快。
然而文献报导的苯酚-硫酸法测定总糖含量存在差异，如吸收光谱、试剂用量、显色温度等均对测定结果的准确性有直接影响。
为了能准确测定红参中水溶性总糖含量，本研究对苯酚-红参中外源糖含量的测定张浩１，许世泉１，张瑞１，陈少麟２，王英平１※（1.中国农业科学院特产研究所，吉林吉林132109；2.抚松县人参研究所，吉林抚松134500）摘要：通过对紫外吸收光谱、试剂用量、显色温度等因素进行考查，确定苯酚-硫酸法测定红参单寡糖含量的最佳试验条件。
结果表明，5%苯酚1mL 、硫酸7mL 、60℃保温30min 、检测波长490nm 时，葡萄糖检测浓度在20~120μg/mL 范围内与吸光度呈良好的线性关系（R 2=0.9993），平均回收率100.3%，RSD=2.99%。
该方法操作简便，精密度、重现性、稳定性良好，测得加糖红参中单寡糖含量是未加糖红参（对照）的2~4倍，可用于红参外源糖的检测。
关键词：苯酚-硫酸；红参；多糖中图分类号：R284.1文献标识码：AStudy on Detection of Exogenous Sugars of Red GinsengZHANG Hao 1，XU Shi-quan 1，ZHANG Rui 1，CHEN Shao-lin 2，WANG Ying-ping 1※（1.Institute of Special Wild Economic Animals and Plants,Chinese Academy of AgriculturalSciences,Jilin 132109,China;2.Fusong Institute of Ginseng,Fusong 134500,China ）Abstract ：In order to determine the optimum testing conditions,the wave length,reagents and reaction temperature etc were investigated.Results showed that when the 1.0mL of 5%phenol aqueous solution and 7.0mL of concentrated sulfuric acid were used to complete the reaction at 60℃,glucose had a good liner relationship (R 2=0.993)with absorbency ranged from 20to 120μg/mL,and with an average recovery rate of 100.3%,RSD=2.99%.Total content of oligosaccharides in red ginseng (added sugar)was 2~4times higher than CK.This method,with good precision,reproducibility and stability,was simple and convenient,and was suitable for detection of red ginseng foreign sugar.Key words ：Phenol-sulfuric acid;Red ginseng;Polysaccharide收稿日期：2011-05-31作者简介：张浩（1983-），男，吉林省永吉县人，硕士，从事药用植物栽培与加工研究。
总糖含量的测定苯酚硫酸法
总糖含量的测定苯酚-硫酸法的实验原理为：苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
实验材料包括葡萄糖试剂、试剂盒、浓硫酸、苯酚等，实验步骤如下：
1. 材料处理：将0.5～1g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。
2. 标准曲线制作：取50μg/ml的己糖标准溶液0ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml于试管中，用水补足到0.5ml，加0.3ml 5%酚溶液，混匀后快速加入1.8ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490nm处比色测定读OD值。
以糖含量为横坐标，相应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品含量测定：取0.5ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3ml 5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8ml，振荡混匀，达室温后，可测490nm处的OD值，从标准曲线上查相应糖含量。
该方法不需要沸水浴加热，且蛋白质的存在对显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定，还可用于己糖甲基化衍生物和6-脱氧核糖、戊糖的测定。
除此之外，该方法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且应立即混匀，试管应大一些，以免烫手。
随着对生物药物、天然药物和保健食品研究的深入，多糖的研究进展很快。
目前多糖含量的测定方法尚无统一标准，广泛应用的是苯酚－硫酸比色法。
该法具有简单、快速、无需多糖纯品和贵重仪器等优点，且对水溶性样品和非水溶性样品均可测定。
１ 苯酚－硫酸比色法原理苯酚－硫酸比色法测定多糖含量是由Ｄｕｂｏｉｓ等［１，２］提出的。
其原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长４９０ｎｍ处和一定浓度范围内，其吸光度Ａ值与糖浓度Ｃ呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
２ 实验方法２．１ 标准溶液的配制精密称取１０５℃下干燥至恒重的葡萄糖约１００．０ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，配得葡萄糖标准溶液。
２．２ 供试品贮备液的配制将样品进行适当处理（如真空干燥、回流提取等，根据各品种不同而有差异），取适量，按一定比例稀释，配制供试品贮备液。
２．３ 苯酚溶液的配制称取苯酚１００ｇ，加铝片０．１ｇ和碳酸氢钠０．０５ｇ，常压蒸馏，收集（１８０±２）℃馏分。
精密称取该馏分约１０．０ｇ置于２００ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀后转置于棕色试剂瓶中，即得苯酚溶液，将其置于冰箱中备用。
２．４ 测定条件选择２．４．１ 反应温度选择 精密吸取供试品贮备液、葡萄糖标准液各１．０ｍＬ于１００ｍＬ量瓶中，用水稀释至刻度，分别作为供试品溶液和对照品溶液。
分别吸取供试品溶液１．０ｍＬ于两个具塞试管中，各加苯酚液１．０ｍＬ，并分别迅速滴加浓硫酸５．０ｍＬ。
一份于水浴中煮沸１５ｍｉｎ，另一份于４０℃水浴中恒温３０ｍｉｎ。
另取两份对照品溶液１．０ｍＬ同上操作。
取出，冷却至室温，１５ｍｉｎ后于４９０ｎｍ处测其Ａ值，选取Ａ较高的作为实验温度。
２．４．２ 苯酚及硫酸用量选择 分别吸取供试品液和对照品液１．０ｍＬ５份，各加入苯酚液０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ，加水至２．０ｍＬ，再各滴加浓硫酸５．０ｍＬ，４０℃恒温３０ｍｉｎ后，测其Ａ值，从苯酚液加入量达到某一值开始，Ａ值基本保持不变，说明苯酚液量达到该值以上时，反应都能完成。
苯酚-硫酸比色法测定三黄糖敏汤中总多糖含量靳淑敏;周娜;董振咏;白莉;韩茹;耿文婧【摘要】目的建立三黄糖敏汤中总多糖含量测定方法.方法以葡萄糖为对照品,采用苯酚-硫酸比色法,在490 nm处测定吸光度.结果葡萄糖浓度在2.95～8.85 mg/L范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.999 3);平均回收率为98.1％,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.7％,测得三黄糖敏汤中总多糖含量为5.9g/L,RSD为2.9％.结论该方法简便准确、稳定可靠,可作为该制剂中总多糖含量的测定方法.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(036)008【总页数】3页(P980-982)【关键词】三黄糖敏汤;多糖类;质量控制【作者】靳淑敏;周娜;董振咏;白莉;韩茹;耿文婧【作者单位】河北省石家庄市第一医院药学部,河北石家庄050011;河北医科大学药学院药物分析教研室,河北石家庄050017;河北省石家庄市第一医院药学部,河北石家庄050011;河北省石家庄市第一医院药学部,河北石家庄050011;河北省石家庄市第一医院药学部,河北石家庄050011;河北省石家庄市第一医院中医科,河北石家庄050011【正文语种】中文【中图分类】R917三黄糖敏汤由黄芪、黄精、黄连、枸杞、知母、桑叶、麦冬、水蛭、荔枝核九味中药组成，临床上主要用于改善胰岛素抵抗症状，增加胰岛素敏感性，可联合二甲双胍治疗2型糖尿病胰岛素抵抗症状［1］。
该方黄芪、黄连、黄精等均含有大量的多糖类有效成分，多糖具有降血糖、降血脂、抗血栓、抗溃疡、抗肝炎、抗肿瘤、延缓衰老、免疫调节等功能［2-5］。
已报道的多糖含量测定方法有苯酚-硫酸比色法、蒽酮-硫酸比色法、高效液相色谱法、气相色谱法［6-9］等，其中苯酚-硫酸比色法常用于总多糖的测定。
目前，三黄糖敏汤中总多糖的含量测定方法尚未见报道。
2005年1月第12卷第1期 中国中医药信息杂志 ·45··制剂与工艺·苯酚-硫酸法测定多糖含量显色方式的优选罗毅1,潘细贵1,刘刚1,李运飞2(1.武汉大学人民医院药学部,湖北 武汉 430060；2.武汉大学药学院,湖北 武汉 430060)摘要：目的 优选在以葡萄糖为对照时,苯酚-硫酸法测定多糖含量的显色方式。
方法 采用正交试验法。
结果 对正交试验结果进行直观分析和方差分析,优选显色方式为：取待测溶液2.0 mL,加入5%苯酚液1.0 mL,混匀,迅速滴加浓硫酸7.5 mL,摇匀,室温放置15 min,然后置冷水中冷却30 min,在490 nm波长处测定。
结论 优选的显色方式操作更简便、易行。
关键词：苯酚-硫酸法；多糖；显色方式中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1005-5304(2005)01-0045-02Optimization of the Way of Coloration in the Process of Determining Polysaccharide Content by Phenol-Sulfuric Acid Method LUO Yi, PAN Xi-gui, LIU Gang, et al(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060,China)Abstract：Objective To optimize the way of coloration in the process of determining polysaccharide content by phenol-sulfuric acid method, using only glucose as the standard. Method By orthogonal test.Results After synthesizing the results of direct analysis and variance analysis, the optimum way of coloration was obtained as follows: 1.0 mL 5% phenol solution was added to 2.0 mLtesting solution and mixed. Then 7.5 mL concentrated sulfuric acid was added quickly drop by drop.After set at ambience for 15 min and cooled following in cold water for 30 min, the solution was detected at wavelength of 490 nm. Conclusion The optimum way of coloration can be easily controlled and operated.Key words：phenol-sulfuric acid method；polysaccharide；the way of coloration多糖是许多中药所含的一类高分子化合物,多具有增强免疫力、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等生理活性,其含量常作为评价一些中药材及中药制剂质量的指标[1-3]。
