微生物样本准备说明(适用于DNA,RNA,蛋白实验)

微生物样品前处理作业指导书1.目的：为保证微生物样品检测的有效性，必须有合理的方法指导。

2.适用范围：食品（微生物检测）样品的前处理。

3.职责：由微生物操作人员进行微生物检测前的样品前处理。

4.操作步骤：1实验室接到送检样品后应认真核对登记,确保样品的相关信息完整并符合检验要求。

1.1.2实验室应按要求尽快检验。

若不能及时检验，应采取必要的措施保持样品的原有状态，防止样品中目标微生物因客观条件的干扰而发生变化。

1.1.3冷冻食品应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻后进行检验。

1.2检验方法的选择1.2.1应选择现行有效的国家标准方法。

1.2.2食品微生物检验方法标准中对同一检验项目有两个及两个以上定性检验方法时，应以常规培养方法为基准方法。

1.2.3食品微生物检验方法标准中对同一检验项目有两个及两个以上定量检验方法时，应以平板计数法为基准方法。

2前处理步骤2.1肉与肉制品检验按GB/T 4789.17-2003执行蛋与蛋制品检验按GB/T 4789.19-2003执行水产食品检验按GB/T 4789.20-2003执行冷冻饮品、饮料检验按GB/T 4789.21-2003执行调味品检验按GB/T 4789.22-2003执行冷食菜、豆制品检验按GB/T 4789.23-2003执行糖果、糕点、蜜饯检验按GB/T 4789.24-2003执行酒类产品前处理按GB 4789.25-2003执行2.2其他产品按GB 4789.1-2016及GB 4789.2-2016中步骤进行样品的稀释2.2.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

2.2.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

临床微生物标本采集作业指导书一、引言本文档旨在提供临床微生物标本采集作业的指导，以确保标本采集的质量和准确性。

本指导书适用于医疗机构的相关工作人员，包括医生、护士和实验室技术人员等。

二、目的准确的微生物标本采集是诊断和治疗感染病例的重要环节。

本指导书的目的是提供清晰的指导，确保标本的采集过程符合规范，以减少错误和污染的风险，从而提高诊断的准确性。

三、采集前准备在进行微生物标本采集之前，需要做好以下准备工作：1.了解标本类型和采集方法：不同类型的标本需要采集不同的方法，例如血液标本、尿液标本和呼吸道标本等。

在采集前要了解每种标本的采集方法和要求。

2.准备采集工具和材料：根据标本类型和采集方法，准备好相应的工具和材料，例如采血针、尿液收集容器和标本袋等。

3.按照消毒和无菌要求准备采集区域：在采集前要确保采集区域干净、消毒和无菌。

根据需要，可以使用消毒剂和无菌覆盖物等。

四、标本采集步骤4.1 血液标本采集血液标本采集是常见的微生物标本采集方法之一。

下面是血液标本采集的步骤：1.确定采集部位：通常选择患者的上臂静脉作为采集部位。

2.消毒：用75%乙醇消毒采集部位，采用无菌棉球擦拭。

3.选择合适的采血针：根据患者的年龄和采血需要选择合适的采血针。

4.采集血液：在消毒后，用采血针穿刺患者的静脉，收集所需的血液量。

5.采集完毕后，用无菌棉球和胶布固定针头，然后将血液转移到标本管中。

6.标本管标记：在标本管上正确标记患者的信息和采集时间等。

4.2 尿液标本采集尿液标本采集常用于泌尿系统感染的诊断。

以下是尿液标本采集的步骤：1.洗手：采集前要洗手并戴好一次性手套。

2.选择合适的容器：选择容量合适的尿液收集容器。

3.女性患者：清洁外阴部，将尿液收集容器放置在外阴，以接收尿液。

4.男性患者：将尿液收集容器放置在清洁的阴茎上方，以接收尿液。

5.患者采集尿液：患者尽量采集中段尿，避免采集到开始或结束的尿液。

6.收集完毕后将尿液收集容器密封，标记患者的信息和采集时间等。

微生物检验的基本操作技术一、样品的制备与处理1.样品的选择与采集：根据检验目的和要求，选择适当的样品，并根据采样规范进行取样。

比如，对食品的微生物检验，可以选择不同部位的样品，如表面、内部等；对饮用水的微生物检验，可以选择源头水、管网水等；对环境的微生物检验，可以选择空气、地表水等。

2.样品的保存与运输：为了避免样品中微生物的生长和变化，需要将样品保存在适当的条件下（如低温、暗处等）。

同时，在运输过程中，需要避免样品的污染和损坏。

3.样品的处理：样品处理过程通常包括样品的搅拌、过滤、稀释等。

搅拌可以均匀样品中的微生物分布；过滤可以去除样品中的固体颗粒；稀释可以将样品中微生物的浓度调整到适宜的浓度范围，以便后续的检测操作。

二、微生物的分离与纯化1.微生物培养基的选择：根据待检微生物的特性和对检测结果的要求，选择适当的培养基。

常用的培养基有通用培养基、选择性培养基和特殊培养基。

2.菌落计数：将经过处理的样品按照一定的稀释倍数进行均匀悬浮，并于培养基平板上进行接种。

经过一段时间的培养，可通过菌落的外观、形状、大小、颜色等来初步判断微生物的种类和数量。

3.纯化子菌株：从菌落中选取代表性菌落，通过反复传代培养，最终得到纯种菌株。

三、微生物的鉴定与鉴别1.形态学观察：通过显微镜观察微生物的形态特征，如细胞形状、大小、结构等，可以初步鉴定微生物的类别。

2.生理生化试验：通过微生物的代谢特性进行鉴定。

常用的生理生化试验包括氧需求性试验、酸碱反应试验、温度试验、营养需求试验、代谢产物试验等。

3.分子生物学手段：通过分子生物学技术，如聚合酶链反应（PCR）、DNA序列比对等，对微生物进行进一步的鉴定和鉴别。

例如，利用16SrRNA基因作为分子标志物，可以快速、准确地识别微生物种类。

四、微生物的计数与统计1.液体中微生物的计数：通过在培养基中逐级稀释样品，最后将稀释液接种于平板上，培养一段时间后，根据培养基中菌落的数量进行计数，以反推样品中微生物的浓度。

报告编号：LX-FS-A97458 微生物学实验报告格式标准范本The Stage T asks Completed According T o The Plan Reflect The Basic Situation In The Work And The Lessons Learned In The Work, So As T o Obtain Further Guidance From The Superior.编写：_________________________审批：_________________________时间：________年_____月_____日A4打印/ 新修订/ 完整/ 内容可编辑微生物学实验报告格式标准范本使用说明：本报告资料适用于按计划完成的阶段任务而进行的，反映工作中的基本情况、工作中取得的经验教训、存在的问题以及今后工作设想的汇报，以取得上级的进一步指导作用。

资料内容可按真实状况进行条款调整，套用时请仔细阅读。

专业学号姓名实验一、···培养基的配制和高压蒸汽灭菌一、实验目的二、实验原理三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量）四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭）五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）六、思考题1、简述培养基的配制原则？2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？实验二自生固氮菌的分离纯化（这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。

）一、实验目的二、实验原理三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出）四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤）五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）六、思考题1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？实验三平板培养测数法一、实验目的二、实验原理三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出）四、实验步骤（详叙相关步骤）五、实验结果六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）七、思考题1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。

DNA提取仔细看试剂盒说明书！使用前：1.在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇（加入量看瓶标签）2.若缓冲液GA或GB有沉淀，37℃水浴溶解，摇匀后使用简要步骤如下：1.冻存全血37℃快速融化，取200μL血液加20μL Proteinase K溶液，混匀。

2.加200μL缓冲液GB，颠倒混匀数次，70℃放置10min，溶液应变清亮，瞬时离心。

3.加200μL无水乙醇，振荡混匀15s，可能会有絮状沉淀，瞬时离心。

4.将所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱CB3（吸附柱放入收集管），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

5.向CB3中加入500μL缓冲液GD（检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

6.向CB3中加入600μL漂洗液PW（检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

7.重复步骤6.8.将CB3放回收集管，12000rpm（~13400g）离心2min，弃废液。

将CB3置于室温放置数分钟，以挥发残留的乙醇。

9.将CB3转入一1.5mL Ep管，向吸附膜中间部位悬空滴加50μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12000rpm（~13400g）离心2min，备用。

DNA/RNA浓度测定使用仪器：ND-1000使用方法：1.保持检测区域的清洁。

准备无RNA酶水，使用前润洗点样区1-2次。

2.打开软件，在点样区滴加1μL无RNA酶水，选择核酸种类（DNA/RNA），设置blank。

3.滴加1μL待测样本，记录浓度和纯度。

4.用纸巾擦去样品，再用无RNA酶水清洗1-2次。

5.关闭软件，关闭电脑，将机器盖上防尘布。

DNA PCR扩增反应体系：模板DNA 500ng10*buffer 2.5 μL25mM MgCl2 1.5 μL2.5mM dNTP 2μL10μM引物各0.4μLTaq酶0.25μL补水至25ul反应条件：95℃3min，（94℃30s，60℃30s，72℃30s），35个循环，72℃5minPCR产物2%琼脂糖凝胶电泳1.小胶（1/4）25mL ,中胶（1/2）50 mL ,大胶 100 mL。

微生物标本操作流程一、采集标本1.根据需要使用的微生物种类，选择采集适当的标本类型，如血液、尿液、呼吸道分泌物、伤口分泌物等。

2.采集前洗手，戴好手套，保证操作无菌。

3.根据标本类型选择适当的采集方法，如穿刺、切开、吸引等。

4.采集标本时避免污染和损伤，采集的标本量要充足，确保后续实验的需要。

5.采集后立即将标本放入合适的容器中，并用合适的保存液固定标本。

二、保存标本1.封闭保存a.无菌标本应尽快处理。

b.根据需要，选择适当的保存方式：常温、4℃、-20℃，-80℃等。

c.使用密封标本袋、离心管等避免样本污染。

d.根据需求添加保存液，如生理盐水、甘油、琼脂糖等。

2.运输保存a.标本运输前应按照需要将标本进行适当保存。

c.标本运输时需要严格遵守相关的运输规定和防护措施，避免标本在运输过程中受到污染或损坏。

三、处理标本1.无菌条件下进行标本处理。

2.打开封闭的标本容器时，应尽量减小环境污染。

3.首先进行外部检查，检查标本是否完整，有无明显破损或渗漏。

4.根据需要，将标本分为不同的试管或培养皿中，避免不同菌种相互干扰。

5.针对具体需求，对标本进行不同的处理，如离心、稀释、加酶处理等。

四、传递标本1.打开封闭的标本容器时，应尽量减小环境污染。

3.准备适当的传递容器和传递材料，避免标本在传递过程中受到损坏或污染。

4.标本传递时应尽快送至指定的实验室，避免标本在传递过程中受到温度变化、时间延误等因素的影响。

五、清洗操作区域和工具1.实验完成后，需要对操作区域进行清洁2.清洗操作区域可以使用含有消毒剂的清洁剂，如含有氯己定的漂白粉或消毒液。

3.清洗使用过的工具，如采集器具和传递容器等，使用适当的清洁剂和消毒液进行清洗和消毒，保证无菌状态。

微生物标本操作流程的重点是保持标本的无菌状态，避免标本的污染和损伤。

在每一步操作中，都要严格遵守操作规程和消毒措施，以确保标本的质量和准确性。

此外，还需要根据具体实验需求，选择适当的保存液、保存条件和传递方法。

微生物检验操作规程《微生物检验操作规程》一、检验前准备1. 确保实验室环境清洁整洁，无菌操作台面及仪器设备；2. 熟悉操作规程，准备好所需的培养基、试剂和消毒液；3. 检查培养基和试剂的有效期，确保使用的培养基和试剂符合要求。

二、样本处理1. 将样本送检单与样本一同接收，并核对相关信息；2. 对样本进行消毒处理，避免污染实验室环境；3. 定量取样，确保取样的准确性和可靠性。

三、培养基制备1. 按照培养基说明书的要求，准备培养基，注意培养基的稀释和灭菌；2. 根据需要，将培养基注入培养皿中，准备好后放置在无菌条件下。

四、微生物接种1. 根据样本的来源，选择合适的培养基进行接种；2. 采用无菌技术，进行微生物接种，避免外部污染；3. 对接种的培养皿进行标记，清晰记录接种的菌种和数量。

五、培养条件1. 根据不同微生物的生长要求，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、气体组成等；2. 定期观察培养皿的生长情况，记录菌落形态、数量和颜色等信息。

六、鉴定和鉴定1. 根据菌落形态、生理生化特性等进行初步鉴定；2. 利用鉴定试剂或生化指标进行进一步鉴定；3. 如有需要，可进行分子生物学方法进行鉴定。

七、结果记录和报告1. 将鉴定结果详细记录在报告中，包括鉴定的微生物种类、数量、鉴定方法和结果等；2. 及时向送检单位提交检验报告，确保检验结果准确无误。

八、实验后清洁1. 将使用过的培养皿和试剂进行正确的处理和清洁；2. 对实验室操作台面和设备进行消毒，保持实验室环境整洁。

以上是《微生物检验操作规程》的基本操作流程，每一步的操作都应严格遵守操作规范，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。