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组培成功必备的几大要素组织培养（tissue culture）是一种在实验室或生物技术设施中，通过控制环境条件来培养植物组织或细胞的技术。
以下是组织培养成功必备的几大要素：1.无菌环境：无菌环境是组织培养成功的首要条件。
所有用于组织培养的材料，包括外植体、培养基、接种工具等，都必须进行严格的消毒处理，以防止细菌、真菌等微生物的污染。
实验室应配备超净工作台、紫外灯、高压蒸汽灭菌器等设备，确保无菌操作。
2.合适的培养基：植物组织培养的成功与否，很大程度上取决于所使用的培养基。
培养基应含有植物生长所需的营养成分，如糖、氨基酸、微量元素、维生素等，以及适量的植物生长调节剂，如生长素和细胞分裂素。
根据不同的植物种类和培养目的，可以选择不同的培养基。
3.适宜的温度和光照：在组织培养过程中，温度和光照也是影响成功的关键因素。
每种植物都有其最适的生长温度和光照条件。
一般来说，大多数植物在25-30℃的温度下和16-24小时的光照条件下生长良好。
4.外植体选择与处理：选择健康、无病虫害的植物材料作为外植体，并对材料进行适当的预处理，如清洗、消毒等，是组织培养成功的关键步骤。
此外，选择适合的外植体类型也对培养成功至关重要。
5.接种技术：接种是将外植体接入培养基的过程。
熟练的接种技术能够减少对植物组织的损伤，避免污染，并提高组织的存活率。
6.细胞分裂与增殖：在适宜的培养条件下，植物细胞会分裂并增殖形成愈伤组织。
这个过程需要定期观察和记录细胞的生长情况，及时调整培养条件以促进细胞的分裂和增殖。
7.生根与移植：当愈伤组织形成后，可以将其转移到生根培养基中，促使组织产生根系。
当根系形成后，可以将其移植到土壤中或进行其他后续实验。
8.遗传稳定性：为了确保组织培养后得到的植株是纯合的，并保持其遗传稳定性，需要采用适当的遗传检测方法。
这可以通过分子生物学方法，如DNA 指纹分析或基因表达分析来实现。
9.法规与伦理：在进行组织培养实验时，必须遵守相关的法规和伦理准则。
蓝莓组织培养方案1、植物介绍：1）供试材料来源：选取长势旺盛的幼嫩枝条，去除多余的叶片，切取除顶芽外的第3节~第10节作为外植体。
提供的材料希望老师可以从组培室提供。
2）技术路线：外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽2方法步骤：1）外植体的剪取与消毒程序的筛选：切取除顶芽外的第3节~第10节作为外植体段去叶片留叶柄→流水冲洗30min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3~7min→无菌水冲洗4~5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成带有1~2个腋芽的小段2)初代培养基的筛选：选用MS为最基本的培养基，根据需要的不同，添加激素6-BA、NAA、ZT。
3)增殖培养基的筛选：以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、ZT含量的不同，诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1~4号），生根培养基设2系列处理（培养基5~6号），培养基配方表如下：表中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g/L，pH值5.6~5.8，在115MPa气压下灭菌20min。
4)生根培养基的筛选不同的培养基进行生根的优势也不一样，根据大量的材料表明1/4 MS中的小苗生根均明显优于全量的MS培养基，所以用激素以IBA0.5mg/L效果最好，生根情况好且所需天数也最短。
最适培养基应该为1/4 MS+IBA 0.5mg/L5)试管苗移栽试验：当苗根长到1~1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基。
用多灵菌500~800倍浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。
苗床基质分5个处理，分别为沙：草炭土=1:1、沙：蛭石=1：1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。
（根据资料查找以腐苔藓为基质最好，成活率达80%以上，草炭土和沙半量也可达50%的成活率。
）。
组培实验---实验二外植体的灭菌、接种与初代培养一、实验目的通过实验初步掌握外植体材料消毒、接种的无菌操作技术以及外植体初代培养的方法。
二、实验原理植物组织培养是在无菌条件下对离体的植物器官或组织的培养。
而植株各部分的表面携带着各种不同的微生物，所以在接种前就必须选择合适的消毒剂对外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。
离体器官或组织受到适当刺激，便可进行器官分化，从而实现细胞的全能性。
三、实验材料、试剂和仪器设备1．实验材料：喜树当年生枝条2．试剂：升汞，吐温-803.仪器设备（以各组所需为例）无菌器材：4瓶培养基，一个无菌烧杯+吸水纸，1升无菌水，大号、中号镊子各1把，1把解剖刀、1把剪刀，2个500ml烧杯非无菌材料：0.1%升汞消毒液200ml，1个250ml消毒缸，1盏酒精灯及火机1个，1个烧杯，内装75%酒精150ml，1个烧杯，内装75%酒精及棉球，1把大号镊子、1把枝剪、1把解剖刀、1把旧牙刷，橡皮筋若干、标签纸、记号笔、洗衣粉、毛巾、喷雾器四、实验步骤1．实验一制备的培养基即是本实验所用培养基。
2．接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台。
房间用酒精喷雾降尘后打开超净工作台紫外灯及房间的紫外灯，照射约30mins；然后关闭紫外灯，打开房间换气扇以及超净工作台的风机，并微启超净工作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。
3．选取生长健壮的枝条，用饱满又未萌发的侧芽作为外植体（取中部的芽较好）。
将外植体用手术刀切去叶片，并剥去附在茎上的叶柄及皮刺，用毛刷沾洗衣粉刷洗并在自来水下冲洗干净。
吸干水份后切成约2-3cm的茎段，每段至少有1个侧芽。
将处理好的外植体转入洁净的消毒缸中，用加了数滴吐温-80的0.1%的升汞溶液浸泡10min。
在表面灭菌过程，应不停摇动消毒缸使消毒液与外植体充分接触。
4．进入接种间，用酒精棉球仔细擦拭双手至手腕部位5．把浸泡在消毒液中的外植体转移到超净工作台中。
植物组织培养的一般流程一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：1）准备阶段（然根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。
查阅相关文献，并经高压灭菌或过后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，滤除菌后备用。
2）外植体选择与消毒（将消毒后的外然后进行消毒处理。
选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，接种到初代培养基上。
植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，）初代培养（3促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。
原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。
（4）继代培养当芽苗繁殖到一分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。
进行脱毒苗培养的需提前定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。
进行病毒检测。
5）生根培养（提高生长素浓多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，刚形成的芽苗往往比较弱小，度，促进小苗生根，提高其健壮度。
6）炼苗移栽（选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。
当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
P P 1 、二、单项选择题1. 在衡量杂种优势（H ）时，超中优势的计算方法为（[F 1 -(P 1 +P A. H ＝2 分别表示两亲本的性状平均值，F 1 为杂种一代的性状平均值）：[F 1 -(P 1 +P 2 )/2]/(P 1 +P 2 )/2 D. H ＝2 )/2]/(P 1 -P 2 )/2 B. H ＝(F 1 -P 1 )/P 1 C. H ＝(F 1 -P 2 )/P 2层细胞发生突变，则下列器官或组织会发L II 2. 根据植物梢端组织发生层学说，如果生变异的是：中柱C. 不定根D. ．表皮A B. 种子3. 对于孢子体型自交不亲和而言，下列基因型的杂交组合能产生后代的是：S 1 S 2 B ．S 1 S 2 ×S 1 S 3 C ．S 1 S 2 ×．A S 1 S 2 ×S 2 S 3 D ．S 1 S 2 ×S 3 S44. 原始群体性状差异较大的异花授粉园林植物，实生选种时一般采用：A ．一次单株选择B ．一次混合选择C ．混合－单株选择D ．单株－混合选择5. 现有两种菊属植物，其染色体组类型分别为AABB 和CC ，则将它们进行体细胞杂交获得的谐和细胞杂种染色体组类型应该为： A. AABB B. ABC C. AABBCC D.CC6. 下列射线中，哪一种属于可以引起物质电离的电磁波？A ．X 射线B ．β射线C ．紫外线D ．激光7. 园林植物的多倍体与二倍体相比，一般会表现为：A ．气孔增多B ．花大色艳C ．适应性减弱D ．结实率增加8. 常用的化学诱变剂EMS （甲基磺酸乙酯）是一种：A ．碱基类似物B ．烷化剂C ．抗生素D ．生长调节物质9. 在下列有性杂交方式中，被称为双交的是：A ．(A ×B) ×(C ×D)B ．[(A ×B) ×B] ×BC ．A ×BD ．[(A ×B) ×C] ×D10. 对于繁殖系数较高的草花而言，有时为了加速其选种进程，下列哪个程序或圃地可以省略？A ．株系圃B ．品种比较预备试验圃C ．品种比较试验圃D ．区域试验三、填空题（每空0.5 分，共15 分）1. 园林植物品种应具备的三个基本特征是：___ 、___ 和___。
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养皿、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器皿的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾50g，加1L蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器皿的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器皿先将器皿中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3～4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤(一) 组培工厂的参观1．参观组培实验中心2．组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3．各室内仪器设备的种类及摆放(二) 设计一200m2组培工厂，要求绘出大概的布局图。
郁金香组织培养配方：MS＋6-BA2.0mg/L,NAA0.2mg/L+琼脂7g/L组员：李文强１３农学段绍泽１３农学彭新勇１３农学代光好１３农学郁金香组织培养一、简述郁金香(TulipagesnerianaL.)是一种世界名花, 欧美普遍种植。
郁金香的传统繁殖方式为分球繁殖, 繁殖系数低、速度慢,一个新品种投放市场需要25年时间同时由于栽培过程中病毒的侵染和其他原因, 其品种退化严重。
育种工作者急需寻求一种高产、优质、高效的繁殖方法。
而组织培养是快速繁殖的有效途径, 并在一定程度上抑制品种退化。
国际郁金香的组织培养始于20世纪70年代,国内最早的研究始于1983年笔者综述了郁金香组织培养的研究进展, 并展望了其应用前景,主要品种郁金香不同品种再生能力不同, 即使同一品种栽培环境不同, 再生能力也不同。
郁金香栽培品种有8 000多种, 主要栽培品种有130多种, 但是用于组织培养研究的只有20多种培养基的选择二、操作过程一般选择MS培养基作为基础培养基,生根培养基为1/2MS, 试验中经常选用6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2, 4二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、赤霉素(GA3 )、激动素(KT)等激素, pH值调至5.6～5.8,在培养过程中基本采用固体培养、而培养基中糖的含量为3% ～4%在生根培养中糖的含量减半或不变。
１．外植体的选择将郁金香鳞片、花茎、叶片、花托、腋芽、子房、花药、花瓣作外植体都有研究, 鳞片、花茎、叶片作为外植体材料来源充分,所以研究较多。
不同组织器官诱导效应不同, 这可能与植株的发育时期有关。
一般认为花茎诱导效应较好。
同时, 研究认为, 花茎切片厚度会影响愈伤组织的诱导能力, 一般切片厚度为2 ～5 mm。
２、愈伤组织的诱导、增殖和再生陆文梁等研究认为, 培养基中必须有细胞分裂素6-BA的存在,当培养基中只含有6-BA而无NAA时, 外植体可不经过愈伤组织直接成苗;当6-BA与NAA以1∶1配合使用时,外植体先形成愈伤组织而后分化成苗;当培养基中只含有NAA时,外植体只形成愈伤组织而不分化成苗, 这与Lenard等在郁金香离体培养上的观察结果一致。
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
植物组织培养的完整过程1.选择适宜的母体植物：选择具有优良性状和抗病虫害能力的母体植物，从中选择健康的叶片、茎段等组织作为外植体。
2.外植体的准备：将母体植物采集的叶片或茎段进行无菌处理，去除表面杂菌和泥沙，然后用75%酒精或漂白粉消毒外表。
3.外植体的切割：将无菌环境下的外植体切割成小片，大小约为0.5-1cm，同时尽量保持外植体的干燥，以防止外植体内部水分过多。
4.外植体的接种：将切好的外植体小片接种在含有植物生长激素的无菌培养基上。
培养基通常由无机盐溶液、有机源、糖和植物生长激素等组成，植物生长激素的种类和浓度会影响到后续培养过程中的分化和增殖。
5.分化：外植体接种到培养基后，会经历分化阶段，外植体的组织逐渐增殖和分化为不同种类的细胞，形成生长点。
6.增殖：通过定期的次级培养，子培养、分生器、病毒消除等手段，将外植体中的细胞不断分化和增殖，以便大量生产幼苗。
7.再分化：经过增殖后的外植体，可以再次进行分化，形成茎尖、腋芽或花蕾等器官，以便进一步培养和繁殖。
8.根的诱导：在合适的培养条件下，外植体可以诱导生成根系，这是为了使外植体脱离体外培养环境，继续生长的必要步骤。
9.移栽：当幼苗的根系已经发达足够，可以将外植体移栽到含有适宜营养成分的固体培养基上或直接移植到土壤中，进行实地管理和生长。
10.过程控制：在整个培养过程中，要控制好环境条件，例如温度、湿度和光照等，以保证培养的成功率。
11.病毒清除：植物组织培养中经常伴随着病毒感染问题，可以通过不同的方法对外植体和培养基进行检测和清除，以保证获得健康的植株。
总的来说，植物组织培养是一个复杂的过程，需要严格的无菌操作和合适的培养条件。
它广泛应用于植物的繁殖、遗传改良、新品种选育以及病毒和细菌的清除工作中，对推动植物学研究和农业生产具有重要的意义。
