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免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域，它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能，并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。
在本文中，我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法，以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。
首先，我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。
免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。
免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分，包括巨噬细胞、淋巴细胞等。
抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质，它可以识别和结合到体内外入侵的病原体，激活免疫系统进行防御。
而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质，可以是细菌、病毒、真菌等。
在免疫学实验中，常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。
免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法，它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。
流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法，它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。
ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法，它基于酶标记免疫吸附技术，可以测定目标物质的浓度和活性水平。
除了这些基本方法，免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。
免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制，例如自身免疫疾病、感染性疾病等。
通过实验手段，我们可以研究免疫细胞的活性和功能，并探索潜在的治疗策略。
例如，在免疫细胞治疗中，我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞，并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。
此外，免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。
通过实验方法，我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效，并评估其用于治疗疾病的潜力。
免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用，通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果，我们可以确定疫苗的安全性和有效性。
总结起来，免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。
学习手册《情境：细胞干重法》引导文-单元设计-实训指导书子情境：引导文细胞干重法阅读材料材料一、浊度法浊度法：可用来测量菌浓度·其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进入流通式比色皿中，用500-600nm的波长检测发酵液的光密度·然后发酵液再流回发酵罐中·所测的OD值与细胞浓度成正比。
浊度法:可用来测量菌浓度.其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进入流通式比色皿中,用500-600nm的波长检测发酵液的光密度.然后发酵液再流回发酵罐中.所测的OD值与细胞浓度成正比.也常用于免疫测定，基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。
免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasure）。
比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。
A什反映了入射光与透射光的比率（A=2－log10T，T代表浊度百分比）。
散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。
完成以下信息！浊度法的原理是。
材料二、微生物群体生长规律微生物细胞数量的增加称为微生物群体生长。
由于微生物个体微小的特殊性，难以针对单个微生物细胞或个体的生长繁殖的研究进行，故除特定的研究目的外，一般所言的微生物生长是指群体生长。
如将少量细菌纯培养物接种入新鲜的液体培养基，在适宜的条件下培养，定期取样测定单位体积培养基中的菌体（细胞）数，可发现开始时群体生长缓慢，后逐渐加快，进入一个生长速率相对稳定的高速生长阶段，随着培养时间的延长，生长达到一定阶段后，生长速率又表现为逐渐降低的趋势，随后出现一个细胞数目相对稳定的阶段，最后转入细胞衰老死亡期。
免疫检验实践报告模板实验目的和背景:免疫检验是一种重要的生命科学实验技术，常用于血液和组织样本中特定分子（抗原或抗体）的定量或定性检测。
本实验旨在学习和实践免疫检验技术，掌握基本的操作步骤和数据分析方法。
实验材料和仪器:1. 抗原样本（如蛋白质或病毒）2. 目标抗体或抗体标记物（如酶标记抗体）3. 酶标仪或荧光仪4. 显色底物或荧光底物5. 酶标板或微孔板6. 相关试剂和缓冲液实验步骤:1. 准备工作：将所需的试剂和材料准备好，按照实验方案设置实验组和对照组。
2. 样本处理：首先，对待测样本进行处理，如离心、稀释等，以获得适宜的浓度。
3. 样本孔的涂覆：将酶标板（或微孔板）中每个孔涂覆特定的抗原或样本。
4. 孵育：将酶标板置于恒温孵育箱或温床中进行适当时间的孵育，以促进抗原和抗体的结合。
5. 洗涤：将酶标板反复洗涤，以去除未结合的物质。
6. 抗体结合：加入特定的抗体或抗体标记物，使其与已结合的抗原发生特异性结合。
7. 洗涤：再次反复洗涤，以去除未结合的抗体或抗体标记物。
8. 底物反应：加入适当的底物，如显色剂或荧光底物，通过酶催化或荧光发射反应来检测特定信号。
9. 反应停止：加入适当的反应停止剂，终止底物反应，停止信号生成。
10. 读取数据：使用酶标仪或荧光仪测量孔的吸光度或荧光强度，获得相应的实验结果数据。
11. 数据分析：根据实验设计和对照组的结果，进行数据统计和分析，计算样本中目标分子的浓度或定性结果。
实验结果和讨论:根据实验所得的数据，对每组样本进行统计分析和比较，计算目标分子的浓度或定性结果。
分析结果可根据需求和目的，进行图表展示或其他形式的数据呈现。
根据数据分析结果，进一步讨论实验的准确性、可靠性和实用性，并与实验设计和预期结果进行比较和讨论，探讨可能的影响因素和改进措施。
结论:根据本次免疫检验实验的结果和讨论，得出对目标分子浓度或定性结果的结论。
根据实验的目的和背景，提出进一步的研究方向或实验优化建议。
蛋白免疫印迹杂交〔Western Blot〕技术手册A蛋白样本提取制备蛋白样品制备是Western Blotting 的第一步，更是打算WB 成败的关键步骤，总体原则和留意事项：1：尽可能提取完全或降低样本简洁度只集中于提取目的蛋白〔通过承受不同提取方法或选择不同的试剂盒产品〕2：保持蛋白的处于溶解状态〔通过裂解液的PH 盐浓度外表活性剂、复原剂等的选择〕3：提取过程防止蛋白降解、聚拢、沉淀、修饰等，〔低温操作，参与适宜的蛋白酶和磷酸酶抑制剂〕4：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子〔通过参与核酸酶或实行不同提取策略〕5：样品分装，长期于-80℃中保存，避开反复冻融。
A-1细胞或组织裂解A-1-1细胞裂解裂解液Lysis buffer 或商品化蛋白抽提试剂盒的选择*目的蛋白分布定位推举裂解液Lysis buffe 推举试剂盒全细胞NP-40 or RIPA〔附录1〕全蛋白抽提试剂盒细胞质〔可溶蛋白〕Tris-HCl〔附录1〕胞浆蛋白和核蛋白抽提试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒细胞质〔细胞骨架等不溶蛋白〕Tris-Triton〔附录1〕蛋白分级抽提试剂盒细胞质〔磷酸化蛋白〕磷酸化蛋白抽提试剂盒细胞膜NP-40 or RIPA〔附录1〕膜蛋白抽提试剂盒蛋白分级抽提试剂盒细胞核RIPA〔附录1〕核蛋白抽提试剂盒线粒体RIPA〔附录1〕线粒体蛋白抽提试剂盒亚细胞定位蛋白抽提试剂盒细胞裂解操作方法：1培育的细胞经预冷的PBS 漂洗2 次，裂解液中参与蛋白酶和磷酸酶抑制剂〔种类与量见本节2〕2吸净PBS，参与预冷的裂解液，〔(1 ml per 107cells/100mm dish/150cm2flask; 0.5ml per 5x106cells/60mm dish/75cm2flask).3用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温存地转移至预冷的微量离心管中，44℃摇动30 min54℃离心12,000 rpm，20 min〔根椐细胞种类不同调整离心力〕6轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.A-1-2组织裂解1 用灭菌的预冷的工具分别目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，2 将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf 管中，参与液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，3每约5 mg 参与约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇动2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，〔最终的蛋白浓度至少到达0.1 mg/ml, 抱负的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).44℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀,A-2蛋白酶和磷酸酶抑制剂推举购商品化蛋白酶和磷酸酶抑制剂复合试剂盒或COOKTAIL。
血液科实验室操作手册第一章：概述1. 引言：随着医学技术的不断发展，血液科实验室在疾病诊断和治疗中起着重要的作用。
本手册旨在为血液科实验室的操作人员提供准确、规范的操作指引，以确保实验室工作的高效性和结果的可靠性。
2. 实验室设备概述：血液科实验室通常配备了一系列仪器设备，如血液细胞分析仪、血液凝固分析仪、血型鉴定仪等。
操作人员应熟悉这些设备的使用方法和维护要求，确保设备的正常运行。
3. 安全操作：在进行实验室操作时，操作人员应时刻注意安全。
包括佩戴个人防护装备、正确处理实验室废弃物、遵循实验室安全规程等。
第二章：血液标本采集1. 采血点选择：选择合适的采血点对于获取准确的血液标本至关重要。
在常见的采血点中，比如肘部静脉、手背静脉等，操作人员应根据具体情况选择合适的采血点。
2. 采血方法：采血时，操作人员应注意选择适当的针头规格、采血器等，并掌握正确的采血技术，以避免出现血栓形成、血液溢出等问题。
3. 血液标本处理：采集到的血液标本需要进行适当的处理，如标本分装、保存等。
操作人员应标注标本的相关信息，并按照实验要求妥善保存。
第三章：血液细胞分析1. 血细胞计数：进行血细胞计数时，操作人员应按照仪器的要求，准确调整相关参数，并根据标本的特点选择适当的稀释倍数。
同时，注意消毒仪器和容器以避免交叉感染。
2. 血细胞分类：对于不同种类的血细胞，操作人员需根据其形态和染色特点进行准确的分类和计数。
熟练掌握相关技巧，提高分类准确性。
3. 血细胞形态学检查：在进行血细胞形态学检查时，操作人员应注意准备良好的血液涂片，熟悉各种染色方法和显微镜的使用，以正确鉴定异常细胞及相关病理变化。
第四章：血凝分析1. 凝血酶时间测定：在进行凝血酶时间测定时，操作人员应准确选择适当的试剂和稀释液，并掌握正确的操作流程，以确保测定结果的准确性。
2. 凝血因子测定：对于凝血因子的测定，操作人员需按照试剂说明书的要求，调配好标准品和控制品，并合理安排各步骤的执行顺序，避免因处理不当导致误差。
免疫组化实验报告一、实验目的本实验的主要目的是了解免疫组化技术的基本原理、方法和应用。
并在实验中掌握标本制备、抗体与抗原的反应、染色等技术。
通过本次实验，还可以深入了解体内各种细胞和组织中存在的不同蛋白质的分布、表达和定位情况，对于发现疾病发生机制、诊断疾病以及分子生物学和细胞生物学研究方向的选定等都有着重要的启示和指导意义。
二、实验原理免疫组化是一种基于抗原抗体反应的化学染色技术，该技术主要通过标记特定的抗体，标记可以是荧光、放射性或酶等，再与被检测的抗原结合，形成物质团，以便对其在组织切片或细胞中的分布、表达和定位情况进行观察和研究。
其原理如下：1.抗原抗体反应抗体是一种高度特异性的蛋白质，它通过与与其特异性结合的抗原组成免疫复合物来介导免疫反应，具有非常高的结合亲和力。
2.荧光标记技术荧光标记技术是免疫组织化学中常用的标记技术之一，其主要特点是具有快速、高度敏感和高特异性等优点，目前广泛应用于免疫荧光显微镜的检测中。
三、实验材料与方法1.材料（1）黏片刀（2）盛装杯（3）离心机（4）玻璃切片（5）氯仿（6）牛血清白蛋白（7）丙酮（8）PBS（9）荧光标记的二抗（10）DAPI（11）溶解铁（12）抗体2.方法（1）标本制备将含有细胞和组织的标本制成薄片，经过常规组织学和细胞学处理，制成玻璃切片。
然后，将其离心获取细胞和组织，摆放在混合溶液中振荡。
将抗体稀释至适宜浓度，与标本混合，进行PFA定制，随后进行冷却缓存，制备成样品。
将标本与荧光二抗混合，适当搅拌，使其充分反应。
然后，在暗室中进行荧光显微镜检测，观察标本发出的光强。
DAPI可添加至样品中，使得核糖体更容易用眼观察。
四、实验结果通过本次实验得到的结果如下。
制作标本时，需要仔细阅读操作手册，遵循严格的操作步骤，操作清洁、细致、稳定。
制作好的标本应该是样品清晰、明亮、无噪点的。
提取到的抗原抗体在能够有效反应的基础上，需要尽可能的达到最佳的配比，以充分发挥其效果。
襄樊职业技术学院学生实习手册（医学检验技术专业）系（院）：班级：实习医院：姓名：年月日～年月日填写说明1、此手册主要用于考核实习生在各科（室）实习中的表现和取得的成绩，由科（室）主任、带教老师和校内指导老师负责评定填写。
2、实习科（室）是指直接指导学生毕业实习的教学组织。
由实习轮转的科（室）分别组织考核。
3、个人小结要据实填写，如操作技术方面可小结实习的项目、操作次数及掌握程度等方面的情况。
4、操作考核由各科室组织，常用技术项目由各科室抽取2-3项考核，但不重复。
5、日常测评及技能考核着重考核实习生基本知识的掌握情况，实际工作能力情况，服务态度、创新意识及优良作风的养成情况等。
6、实习全部结束，汇总实习生各科室出科成绩，请科教科（医教科）对每一位实习生进行全面综合考评并盖章。
襄阳职业技术学院医学院学生顶岗实习安全告知书为增强我院顶岗实习学生安全防范意识和法制观念，提高学生自我保护能力，确保顶岗实习任务顺利完成，现将有关安全事项告知如下：一、遵守国家法律法规，增强法制观念，遵守实习单位各项安全规章制度。
树立安全第一的意识，加强安全知识学习，不断提高自身安全意识和防范能力，确保人身和财物安全。
二、学生在实习期间须严格执行岗位安全规定，杜绝各种事故发生。
特别是在使用实习单位设备或进行其他技术操作时，须经指导老师同意并在其指导下，严格按照操作规程进行，防止实习安全事故发生。
三、严格请假手续，擅离实习岗位或请假超假不归，情节严重者将被勒令回校，学校将按有关规定取消实习资格、给予纪律处分直至取消毕业资格，并通报其家长。
四、注意防火、防盗，在实习期间，不用热得快、电炉、酒精炉和蜡烛；不在宿舍内烧饭、烧菜及使用煤气；远离易燃、易爆或有毒物品；不将数额较大的现金和贵重物品存放宿舍，宿舍无人要随时锁门，不轻信陌生人，不将手机、银行卡、家庭电话号码等个人信息及人物品等随意告诉或交给不熟悉的人，避免受到诈骗或遭受意外损失。
临床实验室检验手册内容本手册旨在提供临床实验室检验的相关信息和指导，以确保检验过程准确可靠，为病患的健康提供可靠的诊断和医疗服务。
遵循本手册的指导，既可以保证检验的质量，也能够提高实验室的工作效率。
一、实验室安全和质控要求1. 实验室安全确保实验室的安全是检验工作的首要任务。
在实验室内，应该遵守各种安全操作规程，包括但不限于佩戴个人防护装备、正确使用试剂和仪器设备、遵循废物处理流程等。
2. 质量控制质量控制是保证检验结果精确度和可靠性的基础。
为了保证质量控制的有效性，实验室需要建立质量控制体系、定期核查仪器设备，以及参与并评估外部质量评估计划。
二、标本采集和处理1. 标本采集关于标本采集的要求需根据具体的检验项目而定，例如，血液标本采集过程中需要遵循无菌技术，保证采集工具的干净和采集部位的消毒等。
2. 标本保存和运输标本采集后，应根据不同检验项目的要求，正确保存和运输标本。
有些标本需要进行冷藏，有些则需要离心和分离，因此需要在标本容器上正确标注相关信息和保存要求。
三、实验室常规检验项目要求实验室常规检验项目包括但不限于血液学、生化学、免疫学等，下面列举一些常见检验项目的要求：1. 血液学血液学检验项目要求有血细胞计数、血红蛋白测定、血小板计数等。
在进行这些检验项目时，需要严格按照标准操作程序，如正确选用试剂、准确计量、正确使用设备等。
2. 生化学生化学检验项目包括血糖、肝功能、肾功能等指标的测定。
在进行这些检验项目时，需要准确区分标本类型、合理选择试剂和仪器、严格按照操作程序进行分析，以确保结果准确可靠。
3. 免疫学免疫学检验项目常包括抗体检测、病毒感染等。
在进行这些检验时，需要严格控制环境条件，准确选择试剂和具备良好的仪器设备。
四、特殊检验项目要求除了常规检验项目外，还有一些特殊检验项目需求，下面列举一些例子：1. 分子生物学分子生物学检验项目包括核酸提取、PCR等。
在进行这些检验时，需要严密操作，准确选用试剂和反应体系，以确保结果的准确性。
人类诱导性多能干细胞（iPS 细胞）技术指导手册目录：1. 前言 ............................................................................................................................ 12. 人类胚胎成纤维细胞培养............................................................................................. 23. 重编程载体构建........................................................................................................... 34.病毒包装 .................................................................................................................... 45.人类iPS 细胞的诱导.................................................................................................... 66. iPS 细胞鉴定 .............................................................................................................. 86.1碱性磷酸酶活性检测 (8)6.2干细胞表面marker 的免疫染色检测 .................................................................... 9 6.3干性因子的去甲基化程度分析........................................................................... 10 6.4干细胞内源基因的表达分析 .............................................................................. 13 6.5端粒酶活性检测................................................................................................. 14 6.6核型检测 ........................................................................................................... 15 6.7拟胚体形成........................................................................................................ 15 6.8畸胎瘤形成实验................................................................................................. 15 7．干细胞技术培训及服务一览表................................................................................... 158．附录 ......................................................................................................................... 161. 前言iPS 细胞最初从成纤维细胞重编程而来，因为它们准备和操作相对简单。
高一生物知识点必备书籍生物作为一门广泛涉及生命科学的学科，对于高中生来说，掌握生物知识点是非常重要的。
为了帮助高一生物学习者更好地理解和掌握生物知识，以下是一些高一生物知识点必备的书籍推荐。
1.《生物学教材》无论在任课教师的教学中还是自主学习中，高中生物学习者最基础也是最重要的一本书就是教材。
教材内容系统全面，涵盖了高一生物学习的各个方面，包括细胞、生物分子、遗传与进化、生物体免疫、生态环境等知识点。
学生可以根据教材中的知识内容进行学习，并结合课堂教学进行复习和巩固。
2.《生物学参考书》除了教材以外，一本优秀的生物学参考书也是高一生物学习中必备的。
相较于教材，参考书更注重生物概念的深入解析、知识点的逻辑关系以及实际应用。
《生物学参考书》可以帮助高一生物学习者更深入地理解生物基础知识，并提供一些拓展性的知识内容，帮助学生更好地掌握。
3.《生物学习指导书》《生物学习指导书》是一本系统总结了高一生物学习的基础知识、考点、解题方法等内容的辅助读物。
这本书可以帮助学生更好地了解高考生物考试的要求和重点，指导学生做好学习计划和备考策略。
同时，《生物学习指导书》通常还会提供一些示范性的习题和答案，帮助学生巩固知识点和提高解题能力。
4.《实验与技术手册》生物学涉及到实验的内容很多，所以一本《实验与技术手册》对于高一生物学习者来说也是非常有必要的。
这本书通常包括了常见的生物实验方法、实验技术的操作步骤、实验数据分析及实验报告写作等方面的内容。
通过阅读《实验与技术手册》，学生可以更好地掌握实验技术，提高实验能力，并为日后深入学习生物学或进行科研打下基础。
5.《解剖与生理学教材》解剖与生理学是生物学中重要的一个分支，对于理解人体结构和功能起着关键作用。
一本专门的《解剖与生理学教材》可以帮助高一生物学习者更好地了解人体各个器官的结构和功能特点，打好生物学基础。
总结起来，高一生物知识点必备的书籍包括教材、参考书、学习指导书、实验与技术手册以及解剖与生理学教材。
免疫学实验操作技巧免疫学实验是研究免疫系统及其相关疾病的重要手段，准确而熟练的实验操作技巧对于获得可靠的实验结果至关重要。
在这篇文章中，我们将详细介绍一些常见的免疫学实验操作技巧，帮助您在实验中更加得心应手。
一、实验前的准备在进行免疫学实验之前，充分的准备工作是成功的关键。
首先，要熟悉实验的目的和原理，仔细阅读实验操作手册，了解所需的试剂、仪器和设备。
同时，确保实验环境的清洁和无菌，对实验台面、移液器等进行消毒处理。
准备好高质量的试剂也是必不可少的。
购买试剂时，要选择可靠的供应商，并注意试剂的保质期和储存条件。
对于需要自行配制的试剂，要严格按照配方和操作步骤进行，确保浓度和纯度的准确性。
仪器设备的校准和调试同样重要。
例如，移液器需要定期校准，以保证移液的准确性；离心机的转速和时间要根据实验要求进行正确设置。
二、样本的采集和处理样本的质量直接影响实验结果的准确性。
在采集血液样本时，要注意无菌操作，避免血液受到污染。
对于血清样本，采集后要让血液自然凝固，然后通过离心分离血清。
离心的速度和时间要适当，一般为3000rpm，10-15 分钟。
组织样本的采集要迅速，并在低温条件下保存，以防止蛋白质的降解。
在处理组织样本时，要将其充分匀浆或研磨，以释放出细胞内的成分。
细胞样本的处理需要特别小心。
在培养细胞时，要控制好培养条件，如温度、湿度、CO₂浓度等。
在收集细胞时，要使用适当的消化酶，避免对细胞造成损伤。
三、抗体的选择和使用抗体是免疫学实验中最常用的试剂之一。
选择合适的抗体对于实验的成功至关重要。
要根据实验的目的和样本的类型选择特异性高、亲和力强的抗体。
同时，要注意抗体的来源（如鼠抗、兔抗等）和亚型（如 IgG、IgM 等）。
在使用抗体时，要按照说明书进行稀释。
稀释抗体的缓冲液要选择合适，一般常用的有 PBS、TBS 等。
稀释后的抗体要在规定的时间内使用，避免长时间放置导致活性下降。
为了提高实验的准确性，常常需要进行抗体的预吸附。
襄樊职业技术学院学生实习手册（医学检验技术专业）系（院）：班级：实习医院：姓名:年月日～年月日填写说明1、此手册主要用于考核实习生在各科（室）实习中的表现和取得的成绩，由科（室)主任、带教老师和校内指导老师负责评定填写。
2、实习科（室）是指直接指导学生毕业实习的教学组织。
由实习轮转的科（室)分别组织考核.3、个人小结要据实填写，如操作技术方面可小结实习的项目、操作次数及掌握程度等方面的情况。
4、操作考核由各科室组织，常用技术项目由各科室抽取2-3项考核,但不重复。
5、日常测评及技能考核着重考核实习生基本知识的掌握情况，实际工作能力情况，服务态度、创新意识及优良作风的养成情况等。
6、实习全部结束,汇总实习生各科室出科成绩，请科教科（医教科)对每一位实习生进行全面综合考评并盖章。
襄阳职业技术学院医学院学生顶岗实习安全告知书为增强我院顶岗实习学生安全防范意识和法制观念，提高学生自我保护能力,确保顶岗实习任务顺利完成，现将有关安全事项告知如下：一、遵守国家法律法规，增强法制观念，遵守实习单位各项安全规章制度。
树立安全第一的意识,加强安全知识学习，不断提高自身安全意识和防范能力，确保人身和财物安全.二、学生在实习期间须严格执行岗位安全规定，杜绝各种事故发生。
特别是在使用实习单位设备或进行其他技术操作时，须经指导老师同意并在其指导下，严格按照操作规程进行，防止实习安全事故发生。
三、严格请假手续，擅离实习岗位或请假超假不归，情节严重者将被勒令回校,学校将按有关规定取消实习资格、给予纪律处分直至取消毕业资格，并通报其家长。
四、注意防火、防盗,在实习期间，不用热得快、电炉、酒精炉和蜡烛；不在宿舍内烧饭、烧菜及使用煤气；远离易燃、易爆或有毒物品；不将数额较大的现金和贵重物品存放宿舍，宿舍无人要随时锁门，不轻信陌生人,不将手机、银行卡、家庭电话号码等个人信息及人物品等随意告诉或交给不熟悉的人，避免受到诈骗或遭受意外损失.五、注意交通安全，禁止搭乘无牌、无证、超载车辆，不随意搭乘陌生人车辆，严禁违规、无证驾驶摩托车和各种机动车辆以及生产工作车辆.六、严禁下江河、堰塘、水库游泳。
一、实验目的1. 学习补体固定实验的基本原理和方法。
2. 了解补体在免疫应答中的作用。
3. 掌握补体固定实验的操作步骤和结果分析。
二、实验原理补体固定实验是一种检测抗原抗体反应的方法，通过检测抗体与补体结合后是否能够固定补体来间接判断抗原抗体反应的存在。
在补体固定实验中，补体先与抗原结合，然后与抗体结合，形成抗原-抗体-补体复合物。
如果抗原与抗体特异性结合，则补体不能被固定，实验结果为阴性；如果抗原与抗体没有特异性结合，则补体被固定，实验结果为阳性。
三、实验材料1. 抗原：如细菌、病毒、细胞等。
2. 抗体：针对特定抗原的免疫球蛋白。
3. 补体：新鲜或冻存的补体溶液。
4. 生理盐水：用于稀释抗原、抗体和补体。
5. 0.1% NaN3溶液：用于灭活补体。
6. 试管：用于实验操作。
7. 移液器：用于移取试剂。
8. 酶标仪：用于检测反应结果。
四、实验步骤1. 制备抗原抗体溶液：将抗原和抗体分别用生理盐水稀释至适当浓度。
2. 设置对照组和实验组：- 对照组：加入抗原、抗体和补体。
- 实验组：加入抗原、抗体和灭活的补体。
3. 加入试剂：将抗原、抗体和补体（或灭活的补体）加入试管中，轻轻混匀。
4. 温育：将试管置于37℃水浴中温育30分钟。
5. 洗涤：用生理盐水洗涤试管，去除未结合的抗原、抗体和补体。
6. 加入底物：加入适量的底物溶液，轻轻混匀。
7. 显色：将试管置于酶标仪检测波长下，读取吸光度值。
8. 结果分析：比较对照组和实验组的吸光度值，判断抗原抗体反应是否存在。
五、实验结果实验结果显示，对照组和实验组的吸光度值差异较大，说明抗原与抗体发生了特异性结合，补体被固定。
因此，实验结果为阳性。
六、实验讨论1. 补体固定实验是一种检测抗原抗体反应的常用方法，具有操作简便、结果可靠等优点。
2. 实验过程中，要注意试剂的浓度和温度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验结果的分析需要结合具体的实验背景和目的，进行综合判断。
Biotin Labeling Kit - NH2(1 mg) 技术手册产品描述Biotin Labeling Kit - NH2主要用于制备生物素标记的蛋白质，用于酶免疫分析(EIA)。
NH2 -Reactive Biotin是试剂盒成分之一，它含有琥珀酰亚胺基(NHS)，能轻易地与蛋白质或其他分子的氨基反应。
该试剂盒中的过滤管可用于除去干扰标记反应的小分子。
整个标记过程十分简便。
只需将NH2 - Reactive Biotin加入到IgG溶液中，37 ℃培养10分钟即可。
过量的生物素分子能够使用过滤管将其除去。
该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括储存缓冲液。
试剂盒内含NH2 - Reactive Biotin ··········1管WS Buffer···············13 ml x 1Reaction Buffer············ 1.2 ml x 1Filtration Tube ·············1管15 ml Tube（用于平衡）········1管适用范围一个样品标记样品需求：分子量>50,000，具有反应性的氨基储存条件储存于0-5 ℃，未开封试剂在0-5 ℃能稳定保存6个月＊一旦密封铝箔袋打开，请确保使NH2 - Reactive Biotin保存在铝箔袋中，并在-20 ℃下紧闭袋口。
单克隆抗体的制备1975年，Köhler和Milstein创立了杂交瘤技术制备单克隆抗体，单克隆抗体具有特异性高，灵敏度高，重复性好，可供应量大，检测时间短以及能够查出混合物中的少量成分等优点。
1试验材料1.1试验动物和细胞雌性6～8周龄BALB/c小鼠SP2/0骨髓瘤细胞1.2主要实验试剂HRP标记羊抗小鼠IgG、福氏完全佐剂（FCA）、福氏不完全佐剂（FIA）、聚乙二醇（PEG）、二甲基亚砜（DMSO）、降植烷、TMB底物、HAT(50×)、HT(50×)、三抗溶液（100×）小鼠单抗Ig类和亚类鉴定用ELISA试剂盒均为SIGMA公司；DMEM粉、特级胎牛血清（FBS）均为GIBCO公司；牛血清白蛋白（BSA）1.3主要实验仪器和耗材CO2细胞培养箱（Thermo和上海新苗医疗器械制造有限公司WJ-160B-Ⅲ）酶联检测仪（BIO-RAD Model 680）血球计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司）pH计（Sartorius赛多利斯科学仪器）APL高压灭菌锅（CL-32L）生物安全柜(ESCO北京五州东方科技发展有限公司)三恒电泳仪（JY600C）数显恒温磁力搅拌器（78HW-1，杭州仪表电机有限公司）电子分析天平（Sartorius赛多利斯科学仪器）分光光度计（WPA Biowav eⅡ+）进口液氮罐（Thermo）Protein A柱恒温水浴锅（HH-2金坛市科兴仪器厂）微型台式真空泵（GL-80ZB型，海门市）电热恒温培养箱（DHP-9032上海天恒医疗器械）低速离心机 (L-550长沙湘仪离心机仪器有限公司)高速冷冻离心机（SIGMA 2-16PK）倒置显微镜（Nikon TS100）超低温冰箱(Thermo)96孔酶标板（）96孔、24孔细胞培养板、T25培养瓶、35mm培养皿、60mm培养皿、100mm培养皿、冻存管0.22μm过滤器(PALL)2主要试剂配制2.1常规试剂配制PBS（或PB）（0.02mol/L，pH7.4）：A液（0.2 mol/L Na2HPO4）：Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml；B液（0.2 mol/L NaH2PO4）：NaH2PO4·2H2O 3.12g,加蒸馏水至1000ml；取A液81ml加B液19ml混合，再用生理盐水（或蒸馏水）做10倍稀释即成。
饱和硫酸铵溶液（pH7.4）：称取80~85g A·R级(NH4)2SO4，以50~80℃蒸馏水100ml溶解，搅拌20min，趁热过滤。
冷却后以浓氨水（15N NH4OH）调pH至7.4。
配好的饱和硫酸铵，瓶底应有结晶析出。
取饱和硫酸铵40ml，加蒸馏水60ml稀释即成40%饱和硫酸铵。
2.2细胞融合试剂配制DMEM不完全培养基：DMEM粉1袋，3.7g NaHCO3，用1mol/L HCl调pH至7.2-7.3，加灭菌超纯水定容至1000ml。
0.22μm滤膜过滤除菌至1L试剂瓶中，4℃保存。
胎牛血清（FBS）的灭活：56℃，灭活30min，分装100ml或50ml一瓶，-20℃冻存。
10%FBS完全培养基：FBS 10ml，DMEM不完全培养基90ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
20%FBS完全培养基：FBS 20ml，DMEM不完全培养基80ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
HAT培养基：20%FBS培养基98ml，HAT（50×）贮存液2ml。
HT培养基：20%FBS培养基98ml，HT（50×）贮存液2ml。
冻存液：完全培养基:DMSO=9.2:0.8，即含8%DMSO，与培养过程中使用的血清保持一致，需新鲜配制。
2.3ELISA试剂配制(1) PBS 10×stock solution40g Na2HPO4·12H2O5g KH2PO481g NaCl1.0mL 20% NaN3 (20g NaN3溶解在100mL蒸馏水中)用蒸馏水溶解，定容到1L。
(2) Coating buffer1.59g Na2CO32.93g NaHCO31.0mL 20% NaN3用800mL蒸馏水溶解，调pH到9.6，定容到1L。
(3) Blocking buffer将0.5gBSA 溶解在100mL Coating buffer 中（即0.5%BSA溶液）。
(4) Tween buffer100mL PBS 10×stock solution5g BSA0.5mL Tween 201.0mL 20% NaN3用800mL蒸馏水溶解，定容到1L。
(5) Tween wash buffer45g NaCl2.5mL Tween 20用足量蒸馏水溶解，定容到5L。
(6) Enzyme substrate buffer97mL Diethanolamine（乙二醇胺）700mL 蒸馏水1.0mL 20% NaN3用大约100mL 1M浓盐酸调pH到9.8，然后加101mg MgCl2·H2O（相当于181.4mgMgCl2·12H2O），最后定容到1L。
(7) Substrate（现用现配）将1个NPP药片溶解在5mL Enzyme substrate buffer中，黑暗条件下保存。
（8）OPD底物缓冲液：0.2M Na2HPO4 25.7ml0.1M 柠檬酸 24.3ml加蒸馏水 50ml，pH 5.0（9）OPD底物（现配先用）OPD工作液配制：10ml底物缓冲液中加入5mg OPD，完全混匀后加H2O2(浓度30%)4µl/10ml即可，100µl/孔，492 nm的波长读数。
2.4SDS-PAGE试剂配制30%聚丙烯酰胺贮存液：29g丙烯酰胺，1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺，加蒸馏水至100ml，充分溶解后过滤，调pH7.0，4℃棕色瓶保存备用。
分离胶缓冲液（1.5mol/L Tris-HCl，pH8.8）：18.17g Tris碱，加蒸馏水约80ml，用浓盐酸调pH至8.8，加蒸馏水定容至100ml。
浓缩胶缓冲液（1.0mol/L Tris-HCl，pH6.8）：12.11g Tris碱，加蒸馏水约80ml，用浓盐酸调pH至6.8，加蒸馏水定容至100ml。
10%（w/v）SDS溶液：10g SDS，加蒸馏水定容至100ml。
10%（w/v）过硫酸铵：1g过硫酸铵，加10ml蒸馏水溶解，300μl/支分装-20℃冻存。
2×上样缓冲液：4%（w/v）SDS，2%（w/v）β-巯基乙醇，20%（v/v）甘油，0.2%（w/v）溴酚蓝，溶于0.1mol/L Tris-HCl（pH6.8）中。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1gTris碱，72g甘氨酸，5g SDS，溶于1000ml 蒸馏水中。
考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250溶解于100ml甲醇、水、冰乙酸（9:9:2）混合物中，过滤除去未容物。
脱色液：甲醇:水:冰乙酸=1:7:2的混合物。
3试验方法单克隆抗体制备技术路线如图1-1。
3.1动物免疫根据常用免疫学实验技术，采用搅拌混合法，将100μg/ml的400μl抗原溶液与等体积的400μl佐剂充分混合，最终形成“油包水”的乳化状态。
初次免疫：用FCA乳化后，每只鼠打4针（腋下腹股沟淋巴结丰富处）每针0.2 ml，即免疫抗原剂量为每只40μg；3周后第二次免疫：用FIA乳化，剂量针数同上；3周后第三次免疫：不加佐剂直接腹腔注射，剂量同上。
三免后10d分别尾静脉采血，采用ELISA间接法测其效价，未达到效价要求的继续按三免方式每隔两周免疫一次，直至效价达到1：105。
融合前3d加强免疫：50μg OV A抗原量，腹腔注射，3d后取脾融合。
图1-1单克隆抗体制备技术路线图3.2小鼠血清效价的测定3.2.1包被抗原和酶标二抗的最适浓度以高纯度的抗原包被酶标板，包被浓度分别为5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml，阳性对照取抗原蛋白免疫后小鼠血清作1:100、1:1000和1:10000稀释，阴性对照取未免疫的小鼠血清作1:100稀释，空白对照采用样品稀释液，HRP标记羊抗小鼠IgG分别稀释成1:1000、1:2500、1:5000、1:7500和1:10000。
检测结果中以空白对照值相对最小、阴性值与空白值之差小于0.1、以及阴阳性差别相对最大的包被抗原浓度和酶标二抗抗体稀释度为最适条件。
3.2.2小鼠血清效价的检测采用间接ELISA法测定小鼠血清效价。
小鼠尾静脉采血0.1ml，37℃放半小时后，在4℃过夜，4℃ 5000r/min离心10min，收集血清，用间接ELISA法检测血清效价，同时设阴性和空白对照。
间接ELISA法程序如下：1）包被：用包被液稀释OV A抗原，使浓度达到10μg/ml，以100μl/孔包被酶标板，置4℃过夜。
2）洗板：弃去酶标板孔内液体，用PBST洗涤三次，每次30min，拍干。
3）封闭：每孔加100μl封闭液封闭游离结合位点，37℃湿盒温育1h，洗板同上。
4）加待测样品：用样品稀释液适当稀释待检血清，阴性对照为同批正常鼠血清（100倍稀释），空白对照为样品稀释液，每孔加100μl，37℃湿盒温育1h，洗板同上。
5）加酶标二抗：将HRP标记羊抗小鼠IgG按1:5000稀释，每孔加100μl，需新鲜配制，37℃湿盒温育1h，用PBST洗涤6次，拍干。
6）显色：各孔加TMB底物液100μl，室温避光反应10min。
7）终止：各孔加50μl终止液终止反应。
8）读数：用酶联检测仪在450 nm波长处测定OD450值。
3.3杂交瘤细胞株的建立3.3.1饲养细胞的制备取未免疫的BALB/c小鼠眼动脉采血后拉颈处死，分离血清作为抗体检测时的阴性对照血清，-20℃冻存备用。
将小鼠尸体浸泡于75%酒清中5min，无菌条件下剪开腹部皮肤后撕开暴露出腹膜，在腹膜开一小口，用DMEM不完全培养基约10ml反复冲洗腹腔并收集巨噬细胞，放入50ml离心管，1000r/min离心10min，弃上清，用HAT培养基重悬细胞并计数，调整浓度在2×105/ ml左右。
将含腹腔巨噬细胞的培养液加入到4块96孔板内，每孔100μl（约两滴）。
放入37℃ 5%CO2培养箱内培养，24h后融合使用。
3.3.2SP2/0骨髓瘤细胞悬液的制备在融合前一周复苏SP2/0骨髓瘤细胞并扩大培养，骨髓瘤细胞生长快通常以1:10传代，使用10%FBS完全培养基培养，调整好细胞状态。
融合前12h需要换液一次，使大多数细胞在融合时处于对数生长期，细胞浑圆透亮、圆亮、形态均一，排列整齐，成半致密分布。
