瑞氏染液说明书

外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。

2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。

以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。

其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。

3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。

但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。

多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。

4、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。

将载片平放在玻璃板上准备染色。

2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。

等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS溶液。

继续染色2到3分钟。

4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。

冲片结束后将载片放到阴凉处风干。

5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。

染色时间约为10分钟。

时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。

5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。

6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。

在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。

所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。

瑞氏染液使用说明货号：G1040规格：50ml/100ml保存：室温避光保存，有效期至少2年。

产品说明：瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇。

伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。

美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。

后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。

使用方法：本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。

具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。

注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。

4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

相关试剂：P210010×多聚赖氨酸G1010姬姆萨染色液G1100伊红染色液G1140苏木素染色液(常规染色)G1120H-E染色试剂盒。

瑞氏染色操作步骤瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，主要用于观察细胞核形态和染色体结构。

下面将详细介绍瑞氏染色的操作步骤。

一、实验前准备1.1 材料准备瑞氏染色所需的材料有：0.075mol/L KCl、甲醛、乙酸、96%乙醇、苯酚红溶液、甲基绿溶液和天然丝。

1.2 设备准备实验所需的设备有：离心机、恒温水浴器和显微镜等。

二、样品制备2.1 细胞培养首先需要培养好待检测的细胞，使其达到适当生长状态。

在培养过程中，应注意避免污染和过度生长等问题。

2.2 细胞处理将待检测的细胞收集到离心管中，并加入0.075mol/L KCl缓冲液进行离心。

将上清液倒掉，再加入甲醛进行固定处理。

2.3 固定处理将含有甲醛的离心管放置在恒温水浴器中，在37℃下固定处理30分钟，使细胞膜破裂并释放染色体。

2.4 滴定染色将固定后的细胞加入苯酚红溶液，再滴入甲基绿溶液，使染料均匀地覆盖在细胞上。

三、显微镜观察将染好色的细胞片放置在显微镜下进行观察。

可以通过调节显微镜的焦距和光源亮度等参数来获得更清晰的图像。

四、实验注意事项4.1 操作过程中应注意保持无菌环境，避免污染样品。

4.2 在固定处理时，应控制好温度和时间，避免过度固定或过短固定导致样品失真。

4.3 在滴定染色时，应注意均匀地覆盖在细胞上，并避免出现气泡等问题。

总结：瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，其操作步骤包括实验前准备、样品制备、显微镜观察和实验注意事项等方面。

在操作过程中需要注意保持无菌环境、控制好温度和时间、均匀地覆盖染料等问题，以获得更准确的实验结果。

瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。

将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。

染液配好后放于室温下，一周后即可使用。

新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。

久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。

染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。

2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。

配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。

3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。

4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。

显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。

白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。

细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。

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在进行瑞士染液操作之前，需要做好充分的准备。

瑞氏染色液说明书【产品名称】瑞氏染色液【包装规格】货号：DM0005单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对血细胞进行染色。

【检验原理】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇2、磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。

2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。

3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。

4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。