瑞氏染色液配制及使用方法

瑞氏染色操作步骤瑞氏染色是一种常见的染色技术，用于细胞、组织和生物样本的研究中。

该技术可用于确定细胞形态、染色体数量和形态、染色体变异等。

以下是瑞氏染色的操作步骤：1.样本处理：样本一般采用新鲜的、保存良好的细胞或组织样本。

在处理之前，需要检查样本是否符合要求。

例如，细胞样本应具有充足的数量和活力，组织样本应达到一定的厚度和大小。

此外，需要对样本进行预处理，如固定处理、去除上皮细胞等。

2.制片：制作干片是瑞氏染色的重要步骤。

首先，用无菌的玻片将样本涂抹均匀。

有时还需要使用刮片等工具辅助涂抹。

然后，制片需通过加热、干燥等过程。

这使得细胞或组织与玻片表面相关联，以便在后续染色过程中处理。

3.染色：将制片进行染色是瑞氏染色的核心步骤。

瑞氏染色使用吉姆萨染色（Giemsa stain）或艾因染色（Ehrlich stain）方法。

在吉姆萨染色中，可以使用不同的吉姆萨组合来改变细胞或染色体染色的颜色。

在艾因染色中，使用配制艾因染液进行染色。

两种方法的染色时间和温度也有所不同。

在染色过程中，需要控制好样本的染色时间和温度，以避免染色过度或过轻。

4.显微镜观察：经过染色后，制片需要用显微镜观察。

观察时要准确、认真、耐心、细致。

需要注意的是，显微镜的放大倍数和焦距要调整到合适的位置，以获得清晰的细胞或染色体图像。

5.结果分析：根据显微镜观察得到的图像，可以对样本进行分析和判断。

主要从细胞形态、染色体数量和形态、染色体变异等方面进行评估，并与常模比较，以便对生物样本进行分类、鉴定和研究。

总的来说，瑞氏染色是一种简单、常用的染色技术，适用于细胞、组织和生物样本的研究。

操作过程中需要注意样本处理、制片、染色、显微镜观察和结果分析等关键步骤。

只有仔细、细致地操作，才能获得高质量的实验数据。

瑞氏染液使用说明货号：G1040规格：50ml/100ml保存：室温避光保存，有效期至少2年。

产品说明：瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇。

伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。

美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。

后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。

使用方法：本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。

具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。

注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。

4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

相关试剂：P210010×多聚赖氨酸G1010姬姆萨染色液G1100伊红染色液G1140苏木素染色液(常规染色)G1120H-E染色试剂盒。

瑞氏染色操作步骤瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，主要用于观察细胞核形态和染色体结构。

下面将详细介绍瑞氏染色的操作步骤。

一、实验前准备1.1 材料准备瑞氏染色所需的材料有：0.075mol/L KCl、甲醛、乙酸、96%乙醇、苯酚红溶液、甲基绿溶液和天然丝。

1.2 设备准备实验所需的设备有：离心机、恒温水浴器和显微镜等。

二、样品制备2.1 细胞培养首先需要培养好待检测的细胞，使其达到适当生长状态。

在培养过程中，应注意避免污染和过度生长等问题。

2.2 细胞处理将待检测的细胞收集到离心管中，并加入0.075mol/L KCl缓冲液进行离心。

将上清液倒掉，再加入甲醛进行固定处理。

2.3 固定处理将含有甲醛的离心管放置在恒温水浴器中，在37℃下固定处理30分钟，使细胞膜破裂并释放染色体。

2.4 滴定染色将固定后的细胞加入苯酚红溶液，再滴入甲基绿溶液，使染料均匀地覆盖在细胞上。

三、显微镜观察将染好色的细胞片放置在显微镜下进行观察。

可以通过调节显微镜的焦距和光源亮度等参数来获得更清晰的图像。

四、实验注意事项4.1 操作过程中应注意保持无菌环境，避免污染样品。

4.2 在固定处理时，应控制好温度和时间，避免过度固定或过短固定导致样品失真。

4.3 在滴定染色时，应注意均匀地覆盖在细胞上，并避免出现气泡等问题。

总结：瑞氏染色是一种常用的细胞染色方法，其操作步骤包括实验前准备、样品制备、显微镜观察和实验注意事项等方面。

在操作过程中需要注意保持无菌环境、控制好温度和时间、均匀地覆盖染料等问题，以获得更准确的实验结果。

瑞氏染色瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。

1原理：瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。

此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。

由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。

2 试剂配制：1、瑞氏试剂瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解过滤后即成。

混合方式可将瑞氏染料置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使染料溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完为止，然后过滤，以深色中性之玻璃瓶储备待用。

亦可将1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而黑暗之处或37度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。

染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。

2、缓冲液由1%的磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。

以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。

缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或煮沸后密闭保存的蒸馏水。

如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。

3、染色步骤1 将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片两端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。

2 滴加瑞氏染色液。

其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标本完全盖住为止。

染液不宜过少，否则，甲醛挥发后，易产生沉淀；不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。

3 1-2分钟后，滴入缓冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。

以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。

4 自缓冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。

瑞氏染色操作流程一、瑞氏染色实验前准备1.1准备染色液和显影液针对瑞氏染色实验，首先要准备染色液和显影液，染色液由25mL的瑞氏染料，90mL的盐酸溶液（浓度为5％），以及1mL的激发剂混合而成。

而显影液则是在10mL的9N的硫酸、10mL的5％的NaOH溶液、10mL的1％的苯甲醇和10mL的1％的芳香族醇基乙醇混合而成。

1.2准备染色木质菌梗在预先准备瑞氏染色液和显影液后，接下来要准备染色用的木质菌梗才能开始瑞氏染色实验。

首先，用洗碗笠将要染色的木质菌梗洗淨，然后用医用刀在木质菌梗中切出厚约2mm的薄片，最后用蒸汽–水泼淋法将木质菌梗片浸湿，方可准备瑞氏染色实验。

二、瑞氏染色实验操作2.1放置染色片在准备好染色液和显影液，以及木质菌梗薄片后，此时要把准备的的木质菌梗薄片放置在染色槽内，以留出表面空间，方便染色液充分浸渍。

2.2加入染色液之后将准备的瑞氏染色液加入染色槽，在实验室内控制温度为37℃，放置20分钟后，可以观察菌梗表面是否呈染色，一般都可以看到浅色到深色之间的蓝色或紫色染色，这说明瑞氏染色已经取得成功。

2.3加入显影液如果瑞氏染色实验成功，那么接下来可以准备将木质菌梗片洗净后加入显影液了，而此时温度需要将控制在22℃，放置5-10分钟后，可以发现菌梗片变淡，并且半透明，证明显影液已经取得成功。

2.4用x网影像再接着，用X网影像观测染色后的木质菌梗，当观测到菌梗表面开始出现斑斑点点发亮时，这表明染色实验结束，在此基础上对木质菌梗进行另一个体系的判断，也就是对菌梗的形态和染色的准确性进行分类、认定和鉴定。

三、瑞氏染色实验结束完成上述瑞氏染色实验操作后，就可以对经过染色后的木质菌梗进行分析、鉴定，完成木质菌梗的离子吸收率、分子斑点和染色效果等等内容，通过瑞氏染色实验把细菌聚集在一起，以便进行实验分析，这正是瑞氏染色实验取得成功的原因。

瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。

将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。

染液配好后放于室温下，一周后即可使用。

新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。

久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。

染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。

2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。

配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。

3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。

4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。

显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。

白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。

细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。

简述瑞氏染色法的步骤
瑞氏染色法是一种常用的染色技术，可以用于细胞和组织的染色。

它
是由丹麦科学家汉斯·克里斯蒂安·瑞氏于1884年首次提出的。

该方法
通过使用甲苯和乙醇的混合物处理样本，然后用胰蛋白酶去除细胞膜上的
脂肪，最后用甲苯溶液进行染色，以显示细胞的核和胞质细胞器。

具体步
骤如下：
1.处理样本：首先，将待染色的细胞或组织样本置于甲苯中，以去除
样本中的脂肪。

2.脱水：将样本放入一系列乙醇浓度不断增加的溶液中，以脱水样本。

这一步骤有助于防止样本的脂肪重新进入细胞。

3.清洗：用清洁的甲醇或二甲苯清洗样本。

这一步骤有助于去除残留
的脂肪和乙醇。

4.染色：将样本放入瑞氏染色剂中。

瑞氏染色剂是一种由甲苯、酸性
染料（如酸性果胶酸和酸性红G）和邻苯二甲酸二丁酯组成的溶液。

该溶
液可以染色细胞核和胞质细胞器。

5.清洗：将样本从染色剂中取出，用甲醇或二甲苯轻轻洗涤，以去除
多余染料。

6.干燥：用空气吹干样本或者放置在加热器中干燥。

7.盖片：将样本置于玻璃盖片上，加入合适的封片剂（如硬脂酸树脂），然后覆盖另一块盖片。

8.固定：将盖片置于120°C的烘箱中固定，使其更加耐久。

使用瑞氏染色法可以染色细胞核为蓝色或紫色，并使胞质细胞器以深红色或橙色显现。

这种染色方法在生物学、医学和组织学等领域被广泛使用，它可以帮助研究人员观察细胞和组织的结构与功能，提供有关细胞和组织的信息。

瑞氏-姬姆萨染液说明书货号：G1020规格：100ml/500ml保存：室温避光保存，有效期至少2年。

产品说明：瑞氏-姬姆萨染液是一种复合染液，兼有瑞氏和姬姆萨染液二者优点，主要应用于血液和骨髓涂片染色。

各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料和碱性染料的亲和力也不同，因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。

瑞氏染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，着色清晰，色泽纯正，但是对胞核着色偏深,核结构显示较差。

姬姆萨染色对细胞核着色程度适中，细胞核结构和色泽清晰艳丽，对核结构的识别较佳，但对胞浆着色较差，故采用瑞氏姬姆萨混合染色，具有染色效果好，对比清晰，操作简便等特点。

使用方法：本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。

具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏-姬姆萨染液2-3滴覆盖整个标本涂片，染1-2分钟。

3、滴加等量的0.01M磷酸盐缓冲液（PH6.4-6.8），轻轻晃动玻片,与瑞氏-姬姆萨染色液充分混匀，染色3-5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、染色后胞浆和胞核的染色清晰分明，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆呈浅红色，胞浆中颗粒区分明显。

注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。

4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

南京森贝伽生物科技有限公司 网址：/仅供科研版本号：180601瑞氏染色液(Wright Stain)【产品组成】【保存条件】室温,24个月【产品概述】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料,对原生质的染色有很好的区别作用。

各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质。

原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

瑞氏染液为蓝色澄明液体，有甲醇特异香味，主要由美蓝、伊红、甲醇等组成，其中甲醇的作用是溶解美蓝和伊红以及固定细胞形态。

Wright Stain 以进口瑞氏色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。

该染液的特点：由Wright Stain 和磷酸盐缓冲液组成，直接使用，无需任何配制过程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。

经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。

细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【使用方法】1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。

2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加适量Wright Stain 覆盖涂片，室温染色1～2min 。

4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与Wright Stain 混匀，室温静置3～10min 。

5、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。

(注:也可先用磷酸盐缓冲液冲洗玻片，时间控制在30s 左右。

仅供科研使用版本号：170303瑞氏染色液(Wright Stain)【产品组成】Component SBJ-0519S2×100mlSBJ-0519M2×500mlStore at试剂(A):Wright Stain 100ml 500ml 室温,避光试剂(B):磷酸盐缓冲液100ml 500ml 室温【保存条件】室温,24个月【产品概述】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料,对原生质的染色有很好的区别作用。

各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质。

原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

瑞氏染液为蓝色澄明液体，有甲醇特异香味，主要由美蓝、伊红、甲醇等组成，其中甲醇的作用是溶解美蓝和伊红以及固定细胞形态。

Wright Stain以进口瑞氏色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。

该染液的特点：由Wright Stain和磷酸盐缓冲液组成，直接使用，无需任何配制过程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。

经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。

细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【使用方法】1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。

2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加适量Wright Stain覆盖涂片，室温染色1～2min。

８２８晦学理沧与实践２（３０２年第１５巷第７期ＪＭｅｄ＇１３１ｃｏｒ＆ＰｒａｃＶｏｌ１５，Ｎｏ７－Ｊｕｌｙ２００２———一————一———一———————————一—————正确，耗时ｊ３～１５１。

，一Ｆ均鉴定值为８７８％．比常规鉴定法快些，但细菌鉴定的符音率相对低些。

刈链球菌鉴定的符台率为７ｌ４％，耗州３。

１５ｈ．其中，化脓性链球菌、Ｂ群链球菌在３ｈ即可鉴定出米，鉴定值均在９２％以上。

从对肺炎链球荫的鉴定情况束看，卫生部一北发了３次（（９７０４、９８１０、２００６），Ｈ有第３次鉴定出来．＝分析原因有：链球菌不易乳化，而且很难混匀．存实际操作叫，可将菌液浓度词到１＃＃”麦氏单位；另一方面，所发质控菌株来自呼吸道感染，多为混台菌，婀不能丹纯，会影响鉴定结果。

３．３革兰氏阳｝生杆蔺一一共发了５株，Ｖｉｔｅｋ一３２对ｃ＋ｂ的鉴定不如Ｇ＋ｃ．在做ｃ＋ｃ的鉴定时需注意：①正确观察细菌溶血情况和操作触酶试验；②注意镜下细菌的形态和排列方式；③将Ｖｉｉｅｋ一３２的生化档定结果采用双歧检索表进行鉴定。

在所发的５株荫巾．笔者根据Ｖｉｔｅｋ一３２的生化反应结果．结台荫落颜色、形态、溶血情况，触酶试验，完成ｒ９７０１、９８０５、９８０７、９９０１、２００２这５株菌的鉴定．且完全正确。

３４时真菌的鉴定，除９７０２鉴定与质控菌株不符外，其余５株垒部鉴定正确．ｊ：ｌ鉴定值均在９９％以上，耗肘２４～４８ｈ，较传统方法提前２４—４８ｈ，总结４年中Ｖｌｔｅｋ一３２对真菌的鉴定情毗，应注意：①在用Ｖｉｌｅｋ一３２测试时，应适当结合形态学观察；②应注意孵育时间：有的真菌在３０℃培养２４ｈ后．ＹＢＣ卡上机读数可直接鉴定出来，但有的需再孵育２４ｈ再次读数，切记不能将ＹＢＣ昔直接孵育４８ｈ再读数，因为ＹＢＣ暑培养２４ｈ和培养４８ｔ．后．判断备生化反应孔陌性界值是不同的。

综上所述，Ｖｉｔｅｋ．３２的运用，有勘于实验室快速诊断，提高工作效率，但同时，检验人员应加强微生物基础知识和技能的培训，加强对仪器原理的理解，严格按仪器操作规程操作，怍好室内质控工作．只有这样，才能更快，更好地为临床提供可靠的诊断和治疗依据。

瑞氏染色操作流程
1.实验准备
- 收集需要染色的细胞或组织样本，并固定在载玻片或试管中。

常用的固定方法包括用乙醇、甲醛、Perfix等。

-根据样品的特性和染色目的，选择适当的瑞氏染色方法和试剂。

常用的瑞氏染色方法包括瑞氏-厄利染色法、瑞氏-黛染色法等。

2.染色步骤
-将固定的细胞或组织样本浸入去离子水中，使其恢复至自然状态。

-准备适当浓度的染色试剂。

瑞氏染色试剂一般包括硒铁酸盐和酸性柠檬酸溶液。

-将样本浸入硒铁酸盐溶液中，浸泡时间根据实验需要和染色方法而定。

染色时间过长可能导致染色物质过量或染色效果不佳。

-用去离子水或PBS缓冲液冲洗样本，使其清洁并去除多余的染色试剂。

-将样本浸入酸性柠檬酸溶液中，去除多余的染色物质并增强染色效果。

-再次用去离子水或PBS缓冲液冲洗样本。

3.结果观察和分析
-将处理后的样本进行显微镜观察。

瑞氏染色可以用于可视化染色物质（如核酸和蛋白质）或细胞器结构（如核、线粒体等）。

-在显微镜下观察样本时，可以调整镜头焦距、曝光时间等参数，以获得清晰且准确的图像。

-观察到的染色结果可以进行进一步的分析和解释。

例如，可以量化染色强度或比较不同样本之间的染色差异。

总结：
瑞氏染色是一种常用的细胞和组织染色技术，可以用于生物学实验室的各种研究和应用。

该操作流程包括样本固定、染色步骤和结果观察与分析。

通过瑞氏染色，可以可视化并研究细胞和组织中的特定结构和分子，为生物学研究提供重要的实验基础。

改良瑞氏吉姆萨快速染色液的配制及应用【摘要】目的：通过改良瑞氏吉姆萨染色液配方和方法实现一步快染；用于白带常规检测，确认染色效果及结果。

方法：自配瑞氏吉姆萨染液，对360例白带样本采用常规染液和改良后染液检验，分析改良前后效果、结果差异。

结果：改良瑞氏吉姆萨快速染色在滴虫、真菌、线索细胞及清洁度等，与常规瑞氏吉姆萨染色检测结果无显著差异（P＞0.05）。

结论：改良瑞氏吉姆萨染色液在15-25s对白带样本进行染色，效果、结果较常规染液无显著性差异；改良染液操作便捷，利于使用。

【关键词】表面活性剂；瑞氏吉姆萨染色液；白带；瑞氏吉姆萨染色是一种常用染色方法，可对血液、体液细胞染色检查，如对白带的染色检查【1】，是对妇科疾病常用的手段之一。

常规瑞氏吉姆萨染色流程为A液染色、B液染色、水洗，需要4-30min。

本文在常规染剂上优化配方及流程【3-4】，对白带样本进行15-25秒快速染色，观测效果、检测结果与常规染色方法的差异。

1材料与方法1.1瑞氏吉姆萨试剂及染色方法珠海贝索生物技术有限公司，批号20220216。

使用方法如下：①白带于玻片上烤干或烘干，滴加染色A液(约0.5ml-0.8ml)覆盖整个标本染色约2min；②加A液2-3倍量的缓冲液B液于A液上，两液混合，染色3-10min后水洗，干燥、镜检。

1.2改良瑞氏吉姆萨试剂及染色方法改良试剂配制：染液A配制：瑞氏吉姆萨染料 0.83g，甲醇0.5L，甘油50mL，曲拉通X-100 5mL，吐温-80 10mL；染料放乳钵内研磨至细粉末，加甘油、甲醇研磨，再加入曲拉通、吐温继续研磨，最后转移加甲醇定量，摇匀待用。

缓冲液B液配制：1%KH2PO4 30mL；1/15M KH2PO4 73.5 mL，结晶紫0.5g，纯化水定量至1L。

使用方法如下：①将A液与B液约按3:1混合，得到可直接使用混合染液。

②白带于玻片上烤干或烘干，滴加混合染液(约0.5ml-0.8ml)覆盖整个标本染色约15-25S后水洗，干燥、镜检。

清洁液（洗液）重铬酸钾（工业品纯）300g浓硫酸（工业品纯）300ml自来水3000ml实际上重铬酸钾、硫酸和自来水之比为1：1:10。

先将重铬酸钾溶于水，如加热须待冷后，再缓慢加入浓硫酸，边加边搅。

不准将水倒入浓硫酸内！！！另外，清洁液只能用于玻璃仪器的清洗，不能浸泡金属器械。

血涂片的制备：1、载玻片及盖玻片泡酸时间大于24小时，一张一张放，保证每一张都浸湿2、冲洗，先用自来水冲净至没有颜色，再用流水冲洗一夜3、放在95%的酒精中浸泡过夜4、取出后用棉布擦干，涂片，并用甲醇固定，竖直干燥。

Wright染色法制作血涂片1、取涂好的血片，用玻璃笔划出染色区，以防染液滴落后溢流。

2、将涂片平放桌上或者架上，滴加Wright染液至恰好布满所划范围的血膜，混动使混匀，染色约3分钟。

Wright染液配法:Wright粉剂0.1g，加甲醇60毫升。

将Wright粉剂放在乳钵内，充分研磨，越细越好。

然后取甲醇逐步加入乳钵内，边加边研磨，直至染料全部溶解，置试剂瓶中密封，以后走后可用，以放置一个月后再用最佳。

3、加入等量磷酸盐缓冲液（pH6.8~7)，不断晃动，染色约12分钟，直接放与流水下冲洗。

4、染色后甩干或者直立晾干，用中性树胶或者合成树脂或香柏油封片，或不封片直接镜检。

时间：温度较低时约15分钟（染3分钟，加缓冲液不断晃动12分钟。

温度较高时，总时间约5分钟。

剂量：染液与缓冲液剂量之比为1:1如果染色不够，蒸馏水冲洗后，在按照原步骤重新染封片：干燥后的血涂片，浸入二甲苯中后在其干燥前，擦去蜡线，滴明胶与血涂片的一边（半滴至一滴），眼科镊捏住盖玻片正面在酒精灯上烘烤一下后反面贴于载玻片上。

结果：红细胞呈橘红色；中性粒细胞颗粒蓝紫色至紫红色；嗜酸性粒细胞鲜红色至橘红色；嗜碱性粒细胞颗粒深蓝紫色；淋巴细胞核深蓝紫色，胞质天蓝色；单核细胞核蓝紫色，胞质灰蓝色。

、注：①Wright染料对pH较敏感，因此用缓冲液稀释染液，可使染色作用稳定，便于识别和比较细胞的变化。