瑞氏-姬姆萨复合染色液使用说明

瑞氏-姬姆萨染液编码名称规格单位北京华越洋生物GT79355 瑞氏-姬姆萨染液100ml 瓶瑞氏-姬姆萨染液说明：华越洋瑞氏-姬姆萨染液是一种复合染液，兼有瑞氏和姬姆萨染液二者优点，主要应用于血液和骨髓涂片染色。

各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料和碱性染料的亲和力也不同，因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。

姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，着色清晰，色泽纯正，但是对胞核着色偏深,核结构显示较差。

瑞氏染色对细胞核着色程度适中，细胞核结构和色泽清晰艳丽，对核结构的识别较佳，但对胞浆着色较差，故采用瑞氏姬姆萨混合染色，具有染色效果好，对比清晰，操作简便等特点。

瑞氏-姬姆萨染液操作说明：华越洋瑞氏-姬姆萨染液可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。

具体方法请根据自己需求参考既有文献，瑞氏-姬姆萨染液以涂片为例，仅供参考。

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏-姬姆萨染液2-3 滴覆盖整个标本涂片，染1-2 分钟。

3、滴加等量0.01M磷酸盐缓冲液（pH6.4-6.8），轻轻晃动玻片, 与瑞氏-姬姆萨染色液充分混匀，染色3-5 分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、染色后胞浆和胞核的染色清晰分明，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆呈浅红色，胞浆中颗粒区分明显。

瑞氏-姬姆萨染液注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

3、染色对pH 十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。

4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

瑞氏-姬姆萨染液相关染色液：名称规格名称规格中性红染色液(0.33%）500ml结晶紫水溶液(0.1%)100ml中性红染色液(0.5%）500ml核固红染色液(0.1%)100ml中性红染色液(0.1% 常规染色)100ml天狼星红染色试剂盒2*50mLTTC染色液（0.4%）500ml0.5%伊文斯蓝/埃文斯蓝溶液100mLMasson三色染色试剂盒7×50ml茜素红S染色液(1%,pH4.2)100mL普鲁士蓝染色试剂盒2*50ml0.2%核固红染色液100ml尼氏染色液(焦油紫法)2*100ml改良Lillie-Mayer苏木素染色液100ml吕氏碱性美蓝染色液（0.4%）100ml改良Lillie-Mayer苏木素染色液500ml亮绿SF染色液100ml Ehrlich苏木素染色液100ml溴甲酚绿-甲基红指示剂溶液100ml Ehrlich苏木素染色液500ml饱和油红O染色液100ml苏木素伊红混合染色液(一步法)100mlVan Gieson 染色液50ml苏木素伊红混合染色液(一步法)500mlVan Gieson 染色试剂盒3×50ml改良Harris苏木素染色液100mlSchiff试剂50ml改良Harris苏木素染色液500ml茜素红S染色液（0.2%）100ml Mayer苏木素染色液100ml煌焦油蓝染色液100ml Mayer苏木素染色液500ml2% TTC染色液100ml苏木素伊红(HE)染色液2×100ml革兰氏染色液试剂盒4×10ml苏木素伊红(HE)染色液2×500ml醋酸洋红染色液100ml Core苏木素染色液100ml姬姆萨原液100ml Core苏木素染色液500ml姬姆萨工作液100ml Carazzi苏木素染色液100ml瑞氏-姬姆萨复合染液100ml Carazzi苏木素染色液500ml瑞氏染液50ml Delafield苏木素染色液100ml结晶紫染色液(2.5%)10ml Delafield苏木素染色液500ml结晶紫染色液(1%)10ml Gill苏木素染色液(Gill No.1)100ml结晶紫染色液(0.1%)10ml Gill苏木素染色液(Gill No.1)500ml荚膜染色液（试剂盒）50ml×2Gill苏木素染色液(Gill No.2)100ml芽孢染色液（试剂盒）50ml×2Gill苏木素染色液(Gill No.2)500ml鞭毛染色液（试剂盒）100ml Gill苏木素染色液(Gill No.3)100ml石炭酸复红染液(苯酚品红染液)100ml Gill苏木素染色液(Gill No.3)500ml改良型石炭酸复红染液(苯酚品红染液)100ml Heidenhain铁苏木素染色液3×100ml 抗酸染色液（试剂盒）50ml×3天青石蓝苏木素染色液2×50ml 吕氏碱性美蓝染色液（0.1%）100ml改良MacConaill铅苏木素染色液140ml卢戈碘液（革兰氏染色）10ml苏木素无水乙醇溶液(5%)100ml番红染色液（沙黄）10ml苏木素无水乙醇溶液(10%)100ml卢戈碘液（标准碘液）100ml伊红染色液(进口水溶)100ml Mayer'苏木素染液(免疫组化)10ml伊红染色液(进口水溶)500ml HE染色液(试剂盒)3×10ml伊红染色液(水溶)100ml Cole氏苏木素染色液(常规染色)100ml伊红染色液(水溶)500ml Weigert苏木素染色液2×50ml伊红染色液(水溶,5%)100ml AB-PAS染色试剂盒50ml*6伊红染色液(醇溶)100ml糖原PAS染色液（过碘酸-雪夫染色液）50ml×2伊红染色液(醇溶)500ml糖原PAS染色液试剂盒（过碘酸-雪夫染色液）50ml×4Scott蓝化液500ml伊红染色液100ml氨水溶液(0.1%)500ml标准阿利新蓝染色液3×50ml氨水溶液(0.3%)500ml阿利新蓝染色液(pH2.5)100ml氨水溶液(0.5%)500ml阿利新蓝染色液(pH=1.0)（试剂盒）3×50ml氨水溶液(1%)500ml碱性品红乙醇溶液(5%)100ml天青石蓝B染色液50ml碱性品红水溶液(1%)100ml天青石蓝B染色液100ml。

SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血液寄生虫检验。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、操作步骤：1 原理：血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后，运用复合染料染色，观察细胞形态、结构、内容物等，以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。

2 试剂：由台湾贝索公司提供。

2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液：2.2 碱性亚甲兰染液：2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液：3 方法：3.1 红细胞检查：正常红细胞呈圆形，中央略凹陷，大小较为一致，直径为 6～9μm。

3.1.1 大小异常红细胞：各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径>10μm者称大红细；>15μm者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等；直径<6μm者称为小红细胞，多见于缺铁性贫血等疾病。

3.1.2 形态异常红细胞：3.1.2.1 球形红细胞：红细胞直径通常<6μm，厚度增加，通常>2.6μm，因而红细胞呈小圆球形，细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于：遗传性球形细胞增多症；自身免疫性溶血性贫血；异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。

3.1.2.2 椭圆形红细胞：红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。

正常人血液中也可见到，但最多不超过15%。

增多见于：遗传性椭圆形细胞增多症，一般要高于25%～50%才有诊断价值；大细胞性贫血，可达25%；其他各类贫血都可有不同程度的增多。

3.1.2.3 靶形红细胞：比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白连接，边缘部染色深，故呈靶状。

主要见于：地中海贫血；严重缺铁性贫血；一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病)；肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。

3.1.2.4 镰形红细胞：细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红细胞增多症。

当疾病侵入人体，会引起相应病灶部位的病理性改变，对于相应病灶部位的观察经大量应用于临床工作及科学研究。

20世纪90年代病理检查进入组化、免疫组化、分子生物学及癌基因检查。

随着自然科学的迅速发展，新仪器设备和技术应用到医学中来，超微结构病理、分子病理学、免疫病理学、遗传病理学等方法也都应用到病理检查中。

癌细胞活体切片图为探讨器官、组织或细胞所发生的疾病过程，可采用某种病理形态学检查的方法，检查他们所发生的病变，探讨病变产生的原因、发病机理、病变的发生发展过程，最后做出病理诊断。

今天我们要介绍的产品，就是在病理学以及疾病研究中常用的染色剂——吉姆萨染液。

（abs47047618）吉姆萨染液别名姬姆萨染色液，吉姆萨染色液，姬姆萨染原液。

为天青色素、伊红、次甲蓝的混合物，本染色液最适于血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色。

染前用蛋白酶等进行处理，然后再用姬姆萨染液染色，在染色体上，可以出现不同浓淡的横纹样着色。

姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

吉姆萨染色图吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同，从图中可以看出，吉姆萨染色液(Giemsa stain)对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

在使用时，pH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均含蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与天青结合，染色偏蓝。

瑞⽒-吉姆萨染液配法英⽂拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离⼦。

使⽤⽅法瑞⽒（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染⾊：1．瑞⽒染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄⾊伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞⽒（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．⽤甲醇作瑞⽒染料溶剂，即成瑞⽒染液。

甲醇是瑞⽒染料良好溶剂，有两种作⽤：（1）甲醇使瑞⽒染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有⾊物质⽽着⾊。

甲醇ME（瑞⽒染料）----→M+ + E-在配制的瑞⽒染液中美蓝如放置过久即可氧化⽽含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红⾊，但不能使胞浆染为蓝⾊，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝⾊，染⾊主要是化学作⽤，是离⼦彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强⼤的脱⽔⼒，可将细胞固定在⼀定形态及增加细胞结构的表⾯积，提⾼细胞对染料吸收作⽤，同时由于甲醇吸附染⾊液中的⽔，使染⾊液升温，加速染⾊反应。

染液配制(1) 瑞⽒染液配制：瑞⽒染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称⼲燥（事先放⼊温箱⼲燥过夜）瑞⽒染料放置乳钵内，⽤乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再⾏研磨⾄听不到研芝⿇声即呈细粉末，加少许⽢油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“⼀⾯镜”光泽，⽽⽆染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈⼀⾯镜光亮，静置⽚刻，将上层液体倒⼊⼀清洁储存瓶内（最好⽤甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，⾄乳钵内染料及甲醇⽤完为⽌，摇匀，密封瓶⼝。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，⼀般储存3个⽉以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作⽤：○染⾊对氢离⼦浓度是⼗分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋⽩质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持⼀定的pH使染⾊稳定，PBS的pH ⼀般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作⽤，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作⽤，使pH恒定。

瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第1页共2页1 目的：规范瑞氏姬姆萨染色操作规程，保证染色效果。

2 原理：2.1 染色原理：瑞氏姬姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成。

细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。

各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料（伊红）和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。

因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。

2.2 试剂组成：瑞氏姬姆萨A液（瑞氏染料、姬姆萨染料）瑞氏姬姆萨B液（磷酸盐）3 操作步骤：3.1 滴加瑞氏姬姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；3.2 再将瑞氏姬姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。

（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）3.3 水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

4 结果解释：4.1 血细胞涂片、骨髓涂片染色：红细胞呈粉红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

4.2 阴道分泌物（妇科白带染色）：4.2.1 滴虫：经过染色后的滴虫跟活的滴虫呈现完全不同形态，一般情况下，看不到鞭毛，经过染色后，滴虫多为梨形、圆形、椭圆形或呈不规则形态，浆被染成灰蓝或天蓝色，核小，枣核状，常偏于一侧，需注意观察，避免与上皮细胞混淆。

4.2.2 念珠菌（霉菌）：染成深蓝色，可见芽生孢子，假菌丝细长而直。

4.2.3 白细胞：形态上与血细胞涂片的白细胞相同，一般白细胞的多少，提示发炎程瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第2页共2页度的高低，对医生的诊断具有一定的指标作用。

改良吉姆萨染色液(20X)产品编号 产品名称包装 C0131-100ml 改良吉姆萨染色液(20X) 100ml C0131-500ml改良吉姆萨染色液(20X)500ml产品简介：碧云天生产的改良吉姆萨染色液(Modified Giemsa Staining Solution)，也称瑞氏-吉姆萨染色液(Wright-Giemsa Staining Solution)，是用于细胞、血液、骨髓涂片或组织切片等样品染色的染色液。

根据细胞成分的化学性质，改良吉姆萨染色液可将细胞质染成粉红色或蓝色，将细胞核染成紫红色或蓝紫色。

在光学显微镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像，便于对细胞内部结构的观察及异常变化的识别。

吉姆萨染色(Giemsa stain)，又称姬姆萨染色，是以德国化学家、细菌学家Gustav Giemsa 的名字来命名的，最初是用于疟疾病人体内寄生虫的诊断，后由于对染色质和细胞核膜的高质量染色而用于组织病理学和细胞遗传学。

吉姆萨染色对细胞质着色较好，结构显示清晰，但细胞核着色较深，核结构显示不佳。

吉姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，而改良吉姆萨染色法是将吉姆萨染色法与瑞氏染色法结合，兼顾二者之长，使细胞质和细胞核均能获得满意的染色效果。

碧云天的改良吉姆萨染色液、吉姆萨染色液和瑞氏染色液三种染色液的比较如下：产品名称 改良吉姆萨染色液(20X) 吉姆萨染色液(10X) 瑞氏染色液产品编号C0131 C0133 C0135 主要成分 天青B 、天青II-伊红、亚甲基蓝天青II 和伊红 亚甲基蓝和伊红细胞质颜色粉红色或蓝色 粉红色或蓝色 粉红色或蓝色 细胞核颜色紫红色或蓝紫色紫红色或蓝紫色紫红色特点 将吉姆萨染色和瑞氏染色结合起来，弥补了两者各自的缺点 对细胞质着色力较强，但细胞核着色较深，细胞核结构显示不佳细胞质及其中颗粒染色较好，但细胞核染色质及核膜的结构不是很清晰用途 主要用于细胞、血液、骨髓涂片或组织切片的染色 主要用于染色体显带、寄生虫和血细胞的染色主要用于血细胞的染色改良吉姆萨染色液的主要成分是天青B (azure B)、天青II-伊红(azure II-eosin)和亚甲基蓝(methylene blue)。

SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血液寄生虫检验。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、操作步骤：1 原理：血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后，运用复合染料染色，观察细胞形态、结构、内容物等，以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。

2 试剂：由台湾贝索公司提供。

2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液：2.2 碱性亚甲兰染液：2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液：3 方法：3.1 红细胞检查：正常红细胞呈圆形，中央略凹陷，大小较为一致，直径为 6～9μm。

3.1.1 大小异常红细胞：各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径>10μm者称大红细；>15μm者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等；直径<6μm者称为小红细胞，多见于缺铁性贫血等疾病。

3.1.2 形态异常红细胞：3.1.2.1 球形红细胞：红细胞直径通常<6μm，厚度增加，通常>2.6μm，因而红细胞呈小圆球形，细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于：遗传性球形细胞增多症；自身免疫性溶血性贫血；异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。

3.1.2.2 椭圆形红细胞：红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。

正常人血液中也可见到，但最多不超过15%。

增多见于：遗传性椭圆形细胞增多症，一般要高于25%～50%才有诊断价值；大细胞性贫血，可达25%；其他各类贫血都可有不同程度的增多。

3.1.2.3 靶形红细胞：比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白连接，边缘部染色深，故呈靶状。

主要见于：地中海贫血；严重缺铁性贫血；一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病)；肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。

3.1.2.4 镰形红细胞：细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红细胞增多症。

８２８晦学理沧与实践２（３０２年第１５巷第７期ＪＭｅｄ＇１３１ｃｏｒ＆ＰｒａｃＶｏｌ１５，Ｎｏ７－Ｊｕｌｙ２００２———一————一———一———————————一—————正确，耗时ｊ３～１５１。

，一Ｆ均鉴定值为８７８％．比常规鉴定法快些，但细菌鉴定的符音率相对低些。

刈链球菌鉴定的符台率为７ｌ４％，耗州３。

１５ｈ．其中，化脓性链球菌、Ｂ群链球菌在３ｈ即可鉴定出米，鉴定值均在９２％以上。

从对肺炎链球荫的鉴定情况束看，卫生部一北发了３次（（９７０４、９８１０、２００６），Ｈ有第３次鉴定出来．＝分析原因有：链球菌不易乳化，而且很难混匀．存实际操作叫，可将菌液浓度词到１＃＃”麦氏单位；另一方面，所发质控菌株来自呼吸道感染，多为混台菌，婀不能丹纯，会影响鉴定结果。

３．３革兰氏阳｝生杆蔺一一共发了５株，Ｖｉｔｅｋ一３２对ｃ＋ｂ的鉴定不如Ｇ＋ｃ．在做ｃ＋ｃ的鉴定时需注意：①正确观察细菌溶血情况和操作触酶试验；②注意镜下细菌的形态和排列方式；③将Ｖｉｉｅｋ一３２的生化档定结果采用双歧检索表进行鉴定。

在所发的５株荫巾．笔者根据Ｖｉｔｅｋ一３２的生化反应结果．结台荫落颜色、形态、溶血情况，触酶试验，完成ｒ９７０１、９８０５、９８０７、９９０１、２００２这５株菌的鉴定．且完全正确。

３４时真菌的鉴定，除９７０２鉴定与质控菌株不符外，其余５株垒部鉴定正确．ｊ：ｌ鉴定值均在９９％以上，耗肘２４～４８ｈ，较传统方法提前２４—４８ｈ，总结４年中Ｖｌｔｅｋ一３２对真菌的鉴定情毗，应注意：①在用Ｖｉｌｅｋ一３２测试时，应适当结合形态学观察；②应注意孵育时间：有的真菌在３０℃培养２４ｈ后．ＹＢＣ卡上机读数可直接鉴定出来，但有的需再孵育２４ｈ再次读数，切记不能将ＹＢＣ昔直接孵育４８ｈ再读数，因为ＹＢＣ暑培养２４ｈ和培养４８ｔ．后．判断备生化反应孔陌性界值是不同的。

综上所述，Ｖｉｔｅｋ．３２的运用，有勘于实验室快速诊断，提高工作效率，但同时，检验人员应加强微生物基础知识和技能的培训，加强对仪器原理的理解，严格按仪器操作规程操作，怍好室内质控工作．只有这样，才能更快，更好地为临床提供可靠的诊断和治疗依据。