肺癌患者胸腔积液中的临床应用价值

的。常规的细胞学检查主要根据细胞形态进行诊断 ， 由于腺癌细胞与反应性 间皮细胞形态极为相似 ， 故鉴
别以上两种细胞是诊断癌性胸腔积液的最大难点 。Ｄ Ｎ Ａ异常甲基化有助于肺癌诊断 ， 故通过检测胸腔积 液中 Ｄ Ｎ Ａ的甲基化状态可从基因水平对肺癌进行早期诊断， 也有助于疾病预后的发展监控。 【 关键词】 Ｄ Ｎ Ａ甲基化 ； 胸腔积液； 生物标记物； 肺肿瘤 Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ Ｄ Ｎ Ａ ａ ｂ ｅ ｒ ｒ ａ ｎ ｔ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｆ ｌ ｕ ｉ ｄ ｏ ｆ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｌ ｕ ｎ ｇ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ Ｙ Ｅ Ｌ ｉ ｎ ， ＷＵ
基化可作为肿瘤早期检测的分子标记ｒ ３ ． ５ － ６ １
２ Ｄ Ｎ Ａ甲基化与肿瘤
Ｄ Ｎ Ａ异常甲基化是恶性肿瘤的一种特征性表 现， 与肿瘤发生有关川， 它往往出现在肿瘤发生前，
并随着恶性肿瘤的发生、 发展而变化。Ｄ Ｎ Ａ甲基化 的检测为肿瘤的早期诊断、 鉴别诊断提供依据 ， 对肿
国际呼吸杂志 ２ ０ ０ ８ 年 第２ ８ 卷 第５ 期
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ， Ｍａ ｒ ． ２ ０ ０ ８ ， Ｖ ｏ ｌ ． ２ ８ ， Ｎ ｏ ． ５
２ ７ ７
・ 综述 ・
Ｄ Ｎ Ａ异常甲基化在肺癌患者胸腔积液中的 临床应用价值
叶琳 吴 广平
【 摘要】 胸腔积液是肺部多种疾病的常见并发症之一， 其中绝大多数恶性胸腔积液是由肺腺癌引起
［ Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］ Ｄ Ｎ Ａ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ； Ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ； Ｂ ｉ ｏ ｍ ａ ｒ ｋ ｅ ｒ ； Ｌ ｕ ｎ ｇ ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｓ
胸腔积液是肺部多种疾病的常见并发症之一，
‘ 中肿瘤特异性基因启动子区域超甲基化可能会提高 卵巢癌早期诊断率［ ［ １ ０ １ 。在乳腺癌 和卵巢癌 中
Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ基因启动子区域超甲基化而失活可能发
示出异常甲基化。说明在多数肺癌患者的支气管肺
泡灌洗液中可以检测到启动子 甲基化 ， 这可 以作为
肺癌诊断的分子标记。同样， Ｋ ｉ ｍ等［ ［ ２ ０ ］ 也认为肿瘤
Ｃ ｐ Ｇ岛甲基化通过组蛋白脱乙酸基及诱导染色质 浓缩影响基因表达［ ３ １ 。大量的研究表明， 基因 Ｃ ｐ Ｇ
岛启动子异常甲基化与基因转录沉默相互关联川。 这可能是肿瘤形成阶段的决定因素， 因此 Ｃ ｐ Ｇ岛甲
阴性［ ２ Ｊ ＇ 。通过检测胸腔积液内肿瘤标志物， 对肺癌
患者进行诊断已有报道 ， 且具有重要的临床应用价 值。但通过检测胸腔积液内 Ｄ Ｎ Ａ 甲基化状态进行 诊断， 目前国外仅有少数学者率先进行研究。 １ Ｄ Ｎ Ａ甲基化与 Ｃ ｐ Ｇ岛
近年来， 肺癌的发病率和病死率不断增高， 即使 采用强化治疗 ， 肺癌患者的预后也是很差的， 缺乏有
效的早期诊断方法是患者预后不 良的主要原 因之
一， ５ ］ ｏ Ｄ Ｎ Ａ异常甲基化在肺癌的癌前病变和肺癌
不同阶段均有发生 ， 它与肺癌 的发生、 发展关 系密 切。Ｄ Ｎ Ａ异常甲基化为肺癌早期诊断和鉴别诊断
２ ， １ Ｄ Ｎ Ａ甲基化与肿瘤的早期诊断 肿瘤早期阶 段利用非损伤性方法检测体液中特异性分子标记即
Ｄ Ｎ Ａ甲基化状态， 有助于肿瘤的早期发现［ ８ － ９ １ 。在
卵巢癌 Ｉ Ａ或 Ｂ期患者的血清和腹腔积液中检测出
Ｄ Ｎ Ａ启动子超甲基化， 说明 Ｄ Ｎ Ａ启动子区域超甲
基化可能为卵巢癌发生的早期事件 ， 因此分析血清
ｂ ｅ ｔ ｈ ｅ ｍ ｏ ｓ ｔ ｖ ｅ ｘ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｂ ｌ ｅ ｍ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｍ ａ ｌ ｉ ｇ ｎ ａ ｎ ｔ ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｄ Ｎ Ａ ａ ｂ ｅ ｒ ｒ ａ ｎ ｔ
从ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ １ １ ０ ０ ０ １ ， 以ｉ ｎ ａ ［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓ ｏ ｎ ｅ ｏ ｆ ｃ ｏ ｍ ｍ ｏ ｎ ｃ ｏ ｍ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ｈ ａ ｔ ｍａ ｙ ｂ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ａ ｗ ｉ ｄ ｅ ｖ ａ ｒ ｉ ｅ ｔ ｙ ｏ ｆ
基化现象伴随着肿瘤发展和侵袭力增强 ， 而且 ， 在初 始阶段显示血清中 Ｌ Ｉ Ｎ Ｅ － Ｉ 异常甲基化是肝细胞癌 预后恶化的分子生物学标记。又如前列腺癌诊断 中， 不同基因启动子超 甲基化也有助于前列腺癌预 后的评价〔 １ ４ ］ ３ Ｄ Ｎ Ａ甲基化在肺癌中的研究进展
而良 性肺部疾病患者中没有发现 Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ 甲基 化， Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ启动子甲基化状态对鉴别肺癌和 良 性肺部疾病具有高度特异性。 ３ ． ３ 肺癌患者痰液中 Ｄ Ｎ Ａ甲基化检测 痰液是
Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ启动子 甲基化状态， 发现 Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ启
动子超甲基化有助于肺癌的早期诊断 ［ “ 〕 。 Ｂ ｅ ｌ ｉ ｎ ｓ ｋ ｙ
等［ ２ ２ 〕 通过病例对照研究， 发现若 １ ４ 种基因中的 ６
种基因甲基化阳性率大于 ５ ０ ， 患肺癌的风险性就 会增加 ， 若在伴随 ６种基 因中 ３种或更多基 因甲基
比较容易获得的标本 ， 故临床常采用痰液脱落细胞 检查来诊断肺癌。一些研究也发现在肺癌患者痰液 中检测 Ｄ Ｎ Ａ 异常 甲基化对肺癌诊断起到重要作
用， 有学者采用甲基化特异性 Ｐ Ｃ Ｒ （ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ －
ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ Ｐ Ｃ Ｒ ， ＭＳ Ｐ ） 技术分析肺癌早期患者痰液中
Ｄ Ｎ Ａ 甲基化是指 在 Ｄ Ｎ Ａ 甲基 转 移 酶 （ Ｄ Ｎ ＭＴ ） 催化下， 将Ｓ － 腺昔甲硫氨酸（ Ｓ Ａ Ｍ） 的甲基 转移到胞嗜陡的 ５位碳原子上 ， 从而使胞嗜陡转化 为５ 一 甲基胞嗜陡（ ５ － ｍｃ ） 的过程。多数 Ｄ Ｎ Ａ 甲基化
也是验证疾病病因、 判断其 良恶性的重要媒介川。
基金项 目： 沈阳市科技局科研项 目（ １ ０ ５ ３ １ ２ ５ － １ － ５ ２ ） 作者单位 ： １ １ ０ ０ ０ １ 沈阳， 中国医科大学附属第一医院病理科
２ ７ ８
国际呼吸杂志 ２ ０ ０ ８ 年 第２ ８ 卷 第５ 期 Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ， Ｍａ ｒ ． ２ ０ ０ ８ ， Ｖ ｏ ｌ ． ２ ８ ， Ｎ ｏ ． ５
管抽吸物中经常发现 Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ启动子超甲基化，
基化现象， 表明尿液沉渣和血清中特定基因甲基化 可作为直肠癌早期诊断的指标。 ２ ． ２ Ｄ Ｎ Ａ甲基化与肿瘤的预后 通过检测 Ｄ Ｎ Ａ
甲基化状态也可判定肿瘤预后情况， Ｔ ａ ｎ ｇ ｋ ｉ ｊ ｖ ａ ｎ ｉ ｃ ｈ 等［ １ ３ 〕 在肝细胞癌患者血清中发现 Ｌ Ｉ Ｎ Ｅ － １ 、 的异常甲
常规的细胞学检查主要是依据细胞的形态特点进行 诊断， 由于癌细胞在积液中无组织及器官构架的束 缚而 自由漂浮和增生甚至经几代繁殖 ， 失去了原来 在组织中的形态特征， 加之受刺激后从胸膜脱落下 来的反应性 间皮细胞也有“ 癌细胞” 的一些形态特 征， 故单纯依靠形态学进行诊断敏感性较低， 尤其是 较早期异型性不明显的癌细胞与反应性间皮细胞几
ｌ ｕ ｎ ｇ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ． Ｍｏ ｓ ｔ ｏ ｆ ｍ ａ ｌ ｉ ｇ ｎ ａ ｎ ｔ ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ａ ｒ ｅ ｄ ｕ ｅ ｔ ｏ ａ ｄ ｅ ｎ ｏ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｍ ａ ｏ ｆ ｌ ｕ ｎ ｇ ． Ｃ ｏ ｎ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｃ ｙ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｓ ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ｈ ｏ ｗ ｅ ｖ ｅ ｒ ， ａ ｓ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｏ ｆ ａ ｄ ｅ ｎ ｏ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｍ ａ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｍ ｅ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｍ ｅ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ｅ ｍ ｅ ｌ ｙ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｉ ｎ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｓ ｔ ｉ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｔ ｗ ｏ ｅ ｎ ｔ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｍ ａ ｙ
相关基因异常甲基化对非小细胞肺癌的早期诊断具
生在乳腺癌和卵巢癌的早期， 它有助于肿瘤的早期
诊断〔 ‘ 。 一 ， ’ 〕 。Ｈ ｏ ｑ ｕ ｅ 等〔 １ ２ ］ 发现在多数直肠癌患者的
尿液沉渣和血清中至少有一个肿瘤相关基因存在甲
有一定的价值。Ｇ ｒ ｏ ｔ ｅ 等［ ２ １ 〕 证实在肺癌患者的支气
瘤发生 、 发展及预后也具有重要的意义。
的诊断。Ｔ ｏ ｐ ａ ｌ ｏ ｇ ｌ ｕ 等［ ｉ ｓ 〕 采用实时 Ｐ Ｃ Ｒ技术检测 ３ １ 例原发性肺癌和 １ ０ 例非肿瘤患者支气管肺泡灌
洗液中 ８ 种肿瘤相关基因启动子甲基化状态， 研究 发现 ３ １ 例原发性肺癌患者中， ６ ８ ％患者的 ８ 种肿瘤 相关基因中至少有一种基因发生甲基化， 而非肿瘤 患者中， ５ 种肿瘤相关基因无一例发生甲基化 ， 只有 ３ 种肿瘤相关基 因 Ｃ Ｄ Ｈ１ ， Ｒ Ａ Ｓ Ｓ Ｆ Ｉ Ａ， Ａ Ｐ Ｃ基因显