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黄酮类化合物的检识与结构测定

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6.7-黄酮类化合物 -检识技术.

6.7-黄酮类化合物 -检识技术.

（1）还原反应
②四氢硼钠反应
操作：样品 /甲醇 + NaBH4的甲醇液
1分钟+数滴浓HCl
显色
现象：二氢黄酮、二氢黄酮醇 红~紫红 其它黄酮类 （ -） 鉴别意义：此反应可用于二氢黄酮类、二氢黄酮醇类与 其他黄酮类化合物的鉴别。其他黄酮类均无此现象。
（2）金属盐类的络合反应
可以发生金属盐类络合反应的基团：
OH HO O OCH 3 OH
OH H
+
HO
OH
OCH 3
Байду номын сангаас
OH
O
OH
O
②氨熏后能使黄酮、黄酮醇类转为亮黄色，紫外光下欢察更为 明显。氨熏放置后，颜色因氨挥发而褪色，故变色是可逆的； 碳酸钠显色的颜色较稳定。 ③ 具有邻二酚羟基结构的黄酮在碱液中由黄-棕色絮状沉淀。
（4）硼酸显色反应
黄酮类化合物分子中有羟基结构的存在时， 在酸性条件下与硼酸反应生成亮黄色。
仍显黄色
有3-OH
显著褪色
无3-OH，有5-OH
（2）金属盐类的络合反应
③ 醋酸镁反应 操作：在滤纸上滴加样品液，喷以醋酸镁的甲醇液，加热干 燥后观察纸班点现象。
现象：二氢黄酮(醇)：天蓝色荧光 异黄酮、黄酮(醇) ：黄-橙黄-褐色荧光 鉴别意义：用于二氢黄酮、二氢黄酮醇类与其他黄酮类化合物 的区别检识。
（2）金属盐类的络合反应
④ 氨性氯化锶反应
操作：将样品的甲醇液置小试管中，加入 3滴 0.01mol/L氯化锶甲醇液，再加3滴已用氨蒸气饱 和的甲醇溶液，
现象：具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物: 绿～棕色及至黑色沉淀。
鉴别意义：具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物

第五章-黄酮类化合物(1)

第五章-黄酮类化合物(1)

第三节 提取分离方法
答案：
1. 聚酰胺柱色谱洗脱顺序：由先到后 D，E，C，B，A
2. 用硅胶柱色谱洗脱顺序：由先到后 A，B，C，D，E
第三节 提取分离方法
3）葡聚糖凝胶色谱
常用型号： Sephadex-G（适用于水溶性成分分离） Sephadex-LH20 （可用于亲脂性成分分离 ）
• 机理： 分离游离黄酮（苷元）－－靠吸附作用。吸附程
第三节 提取分离方法
习题：下列黄酮化合物， （1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱， （2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，
分别写出洗脱顺序
HO
O
OH HO
O
OH OH
OH O A
Rha-GlcO
O
OH O B
O O Rha-GlcO
GlcO
O
OH O C
OH
O
OH
OH OH
OH O D
OH O E
O O
OH O
2%ZrOCl2
O
OO Zr
Cl
O H2O
O
2%枸橼酸
褪色
OH O
O O
Zr O
不退色
Cl H2O
黄绿色络合物
3-OH，4-酮基络合物的稳定性5-OH，4-酮基络合物（仅二氢黄酮醇除外）
第二节 理化性质与颜色反应
（2）铝盐
（3）铅盐
可用于定性或定量分析
*醋酸铅（中性）：邻二酚、3-OH和4-酮基好或5-OH 和4-酮 碱式醋酸铅：一般酚羟基均可
多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化 合物显橙红~紫红色，少数显紫~蓝色。查耳酮、 橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。

天然药物化学-黄酮类化合物

天然药物化学-黄酮类化合物

O
Cl H2O
O
OH
在浓硫酸中生成的洋盐常表现特殊的颜色，可 用于鉴别。 黄酮、黄酮醇——黄~橙色，并有荧光
二氢黄酮——橙红〔冷〕、紫红〔热〕 查耳酮——橙红~洋红
第三十六页，共一百一十一页。
四、显色反响 (一)复原反响
1. 盐酸-镁粉〔盐酸-锌粉〕反响——鉴定 黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇——〔＋〕
OH
H OH
O 邻羟基查耳酮
第十六页，共一百一十一页。
O
O 二氢黄酮
HO
OH
HO glc O O
OH
红花苷
HO
OH
OH
glc O O
梨根苷
第十七页，共一百一十一页。
6.异黄酮类与二氢异黄酮类
结构特点
➢母核为3-苯基色原酮的结构，即B环连接在C环的3位上
➢异黄酮的2、3位被氢化 O 2
8
7
A
6
5
1
第五页，共一百一十一页。
〔二〕结构类型
根据B环连接位置〔2位或3位〕
C环氧化程度〔包括2，3位是否存在双键；4位
有无－C＝O〕
C环是否成环〔1，2位是否开环〕
将黄酮类化合物分为以下七大类。
1 黄酮和黄酮醇
2 二氢黄酮和二氢黄酮醇
3 异黄酮和二氢异黄酮醇
4 查耳酮和二氢查耳酮
5 橙酮类
8
6 花色素和黄烷醇类 7 其他
11．双苯吡酮类
根本母核由苯环与色原酮的２，3位骈合而成
O OH
8
HO 7
1 2
HO 6 5
O 4 3 OH glc
异 芒 果 素 (isomengiferin)
石韦中的异芒果素具有止咳祛痰的成效。

5.4黄酮类化合物的检识与结构鉴定

5.4黄酮类化合物的检识与结构鉴定

第四节目前主要采用的方法与对照品或与文献对照PC或TLC得到的Rf 分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱解析样品及其衍生物的NMR谱进行MS测定一、色谱法的应用1.纸色谱（PC）：双向色谱：用于分离黄酮类及其苷的混合物第一相：醇性展开剂（分配作用）n-BuOH-HOAc-H2O (4:1:5上层,BAW)t-BuOH-HOAc-H2O (3:1:1,TBA) Rf: 苷元>单糖苷>双糖苷第二相：水或水性展开剂（吸附作用）2%～6% HOAc、3%NaCl、HOAc-浓HCl-H2O (30:3:10)Rf: a.苷元在原点附近，糖链越长，Rf 越大b.苷元：黄酮（醇）、查尔酮<二氢黄酮（醇）2.硅胶薄层色谱（TLC）：用于鉴定弱极性黄酮类化合物较好。

黄酮苷元展开系统：甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5:4:1）-----常用苯-甲醇（95:5）苯-甲醇-醋酸（35:5:5）氯仿-甲醇（85:15，70:5）黄酮衍生物（甲醚化或乙酰化）展开系统：苯-丙酮（9:1）苯-乙酸乙酯（75:25）3.聚酰胺薄层色谱：主要用于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。

常用展开剂：乙醇-水（3:2）水-乙醇-乙酰丙酮（4:2:1）水-乙醇-甲酸-乙酰丙酮（5:1.5:1:0.5）水饱和的正丁醇-醋酸（100:1，100:2）丙酮-水（1:1）丙酮-95%乙醇-水（2:1:2）二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用一般程序：测定样品在甲醇溶液中的UV及可见光谱；测定样品在甲醇溶液中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。

常用诊断试剂:NaOMe, NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl1.黄酮类化合物在甲醇中的（1）黄酮及黄酮醇ⅡⅠ主讲教师：朱宇红天然药物化学（2）查耳酮及橙酮ⅠⅡ（3）异黄酮及二氢黄酮ⅡⅠ2.黄酮（醇）加入诊断试剂后的（2）醋酸钠（（3）（4）（5）3-OH, 5-OH二、黄酮类化合物OO76OH5HO8（1）A 环上芳氢（6-H ：δ 5.7～8-H ：δ 5.7～（1）HO8765A环上的芳氢5-H：δ 7.96-H：δ 6.7（2）H-3’,5’ 较为高场）～7.9（d, J≈8.5～7.1（d, J≈8.5 2,,3,,45,6OR2,,3,,45,6OROR （2）（d, J≈8.5 ）（d, J≈2.5 ）（3）（4）糖上的质子化合物糖上的H-1’’ 黄酮醇3-O-葡萄糖苷 5.70-6.00黄酮醇7-O-葡萄糖苷 4.80-5.20黄酮醇4'-O-葡萄糖苷黄酮醇5-O-葡萄糖苷黄酮醇6及8-C-糖苷黄酮醇3-O-鼠李糖苷 5.00-5.10二氢黄酮醇3-O-葡萄糖苷 4.10-4.30二氢黄酮醇3-O-鼠李糖苷 4.00-4.20三、黄酮类化合物四、黄酮类化合物五、结构鉴定例题：1H-NMR (DMSO-。

中药化学-6第六章--黄酮类化合物

中药化学-6第六章--黄酮类化合物

红色（pH <7） 紫色（pH= 8.5） 蓝色（pH>8.5）
OO
++
OO
无
二氢黄酮 二氢黄酮
二氢查耳 黄烷醇类 异黄酮（无或微黄色）
二氢异黄酮
二．旋光性：
旋光性 取决于
不对称碳原子的有无
有
无
所有黄酮苷（糖） 游离黄酮 二氢黄酮 二氢黄酮醇 二氢异黄酮 黄烷醇类
O2*
O
（2-位）
O* *
OH O
TLC、PPC
5．与五氯化锑反应
五氯化锑 (SdCl5)： 查耳酮特征性显色反应 (红或紫红色沉淀) 黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。
6．其他显色反应
Gibbˊs反应：酚羟基对位活泼质子的特征（蓝 或蓝绿色）
第三节 黄酮类化合物的提取、分离 一．提取方法 —— 溶剂法
溶剂法 关键 溶剂的选择 选择依据 黄酮类成分的存在状态（游离、苷）及溶解性
五．显色反应
1．还原显色反应
反应类型
鉴别特征
鉴别意义
备注
盐酸-镁粉 黄酮、二氢黄酮、 红~紫红 黄酮类特征性 假阳性
反应
黄酮醇、二氢黄酮醇 红~紫红 鉴别反应
（花色素
）
（最常用）
查耳酮、橙酮、 （-）
儿茶素类、异黄酮 （-）
四氢硼钠 还原反应
二氢黄酮、二氢黄酮醇 红~紫红 二氢黄酮类特有
其它黄酮类
23 4
HO
5'
HO
65
OH
OH
6'
glc O O
O
红花苷
二氢查耳酮（+）儿茶素
OH
HO
OH
OH

第五章黄酮类化合物

第五章黄酮类化合物

第五章黄酮类化合物第五章黄酮类化合物⽬的要求：1．掌握黄酮类化合物的结构类型，了解其⽣物活性。

2．掌握黄酮类化合物的理化性质及不同类型的化学鉴别⽅法。

3．掌握黄酮类化合物的提取与分离⽅法和检识⽅法。

4．掌握各种光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应⽤。

第⼀节概述黄酮类化合物多具有颜⾊，在植物体内⼤部分与糖结合成甙，⼀部分以游离形式存在。

黄酮类化合物⼴泛分布于植物界中，⽽且⽣理活性多种多样，引起了国内外的⼴泛重视，研究进展很快。

仅截⽌到1974年为⽌，国内外已发表的黄酮类化合物共1674个（主要是天然黄酮类，也有少部分为合成品，其中甙元902个，甙722个），并以黄酮醇类最为常见，约占总数的三分之⼀，其次为黄酮类，占总数的四分之⼀以上，其余则较少见。

⾄于双黄酮类多局限分布于裸⼦植物，尤其松柏纲，银杏纲和凤尾纲等植物中。

⾄1980年，黄酮类化合物总数已达到2721个。

⼀、基本结构和分类（⼀）基本结构以前，黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核2-苯基⾊原酮(2-phenyl-chromone)类化合物，现在则是泛指两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结⽽成的⼀系列化合物。

黄酮类化合物的苷元的结构类型根据三碳链氧化程度、B环（苯基）连接位置（2-位或3-位）以及三碳链是否构成环状分为下列类型：１．黄酮类（flavones）⽊犀草素（luteolin），存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作⽤。

黄芩为清热解毒类中药，抗菌成分主要有黄芩苷(baicalin)、次黄芩素(wogonin)等。

２．黄酮醇类（flavonols）槲⽪素(quercetin)具有抗炎、⽌咳祛痰等作⽤。

槲⽪素⽚⽤于治疗⽀⽓管炎。

此外还有降低⾎压、增强⽑细⾎管抵抗⼒、减少⽑细⾎管脆性、降⾎脂、扩张冠状动脉、增加冠脉⾎流量等作⽤。

芦丁(rutin)是槲⽪素的３－O 芸⾹糖苷。

⽤于治疗⽑细管脆弱引起的出⾎病，并⽤作⾼⾎压的辅助治疗剂。

6.7-黄酮类化合物 -检识技术.


（2）金属盐类的络合反应
① 三氯化铝反应：
操作方法 ：在滤纸上滴加样品液，再滴加1%三 氯化铝乙醇溶液，通过纸斑点反应观察现象。 现象：大多数黄酮显黄色并有荧光。 例外 4'-OH或7，4'-二OH黄酮醇显天蓝色荧光。 鉴别意义：黄酮类化合物的定性定量分析。
（2）金属盐类的络合反应
② 锆盐—枸橼酸反应
1—2分钟
显色
现象：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）： 显橙红～紫 红色；查耳酮、橙酮、儿茶素： （—） 阴性 注意 查耳酮、橙酮、儿茶素类则不显反应；异黄酮除少数 例外，均不显色； 花色素在浓盐酸中也会发生色变，须先作空白对照实 验。
（1）还原反应
②四氢硼钠反应
操作：样品 /甲醇 + NaBH4的甲醇液
（2）金属盐类的络合反应
③ 醋酸镁反应 操作：在滤纸上滴加样品液，喷以醋酸镁的甲醇液，加热干 燥后观察纸班点现象。
现象：二氢黄酮(醇)：天蓝色荧光 异黄酮、黄酮(醇) ：黄-橙黄-褐色荧光 鉴别意义：用于二氢黄酮、二氢黄酮醇类与其他黄酮类化合物 的区别检识。
（2）金属盐类的络合反应
④ 氨性氯化锶反应
操作：将样品的甲醇液置小试管中，加入 3滴 0.01mol/L氯化锶甲醇液，再加3滴已用氨蒸气饱 和的甲醇溶液，
现象：具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物: 绿～棕色及至黑色沉淀。
鉴别意义：具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物
（3）碱性试剂反应
① 二氢黄酮类遇碱变成相应异构体查耳酮显橙或黄色
OH HO O OCH 3 OH
（2）纸色谱
【用途】适用于各种黄酮类化合物及其苷类的分析；
【展开剂】 黄酮类化合物一般宜用极性相对较小的“醇性”溶剂展开 ； 黄酮苷类宜用极性相对较大的“水性”展开剂 ； 黄酮苷和苷元混合物的分离和检识常用双向纸色谱法，第一向通 常用“醇性”展开剂展开，第二向用极性大的“水性”展开剂展 开。

黄酮类化合物


黄酮醇类(3OH) 异黄酮类
B 环 3’,4’ 有 OH ，带Ⅱ为 双峰（主峰 伴肩峰）
Ⅰ弱Ⅱ强B环上 有-OH, OCH3对 带I影响不大
二氢黄酮 （醇）
查耳酮类
220-270
（低强度）
查耳酮 2’-OH 使带 I 向红移 影响大
370-430(34个小峰)
橙酮类
2、加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义
1、A环质子
(1) 5,7-二羟基黄酮类
HO 6 OH O
HO H 8 Oቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
8
O
H-6 d H-8
J= 2.5 Hz δ ppm 5.70 ~ 6.90
6.30 ~ 6.50 6.00 ~ 6.20
H 6 OH O
5.90 ~ 6.10 5.75 ~ 5.95
黄酮、黄酮醇、异黄酮
二氢黄酮、二氢黄酮醇
甲氧基质子信号一般在：ppm 3.50 ~ 4.10 可通过NOE核磁共振技术及二维技术确定基位置
异黄酮 H-2 黄酮 H-3 苷中糖 端基质子
H-2',6' H-3',5'
H-5
甲氧基 乙酰氧基上的质子 质子 H-8 H-6 (7--OH) 芳香族 脂肪族 H-8 H-6 (5,7-二 -OH) 6 5 4 3 2 1
2. 取代图式的确定方法
3. O-糖苷中糖的连接位置
4. 双糖苷及低聚糖苷中苷键及 糖的连接顺序
2. 取代图式的确定方法 根据芳香碳的信号特征来确定取代图式。
129.0 126.3 118.1 133.7 125.2 125.7 131.6 131.8 163.2
O
156.3 124.0

天然产物化学全套 - 黄酮类化合物的检识与结构鉴定


B
6' 5'
OR'
~ 7.10, d, J ≈ 8.5 Hz ~ 7.90, d, J ≈ 2.5 Hz ~ 7.90, d, J ≈ 8.5, 2.5 Hz
25
第四节 分析：
检识与结构鉴定
二、紫外光谱
OH HO O OH
黄酮或3-O-苷 I=410-359=51nm，4'-OH
O-Glycosyl OH O
II=271-259=12nm，7-OH
I=387-359=28nm，B环有邻二OH AlCl3/HCl与AlCl3相比， I=402-433= -31nm, B环有邻二OH AlCl3/HCl与MeOH相比，
（但不包括5, 6-位）
O
注：与其在甲醇溶液中的光谱进行比较
19
第四节
检识与结构鉴定
二、紫外光谱
4、三氯化铝及三氯化铝/盐酸（AlCl3及AlCl3/HCl）

AlCl3可与下列结构系统络合，引起相应吸收带红移。
O O
OH
OH OH O O
OH

生成的铝络合物的相对稳定性顺序： 黄酮醇3-OH ＞ 黄酮5-OH ＞ 二氢黄酮5-OH ＞ 邻二酚OH ＞ 二氢黄酮醇3-OH
3
处理、喷2%AlCl3甲醇溶液(UV下检查)等
第四节
检识与结构鉴定
一、色谱法
（一）双向纸色谱法

第一向展开 —— 分配作用

展开剂：醇性溶剂，
如 n-BuOH-HOAc-H2O(BAW, 4:1:5上层)

Rf值：苷元＞单糖苷＞双糖苷， 一般苷元 > 0.7，苷 < 0.7
4

黄酮类化合物的检识与结构鉴定

-31邻二
+28,B邻二
HO O
OH OH
OR OH O
芦丁紫外图谱
芦丁甲醇液
1 359.50 2 257.50
芦丁甲醇钠
2 411.00 3 328.00 4 272.50
分析： 1. 3-OH是否取代，苷和苷元 2. 带Ⅰ红移52，强度增强，
示4′-OH 3. 328处有吸收，：示7-OH
游离
芦丁乙酸钠
2 384.50 0.494
4 273.50 0.751
芦丁甲醇液
1 359.50 2 257.50
分析：带Ⅱ红移16，示有-OH（5~20）， 由红移幅度示6或8位无含氧基取代
芦丁乙酸钠
2 384.50
0.494
4 273.50
0.751
芦丁乙酸钠/硼酸
2 379.00
0.609
4 261.50
水溶性大的Rf值较大。二氢黄酮>黄酮
用水性展开剂展开，对同一类型苷元的黄酮苷 其Rf值依次为：
双糖苷＞单糖苷＞苷元
色谱检识---纸色谱
2．醇性展开剂（如BAW）展开，分配色谱
如分子中羟基数目越多，极性越大，则Rf值越小；相 反，羟基数目越少，则Rf值越大。
用醇性展开剂展开，对同一类型苷元的黄酮苷其Rf值
三、红外光谱
1、 C=O 1700 cm-1 （强峰）
2、 醇 ： 酚：
OH OH
3350 cm-1 3300 cm-1
3、 苯环 ： 1600 cm-1 1500 cm-1
四、1H-NMR的应用： ——是分析黄酮结构的重要方法
测定黄酮溶剂：氘代溶剂
氘代溶剂
CDCl3 DMSO-d6：溶解范围广，信号分辨力强，可以
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黄酮类化合物的检识与结构测定
目前主要采用的方法有： ①与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或 hRf值（Rf100） ②分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金 属盐类试剂后得到的UV光谱 ③1H-NMR ④13C-NMR
⑤MS
一、层析在黄酮类鉴定中的作用
1. 纸层析(PPC) 苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性
H-2与H-3为反
O 2 H H O3 OH (2S, 3S)二氢黄酮
式双直立键，
J=11Hz H-2 δ 4.9 H-3 δ 4.3
3-OR苷化，供电子能力下降，两个氢的δ值升 高（向低场位移），可用于判断二氢黄酮醇苷中
糖的位置。
4. 查耳酮
d, 7.3-7.7, J=17Hz O d, 6.7-7.4, J=17Hz
OH O OH HO O O Al3+ O HO O OH
HO
OH
AlCl3
OH O O Al O
3+
HCl/H2O
O O Al3+
形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二 酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇 5-OH 在酸性条件下不与 AlCl3络合； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。 4）二者相减可检测邻二酚羟基。
182.5~182.7(s) 146.1~147.7(s)
136.0(d)
111.6~111.9(d) (=CH-)
黄酮醇类
橙酮类
2．3’, 4’-二氧取代黄酮类化合物
2' OR OR 6' 5'
（1）3’, 4’-二氧取代黄酮及 黄酮醇
H-5’ 6.7-7.1 d, J=8.5Hz
H-2’ 7.2 d, J=2.5Hz
H-6’ 7.9 dd, J=2.5, 8.5Hz
H-2’受C环负屏蔽和3’-OR屏蔽作用，H-6’ 也受C环负屏 蔽作用，而H-5’则仅4’-OR屏蔽作用。故由低场到高场的 顺序为：H-6’ H-2’ H-5’。
从中药柴胡中得到山奈苷，酸水解PPC 检查出鼠李糖，该苷及苷元的 UV[λmax(nm)]谱如下，解析结构。
山奈苷 带II 带I MeOH 265 345 NaOMe 265 388 Δ43，4’-OH AlCl3 275 399 AlCl3/HCl 275 399Δ54，5-OH AlCl3= AlCl3/HCl：无邻二酚羟基 NaOAc 265 399 带II无红移，无7-OH
山奈苷元 带II 带I MeOH 265 367 NaOMe 276 424（分解） 带I红移Δ57，且分解，3，4’-OH AlCl3 270 424 AlCl3/HCl 269 424 Δ54，5-OH AlCl3= AlCl3/HCl：无邻二酚羟基 NaOAc 276 387 带II红移11，7-OH
C=O
168.6~169.8(s)
C-2（或C-β）
137.8~140.7(d)
C-3（或C-α）
122.1~122.3(s)
归属
异橙酮类
160.5~163.2(s)
174.5~184.0(s) 149.8~155.4(d)
104.7~111.8(d)
122.3~125.9(s)
黄酮类
异黄酮类
147.9(s)
H HO HO 2'' OH H -D-glc H(a) OH O H(a) H3C 1'' OR HO HO H 2'' OH -L-rha H H O OR 1'' H(e) H(e)
2. 双糖苷类
末端糖上的 H-1’’’ 因离黄酮母核较远，受到的负屏蔽
作用较小，因而叫H-1’’处于较高场的位置。
③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上
法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。
（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱
多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：
带 I 在 300-400nm 区间，由 B 环桂皮酰系统的 电子跃迁所引起；
O O
O
O
带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统 的电子跃迁所引起。
5.橙酮
O CH O s, 6.5-6.7 6.37-6.94 (DMSO-d6)
（四） 糖上的质子
1. 单糖苷类
糖与苷元相连时，糖上1˝-H与其它 H比较，一 般位于较低磁场区。因-OR (R=苷元) 不表现供 电子，仅表现吸电子的诱导作用，端基H受两 个O的诱导，处于低场（4.0-6.0）
7-OH
加入试剂
带II
带I
说明
+NaOAc/ H3BO3
510
有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)
12-30 60 50-60 35-55 17-20 0 30-40 50-65 0 B环有邻二酚羟基 有3-OH 有3,5-二OH 有5-OH，无3-OH 有6-OR 无3-OH, 5-OH或6-OR存在 B环有邻二酚羟基 A,B环皆有邻二酚羟基 A,B环皆无邻二酚羟基
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH
+NaOMe 或 +NaOH
带 I ， II 随 加 NaOMe 时间延长，逐渐衰减 320-330 nm有小峰
有 3, 4’-OH 或 3, 3’, 4’OH（衰减更快）
7-OH
+NaOAc (未熔溶)
5-20
有 3-OH, 4’OH 也 发 生 红移，但意 义不大
H-5较H-6、H-8低场，是由于羰基的负屏蔽效应的
影响。
H-6、H-8较5, 7-二OH黄酮低场，且相互位置可能 颠倒。
（二） B环质子 δ6.5-8
1．4’-氧取代黄酮类化合物
2' 3' OR 6' 5' H-3’, 5’ 6.5-7.1, d, J=8.5Hz H-2’, 6’ 7.1-8.1, d, J=8.5Hz 由于C环对H-2’, 6’的负屏蔽作用大于对H-3’, 5’， 且H-3’, 5’受4’-OR的屏蔽作用，故前者较低场； C环氧化程度越高，H-2’, 6’处于越低场的位置。
溶剂，如BAW系统（正丁醇： 醋酸：水4：1：
5 上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋 酸：水（3：6：1） 苷元则多采用醇性溶剂。 花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。
2. 薄层层析(TLC)
１）硅胶薄层
用于弱极性黄酮较好。
常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）；苯：甲醇（95： 5）或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。
1）葡萄糖位于不同位置时端基H化学 位移的区别： C3-OR 1˝-H的 值约为5.8 1˝-H的 值约为4.8-5.2
C-5, C-6, C-7, C-4’-OR
2) 葡萄糖苷与鼠李糖苷的区别
黄酮醇3-O-葡萄糖苷端基H 5.8, d, J=7Hz （二直立键偶合系统） 黄酮醇3-O-鼠李糖苷端基H 5.0-5.1, d, J=2Hz （二平伏键偶合系统） 另外鼠李糖上的C-CH3: 0.8-1.2, d, J=6.5Hz
rhaO
O
OH Orha
OH
O
山奈苷元与山奈苷相比：山奈苷的带I(345nm) 比山奈苷元的带I(367nm)紫移22nm，说明3OH苷化。
山奈苷元与山奈苷的分析结果表明：苷元比苷
多了3和7羟基，表明山奈苷是3，7位鼠李糖苷。
三、1H-NMR
• 常用溶剂：氘代氯仿（ CDDl3 ），氘代 二 甲 基 亚 砜 （ DMSO-d6 ） ， 氘 代 吡 啶 （C5D5N）。 • 也可将黄酮类化合物作成三甲基硅醚衍 生物溶于四氯化碳中进行测定。
但有时也会发生H-2’和H-6’重叠的现象。
（2）3’, 4’-二氧取代异黄酮、二氢黄酮及二氢黄
酮醇
H-2’, 5’, 6’常作为一个复杂多重峰（通常为两 组峰） 6.7-7.1
2'
OR OR
6'
5'
3．3’, 4’,5’-三氧取代黄酮类化合物 OR1 2'
OR2 6' OR3
若R1=R2=R3=H，则H-2’, 6’为单峰， 6.7-7.5
②供试后的样品用含水甲醇处理可回收；
③三甲基硅醚衍生物可很方便的转变成乙酰衍生 物或甲醚衍生物。
（一）A环质子
1．5, 7-二OH黄酮
HO 6 OH O 8 O H-6, H-8, 5.7-6.9, J=2.5Hz H-6较H-8高场
2．7-OH黄酮
HO 6 5 O 8 O H-5 7.7-8.2 (d, J=9Hz) H-6 6.4-7.1(dd, J=9, 2.5Hz) H-8 6.8-7.0 (d, J=2.5Hz)
若上述条件不成立，则H-2’, 6’分别为二重峰 （J=2Hz）
（三） C环质子
1. 黄酮类
O 3 O H H-3, 6.3
2. 异黄酮类
O 2 H 3 O
H-2 位于羰基 位，同时受羰基和苯环的负屏蔽作 用，且通过碳与氧相连，故较一般芳香质子低场， δ7.6-7.8。
若用DMSO-d6作溶剂，则δ8.5-8.7。
２）聚酰胺层析
适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。 常用展开系统：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（1：1） 等。 显色剂：紫外光； 2% 三氯化铝甲醇液； 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。 1%FeCl3 /
二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用
可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含
有羟基。 一般程序： ①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型； ②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测 UV谱 和可见光谱以了解3, 5, 7, 3’, 4’有无羟基及邻二酚 羟基；