大蒜茎尖离体培养实验设计

大蒜根尖细胞多倍体观察与制片一．实验目的1.通过实验掌握人工诱导多倍体植物的方法和技术,观察多倍体的特点2.利用染色体分析的方法对多倍体细胞做出准确判断。

二.实验原理物种的基本特征之一:生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这些染色体组成染色体组，或称基因组。

三.实验步骤1.取材:取大蒜(洋葱，蚕豆，小麦等)发根至0.5-1cm然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养24小时，待观察到根部有膨大时取出固定，与在水中培养的材料做对照2.固定:在卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中保存或备用3.解离：植物的分生组织如根尖、茎尖等需要经过处理以便除去细胞之间的果胶层并使细胞壁软化，经解离的组织才能使压片步骤顺利进行。

解离常用酸解法和酶解法。

①酸解法:固定后的材料用清水洗漆后用1MHCl在60°C水浴中恒温处理5-10min.在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不是分散。

若解离太过，在下一步处理材料的由于材料过软而易丢失。

然后水洗3次。

②酶解法：用10-20g/L的果胶酶，或与10-50g/L的纤维素酶混合使用4.染色：切取根尖分生组织区，用改良苯酚品红染色15min5.压片:将染色后的材料盖上盖玻片,在盖玻片上盖上两层吸水纸，用一个双面刀片,插到盖片与载片之间的一角，用左手食指压紧盖片,防止滑动，用右手持解剖针，用针柄轻敲盖片，使材料均匀分散开。

然后将刀片轻轻撤出，再用针柄重敲盖片，使细胞分散压平。

一张制片好的细胞染色体制片至少符合如下条件:①在一张制片中应有较多的中期分裂相。

②染色体分散而不重叠。

③染色体不断裂、扭曲、有溢痕，随体清晰④染色体着色较深而细胞质不着色或着色很浅，背景清晰无过多杂质。

选择中期分裂相好的细胞观察,通过观察和计数中期染色体数目,确定细胞类型。

五.实验结果六．结果分析所制的片子好多细胞未破裂，有的染色体溢出，应该是压片不好所致，这样就导致所观察的染色体条数不对。

大蒜根尖有丝分裂观察及多倍体诱导生命科学学院 141270054 赵子杰一．实验目的1.通过大蒜根尖的制片，初步学会植物根尖压片法的基本技术。

2.通过大蒜根尖制片，了解细胞分裂的整个过程及染色体在各个时期的变化。

3.学会并掌握染色体简易永久片的制片技术。

4.了解和掌握秋水仙素溶液诱导多倍体的一般方法。

5.了解植物多倍体的一般形态特征及多倍体的细胞学特点。

6.对比进行多倍体诱导前后的大蒜根尖，理解四倍体与二倍体的区别。

7.通过对于有丝分裂相的观察，统计大蒜染色体数目，加深对于细胞有丝分裂过程的理解。

二．实验原理1.有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。

观察有丝分裂，重点在于观察染色体的形态。

在细胞分裂前期，细胞核解体，染色质凝聚显现出染色体的形态；在前中期，染色体散乱地分布于细胞的中部；在中期，纺锤体形成，染色体受到微管的牵引，着丝粒成行排列于赤道板上；在后期，染色体受到动粒微管的牵引，向细胞两级运动；在末期，染色体重新解螺旋，细胞核重新形成。

细胞染色体过程示意图见图1.图1：细胞有丝分裂过程示意图大蒜根尖的整体结构如图2，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。

图2：大蒜根尖结构示意图3.多倍体诱导多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。

图3：秋水仙素的化学结构式三．实验材料与器材1.实验材料及试剂：大蒜，0.02%秋水仙素，0.2%秋水仙素，甲醇，冰醋酸固定液，70%酒精，95%酒精，醋酸洋红染液，1NHCL溶液。

第1篇一、实验目的1. 掌握茎段培养的方法和技术，理解茎段培养形成幼苗的基本原理。

2. 学习并操作茎尖剥离的技巧，认识茎尖生长点的形态特征。

3. 了解不同植物激素对茎段生长的影响。

二、实验材料与仪器1. 材料：某植物幼嫩茎段、茎尖、愈伤组织诱导培养基、再生培养基、植物激素（生长素、赤霉素等）。

2. 仪器：无菌操作台、剪刀、镊子、解剖针、显微镜、培养箱、天平、酒精灯、高压灭菌锅等。

三、实验方法1. 茎段培养（1）选取健康的某植物幼嫩茎段，剪成约1-2cm长的切段。

（2）将切段放入75%酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。

（3）将切段接种到愈伤组织诱导培养基中，置于培养箱中培养。

（4）观察并记录愈伤组织的形成和生长情况。

2. 茎尖剥离（1）选取健康的某植物茎尖，用解剖针剥离出茎尖生长点。

（2）将茎尖生长点放入75%酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。

（3）将茎尖生长点接种到再生培养基中，置于培养箱中培养。

（4）观察并记录茎尖生长点的生长情况。

3. 植物激素对茎段生长的影响（1）将茎段接种到含有不同浓度生长素和赤霉素的培养基中。

（2）置于培养箱中培养，观察并记录茎段生长情况。

四、实验结果与分析1. 茎段培养结果经过一段时间的培养，愈伤组织诱导培养基中的切段逐渐形成愈伤组织，并逐渐生长。

2. 茎尖剥离结果经过一段时间的培养，再生培养基中的茎尖生长点逐渐生长，形成新的植株。

3. 植物激素对茎段生长的影响（1）生长素对茎段生长的影响：低浓度生长素能促进茎段生长，高浓度生长素则抑制茎段生长。

（2）赤霉素对茎段生长的影响：赤霉素能促进茎段生长，其促进作用随浓度增加而增强。

五、实验结论1. 通过茎段培养实验，掌握了茎段培养的方法和技术，理解了茎段培养形成幼苗的基本原理。

2. 通过茎尖剥离实验，学习了茎尖剥离的技巧，认识了茎尖生长点的形态特征。

3. 通过植物激素对茎段生长的影响实验，了解了生长素和赤霉素对茎段生长的促进作用及其浓度依赖性。

中国农业科学2014,47(15):3025-3033Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.15.012秋水仙素对大蒜茎尖试管苗四倍体的诱导孔素萍1，2，曹齐卫2，孙敬强2，刘波2，徐坤1（1山东农业大学园艺科学与工程学院/农业部黄淮地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，山东泰安271018；2山东省农业科学院蔬菜花卉研究所/山东省设施蔬菜生物学重点实验室，济南250100）摘要：【目的】大蒜为无性繁殖作物，难以采用常规育种方法选育新品种，而化学诱变作为种质创制的重要方法之一，在一些作物上获得了较好的效果。

探讨秋水仙素对大蒜茎尖组培试管苗多倍体的诱变效应，旨在为创新大蒜种质提供理论依据和技术方法。

【方法】选用山东‘苍山蒲棵’、四川‘正月早’和‘新疆紫皮’3个生态区域的大蒜品种，鳞茎经自然晾干通过休眠后，取鳞芽茎尖为外植体接种到不同处理的培养基上，采用二次饱和-D最优设计方法，研究秋水仙素不同浓度及处理时间对大蒜茎尖试管苗成苗率及染色体加倍率的影响，并建立相关回归模型；通过对回归模型进行解析，确定诱变大蒜四倍体的优化方案；采用流式细胞仪检测幼叶和根尖压片染色体计数相结合的方法进行染色体倍性鉴定。

【结果】利用流式细胞仪检测的四倍体大蒜植株叶片DNA相对含量是二倍体对照大蒜‘苍山蒲棵’的2倍；通过染色体计数法鉴定二倍体植株根尖染色体为2n=2x=16，而四倍体植株染色体为2n=4x=32。

在秋水仙素处理大蒜茎尖诱变四倍体过程中，随秋水仙素处理浓度的升高及时间的延长，3个大蒜品种试管苗成苗率均逐渐降低，且处理浓度的影响大于处理时间;品种间成苗率存在显著差异，以‘正月早’较高，‘新疆紫皮’次之，‘苍山蒲棵’较低，其处理间平均成苗率分别为48.69%、46.73%和41.83%。

秋水仙素对大蒜四倍体的诱变效应以处理浓度大于处理时间，不同大蒜品种对秋水仙素的反应存在显著差异，虽然‘苍山蒲棵’、‘正月早’与‘新疆紫皮’的最高四倍体诱导率分别达15.69%、15.69%和23.53%，但大蒜四倍体平均诱导率则以‘正月早’最高，‘苍山蒲棵’次之，‘新疆紫皮’最低，分别为9.15%、7.84%和6.53%。

第1篇一、实验目的1. 观察大蒜根尖细胞有丝分裂的过程。

2. 理解细胞周期中各阶段的特点。

3. 掌握制作临时装片和显微镜观察的基本技能。

二、实验原理细胞有丝分裂是生物体细胞增殖的重要方式，分为间期、前期、中期、后期和末期五个阶段。

本实验通过观察大蒜根尖细胞的有丝分裂，了解细胞周期的变化和各个阶段的特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜大蒜头、盐酸、酒精、碘液、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、显微镜、酒精灯、滴管等。

2. 仪器：光学显微镜、显微镜载物台、显微镜镜筒、显微镜目镜、显微镜物镜等。

四、实验步骤1. 准备根尖：取新鲜大蒜头，用解剖针切下根尖约2-3毫米，放入盛有盐酸的试管中，在室温下浸泡10-15分钟。

2. 漂洗：将浸泡后的根尖用蒸馏水冲洗干净，去除盐酸。

3. 解离：将冲洗干净的根尖放入盛有盐酸和酒精混合液（1：1）的试管中，在室温下解离10-15分钟。

4. 漂洗：将解离后的根尖用蒸馏水冲洗干净。

5. 压片：将冲洗干净的根尖放在载玻片上，用解剖针轻轻压扁，盖上盖玻片。

6. 染色：在盖玻片边缘滴加碘液，用吸水纸吸取多余的碘液。

7. 观察：将载玻片置于显微镜下，观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段。

五、实验结果与分析1. 间期：细胞核内染色质细长，呈丝状，细胞质均匀，无明显变化。

2. 前期：细胞核内染色质逐渐凝缩成染色体，染色体呈细长条状，细胞质无明显变化。

3. 中期：染色体排列在细胞中央，呈放射状，细胞质无明显变化。

4. 后期：染色体逐渐缩短变粗，向细胞两端移动，细胞质开始分裂。

5. 末期：染色体到达细胞两端，细胞质分裂成两个子细胞。

六、实验结论通过观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段，我们可以了解到细胞周期中各阶段的特点。

本实验成功观察到了大蒜根尖细胞有丝分裂的各个阶段，为后续生物学研究提供了基础。

七、实验讨论1. 实验过程中，根尖浸泡在盐酸中，有助于软化细胞壁，便于观察。

2. 解离过程中，盐酸和酒精混合液的作用是使细胞分离，便于观察。

实验名称：茎尖培养实验课程名称：植物组织培养学学院：生命科学学院专业班级：植物科学专业姓名：[你的姓名]小组成员：[小组成员姓名]日期：[实验日期]指导老师：[指导老师姓名]一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本原理和方法。

2. 熟悉无菌操作技术，提高实验操作技能。

3. 观察茎尖在培养基上的生长和分化过程，了解植物细胞全能性及再生机制。

4. 分析影响茎尖培养的因素，为植物繁殖和育种提供理论依据。

二、实验原理1. 植物组织培养技术：通过在无菌条件下，将植物器官、组织或细胞等在人工培养基上进行培养，使其再生出完整植株的过程。

2. 茎尖培养：利用茎尖细胞的全能性，将其接种到含有植物激素的培养基上，诱导其分化成完整植株。

3. 植物激素：植物激素在植物生长和发育过程中起着重要作用，如生长素、细胞分裂素等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物茎尖、无菌水、70%酒精、无菌滤纸、无菌手术刀、镊子、培养皿、培养箱、显微镜等。

2. 试剂：MS培养基、生长素、细胞分裂素、琼脂、葡萄糖等。

四、实验步骤1. 材料准备：选取新鲜植物茎尖，用70%酒精消毒后，用无菌滤纸吸干水分。

2. 茎尖接种：将消毒后的茎尖用无菌手术刀切成约0.5cm长的小段，接种到含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中。

3. 培养条件：将接种后的培养基放入培养箱中，保持温度25℃、光照12小时/天。

4. 观察记录：定期观察茎尖的生长和分化情况，记录生长速度、叶片颜色、根系发育等。

5. 数据分析：对实验数据进行统计分析，分析不同处理对茎尖培养的影响。

五、实验结果与分析1. 茎尖生长：接种后3-5天，茎尖开始生长，出现明显的芽点；接种后7-10天，芽点逐渐增多，茎尖高度达到1-2cm。

2. 茎尖分化：接种后10-15天，茎尖分化出叶片，叶片颜色逐渐变绿；接种后20-25天，茎尖分化出根系，根系发达。

3. 影响因素分析：生长素和细胞分裂素浓度对茎尖培养有显著影响。

利用大蒜根尖制作植物细胞有丝分裂装片付小艳，四川省德阳中学校(618000)中学生物教学，1999年第2期在教学实践中作者曾选用过许多材料(洋葱、水稻、葱、大蒜等)做“植物细胞有丝分裂”实验，通过大量实验证明大蒜是作为该实验研究的好材料。

利用自己动手制作的“大蒜根尖纵切片”永久切片，让学生观察植物细胞有丝分裂效果很好。

实验具体操作如下：1.材料大蒜根尖。

2.用具显微镜、解剖盘、草纸、载玻片、盖玻片、刀片或切片机。

3.药品离析液、醋酸洋红或醋酸地衣红、铁苏木精甲液(媒染剂)、酒精、桑弗利斯固定液。

4.方法步骤(1)幼根培养。

选取新鲜饱满的蒜瓣，剥去膜质鳞被，用细竹签将蒜瓣穿成串，放在盛有水的解剖盘内，使蒜瓣的基部与吸透水的草纸接触，并用1层～2层吸水纸盖上，置于温暖处(24℃～25℃)或培养箱中，保持一定的水分，3天～5天后在蒜瓣基部则可长出洁白的幼根。

(2)掌握取材时间。

待根生长到1cm～1.5cm时，切取3个～5个根尖，放入浓盐酸与95%的酒精等量混合液中，离析5min～6min后，用蒸馏水清洗数次，置于干净的载玻片上，用刀片切去根冠和伸长区，留下分生组织，将其纵切成数片，用1滴～2滴醋酸洋红(或醋酸地衣红)染色5min，盖上盖玻片，用拇指腹部对准盖玻片下的材料轻压，使其分散成粉状，置于显微镜下观察。

经过反复实验，认为在室温24℃时，中午11时～13时取材较好，尤其在11时与12时之间分裂期细胞最多。

(3)材料的处理与固定。

在根尖细胞分裂旺盛期将培养的大蒜根尖全部切下，投入蒸馏水内稍加摇动使其下沉并放入0℃～5℃的冰箱内低温处理30min后，用桑弗利斯固定液固定4h～6h，经流水冲洗6h～12h，以清除材料中的固定液。

(4)脱水与透明。

将材料经30%、50%、70%、85%、95%的各级酒精逐级脱水30min至1h(视材料在固定液中时间长短而定)，转入100%的1号、100%的2号酒精各脱水15min，再经过纯酒精与二甲苯等量混合液和纯二甲苯1号、2号各30min处理直至透明为止。

第1篇一、实验目的本实验旨在探究大蒜鳞茎在离体培养条件下的生长特性，为大蒜的繁殖和育种提供理论依据和技术支持。

二、实验材料1. 大蒜鳞茎：选用新鲜、无病虫害的白皮大蒜。

2. 无菌操作设备：超净工作台、无菌操作箱、无菌剪刀、无菌镊子、无菌培养皿等。

3. 培养基：MS培养基、植物激素、琼脂粉、蔗糖、活性炭等。

三、实验方法1. 外植体消毒与无菌系建立将新鲜的大蒜鳞茎剥去外皮，切取蒜瓣基部鳞茎盘，用无菌水冲洗干净。

将鳞茎盘浸泡在70%的乙醇中消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次。

将消毒后的鳞茎盘放入含有0.1%氯化汞的溶液中消毒5分钟，再用无菌水冲洗5次，以去除氯化汞残留。

2. 外植体切割与接种将消毒后的鳞茎盘用无菌剪刀切成0.5-1cm大小的小块，作为外植体。

将外植体接种到含有MS培养基、植物激素和琼脂粉的培养基上，每组接种10个外植体。

3. 培养条件将接种好的培养基放入培养箱中，培养条件如下：- 温度：25℃- 光照：光照时间12小时/天，光照强度2000lx- 湿度：相对湿度70%-80%4. 观察与记录定期观察大蒜鳞茎在培养过程中的生长状况，包括芽苗生长、生根情况等。

记录每个培养瓶中芽苗的数量、高度、生根情况等数据。

四、实验结果与分析1. 芽苗生长经过一段时间培养后，大部分外植体在培养基上形成了芽苗。

芽苗生长速度较快，随着培养时间的延长，芽苗数量逐渐增多，高度逐渐增加。

2. 生根情况在培养过程中，部分芽苗开始生根。

生根情况与外植体切割部位、植物激素的种类和浓度等因素有关。

一般来说，靠近鳞茎盘的外植体生根率较高。

3. 影响因素分析（1）外植体切割部位：靠近鳞茎盘的外植体生根率较高，这是因为鳞茎盘含有较多的生长素和细胞分裂素，有利于芽苗生长和生根。

（2）植物激素种类和浓度：在培养基中添加适量的植物激素，如生长素和细胞分裂素，可以促进芽苗生长和生根。

然而，植物激素的种类和浓度对芽苗生长和生根有显著影响。

实验结果表明，添加适量的生长素和细胞分裂素可以促进芽苗生长和生根。