下载文档原格式
.b ž激光扫描共聚焦显微镜( LSCM) 是随着光学、视频、计算机等技术的迅速发展而诞生的一种高科技产品。
它是在荧光ž显微镜成像基础上加装了激光扫描装置, 利用计算机进行图像处理, 使用紫外或可见光激发荧光探针, 从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像, 成为形态学﹑分子细胞生物学﹑神经科学﹑药理学﹑遗传学等领域新一代强有力的研究工具。
同时,激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具。
不仅可对活的或固定的细胞及组织进行无损伤的“光学切片”; 进行单标记或双标记细胞及组织标本的荧光定性定量分析; 还可用于活细胞生理信号, 离子含量的实时动态分析监测, 粘附细胞的分选, 细胞激光显微外科和光陷阱技术等。
可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。
- www 生物秀-专心做生物w ww .b b i o o .c o mIntroductionžLSCM 是一种高科技显微镜ž荧光显微镜成像为基础，加装了激光扫描装置, 计算机进行图像处理, 使用紫外或可见光激发荧光探针, 得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。
ž无损伤的“光学切片”ž细胞三维立体机构ž实时动态分析监测激光扫描共聚焦显微镜( LSCM) 是随着光学、视频、计算机等技术的迅速发展而诞生的一种高科技产品。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mž光学显微镜部分ž激光发射器ž扫描装置ž光检测器ž计算机系统( 包括数据采集, 处理, 转换, 应用软件)ž图像输出设备LSCM 的基本组成生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mLSCM 的原理激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源, 普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源, 标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。
而LSCM 以激光为光源, 激光具有单色性强﹑方向性好﹑高亮度﹑相干性好等优点, 可以避免普通显微镜的缺点。
激光共聚焦显微镜样品制备方法(二)——组织切片样品
边玮
【期刊名称】《电子显微学报》
【年(卷),期】2010(029)004
【摘要】应用激光共聚焦显微镜技术对荧光标记的组织切片样品进行三维观察成像是生物学研究的常规手段.本文主要介绍实验室制备用于激光共聚焦显微镜成像的冷冻组织切片及免疫荧光标记过程.
【总页数】4页(P399-402)
【作者】边玮
【作者单位】中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海,200031
【正文语种】中文
【中图分类】Q336;TG115.21+5.3
【相关文献】
1.火花源原子发射光谱法测定海绵钛样品及样品制备方法的影响 [J], 俞超;汪永喜;蒋增辉;曾次元
2.煤岩样品TEM超薄切片制备方法研究 [J], 于冰;周蕊;卢兆林;于红丽;路瑶
3.激光共聚焦显微镜样品制备方法(一)——细胞培养样品 [J], 余礼厚
4.动物源性成分鉴别的样品制备方法研究——应用于PCR及荧光定量PCR方法的样品制备 [J], 李洁;陆仲斐;童锐;李向伟;周凌
5.石蜡切片组织透射电镜样品制备方法的比较分析 [J], 黄远洁
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
激光扫描共聚焦显微镜技术Laser Scanning Confocal Microscope——基础篇李治国细胞的内在生活显微镜的发展史没有显微镜就不可能有细胞学诞生。
1590年，荷兰眼镜制造商J 和Z.Janssen 父子制作了第一台复式显微镜。
1665年，英国人Robert Hook首次描述了植物细胞(木栓，命名为cella 。
1680年，荷兰人A.van Leeuwenhoek成为皇家学会会员，他一生中制作了200多台显微镜和400多个镜头，用设计较好的显微镜观察了许多动植物的活细胞与原生动物。
Made by A.van Leeuwenhoek (1632-1723.Magnification ranges at 50-275x.显微镜的最重要参数——分辨力显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力（resolution ）有关。
分辨率是指区分开两个质点间的最小距离各种显微镜的分辨能力光学显微镜（light microscopy）0.2μm电子显微镜 (Electro microscopy 0.2nm扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope 0.2nm以下 1932年，德国人M.Knoll 和E.A.F.Ruska 发明电镜，1940年，美、德制造出分辨力为0.2nm 的商品电镜。
1981年，瑞士人G.Binnig 和H.RoherI 在IBM 苏黎世实验中心（Zurich Research Center）发明了扫描隧道显微镜而与电镜发明者Ruska 同获1986年度的诺贝尔物理学奖。
常用的光学显微镜（light microscopy普通光学显微镜暗视野显微镜相差显微镜偏光显微镜微分干涉显微镜荧光显微镜激光共焦扫描显微镜普通光学显微镜原理普通光学显微镜原理图1. 构成：①照明系统②光学放大系统③机械装置2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像。
免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。
虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。
在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。
1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。
它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。
在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。
随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。
接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。
2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。
它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。
不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。
在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。
而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。
在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。
通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。
把光学成像的分辨率提高了30%~40%，使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察生理信号及细胞形态的变化，成为形态学，分子生物学，神经科学，药理学，遗传学等领域中新一代的研究工具。
1激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）的原理从基本原理上讲,共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微镜,它对普通光镜从技术上作了以下几点改进:1．1用激光做光源因为激光的单色性非常好,光源波束的波长相同,从根本上消除了色差。
1．2采用共聚焦技术在物镜的焦平面上放置了一个当中带有小孔的挡板,将焦平面以外的杂散光挡住,消除了球差;并进一步消除了色差1．3采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的无数点,用十分细小的激光束(点光源)逐点逐行扫描成像,再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。
而传统的光镜是在场光源下一次成像的,标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍射光和散射光的干扰。
这两种图像的清晰度和精密度是无法相比的。
1．4用计算机采集和处理光信号,并利用光电倍增管放大信号图在共聚焦显微镜中,计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像,得到的图像是数字化的,可以在电脑中进行处理,再一次提高图像的清晰度。
而且利用了光电倍增管,可以将很微弱的信号放大,灵敏度大大提高。
由于综合利用了以上技术。
可以说ＬＳＣＭ是显微镜制作技术、光电技术、计算机技术的完美结合,是现代技术发展的必然产物。
2ＬＳＣＭ在生物医学研究中的应用目前,一台配置完备的ＬＳＣＭ在功能上已经完全能够取代以往的任何一种光学显微镜,它相当于多种制作精良的常用光学显微镜的有机组合,如倒置光学显微镜、紫外线显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜(ＰＨ)、微分干涉差显微镜(ＤＩＣ)等,因此被称为万能显微镜,通过它所得到的精细图像可使其他的显微镜图像无比逊色。
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。
把光学成像的分辨率提高了30%~40%，使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察生理信号及细胞形态的变化，成为形态学，分子生物学，神经科学，药理学，遗传学等领域中新一代的研究工具。
1 激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）的原理从基本原理上讲,共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微镜,它对普通光镜从技术上作了以下几点改进:1．1用激光做光源因为激光的单色性非常好,光源波束的波长相同,从根本上消除了色差。
1．2采用共聚焦技术在物镜的焦平面上放置了一个当中带有小孔的挡板,将焦平面以外的杂散光挡住,消除了球差;并进一步消除了色差1．3采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的无数点,用十分细小的激光束(点光源)逐点逐行扫描成像,再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。
而传统的光镜是在场光源下一次成像的,标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍射光和散射光的干扰。
这两种图像的清晰度和精密度是无法相比的。
1．4用计算机采集和处理光信号,并利用光电倍增管放大信号图在共聚焦显微镜中,计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像,得到的图像是数字化的,可以在电脑中进行处理,再一次提高图像的清晰度。
而且利用了光电倍增管,可以将很微弱的信号放大,灵敏度大大提高。
由于综合利用了以上技术。
可以说ＬＳＣＭ是显微镜制作技术、光电技术、计算机技术的完美结合,是现代技术发展的必然产物。
2 ＬＳＣＭ在生物医学研究中的应用目前,一台配置完备的ＬＳＣＭ在功能上已经完全能够取代以往的任何一种光学显微镜,它相当于多种制作精良的常用光学显微镜的有机组合,如倒置光学显微镜、紫外线显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜(ＰＨ)、微分干涉差显微镜(ＤＩＣ)等,因此被称为万能显微镜,通过它所得到的精细图像可使其他的显微镜图像无比逊色。
共聚焦制片方法共聚焦制片方法是一种在生物学和医学领域中广泛使用的技术，主要用于制作高分辨率、三维的样品图像。
其基本原理是利用激光束扫描样品，同时收集每个点的荧光信号，并通过对这些信号的精确分析，生成样品的三维图像。
下面将详细介绍共聚焦制片方法的基本原理、操作步骤和优缺点。
一、基本原理共聚焦制片方法基于共聚焦显微镜的原理，通过将激光束聚焦在样品上的某一特定点，激发该点的荧光。
然后收集该点的荧光信号，并将其传递给光电倍增管（PMT）进行检测。
由于激光束的聚焦点非常小，因此可以获得高分辨率的图像。
同时，通过对样品进行扫描，可以得到整个样品的图像。
二、操作步骤1.样品准备：选择适当的固定剂和染料，将样品固定在载玻片上，并进行染色。
2.扫描步骤：将样品放置在共聚焦显微镜下，调整焦距和光源，启动扫描程序。
扫描过程中，激光束会逐点扫描样品，同时收集每个点的荧光信号。
3.图像重建：通过对收集到的荧光信号进行分析和处理，可以重建出样品的三维图像。
三、优缺点1.优点：共聚焦制片方法具有高分辨率、高灵敏度和高轴向分辨率等优点。
它能够清晰地呈现出样品的细节和结构，适用于各种不同类型的样品，如细胞、组织、蛋白质等。
此外，共聚焦制片方法还可以进行多通道检测和定量分析，为研究提供了更多的信息。
2.缺点：共聚焦制片方法也存在一些缺点。
首先，由于激光束的聚焦点很小，因此需要逐点扫描样品，这使得扫描速度较慢。
其次，由于需要使用激光束和光电倍增管等昂贵的设备，因此共聚焦制片方法的成本较高。
此外，操作共聚焦显微镜需要一定的专业技能和经验，这也增加了使用难度。
最后，由于样品需要经过固定和染色等处理，可能会对样品的结构和活性产生影响。
四、应用领域共聚焦制片方法在生物学、医学、材料科学等领域中得到了广泛应用。
例如，在生物学中可以用于研究细胞结构和功能；在医学中可以用于诊断和治疗各种疾病；在材料科学中可以用于研究材料的微观结构和性能。
此外，共聚焦制片方法还可以用于制备高质量的荧光图像，用于科学研究、临床诊断和工业生产等领域。
本技术公开了一种适用于共聚焦显微镜的玻片结构，包括：中间玻片，所述中间玻片上设有若干第一通孔；盖玻片和载玻片，所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次层叠设置；弹性材料制成的密封圈，设于所述第一通孔内且厚度略大于所述中间玻片的厚度，使得所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次贴合时所述密封圈的上、下侧分别与所述盖玻片、所述载玻片抵接。
通过设置密封圈，使用时先把中间玻片放在载玻片上，然后把密封圈放在第一通孔内，然后把观察物置于密封圈内，然后盖上盖玻片，再使用外置的夹紧件夹紧盖玻片、中间玻片和载玻片，由于密封圈的上、下侧分别与所述盖玻片、所述载玻片抵接，透明剂和荧光染料不容易溢出。
权利要求书1.一种适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：包括：中间玻片，设有若干第一通孔；盖玻片和载玻片，所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次层叠设置；弹性材料制成的密封圈，设于所述第一通孔内且厚度略大于所述中间玻片的厚度，使得所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次贴合时所述密封圈的上、下侧分别与所述盖玻片、所述载玻片抵接。
2.根据权利要求1所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：所述第一通孔的内侧壁与所述密封圈之间设有第一间隙。
3.根据权利要求1所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：所述密封圈的颜色为黑色。
4.根据权利要求1所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：所述第一通孔有两个。
5.根据权利要求1所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：还包括若干夹紧件，所述夹紧件具有上夹持部和下夹持部，所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片均设于所述上夹持部和所述下夹持部之间，所述上夹持部与所述盖玻片抵接，所述下夹持部与所述载玻片抵接，使得所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次紧贴。
6.根据权利要求5所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：所述盖玻片呈横向设置的矩形板状，所述夹紧件有两个，两个夹紧件分别设于所述盖玻片的左端、右端。
7.根据权利要求5所述的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，其特征在于：所述夹紧件为回形针。
技术说明书适用于共聚焦显微镜的玻片结构技术领域本技术涉及实验器材领域，特别是涉及一种适用于共聚焦显微镜的玻片结构。
背景技术目前国内许多实验室所使用的激光共聚焦显微镜是倒置式的，一般有两种方式把观察物、透明剂和荧光染料的混合物置于物镜上方；其中一种方式是使用共聚焦专用培养皿，其为塑料的培养皿体底部嵌上厚度约为0.17mm的玻璃片，玻璃片通过一种特殊的透明生物胶与培养皿体底部粘合，直接把共聚焦专用培养皿置于物镜上方即可，但是其难以清洗和灭菌，只能一次性使用，实验成本较高；另一种方式是使用常规的盖玻片与载玻片的组合结构，把观察物置于载玻片上、滴加透明剂和荧光染料，然后盖上盖玻片，然后把整个盖玻片与载玻片的组合结构翻转，再置于物镜上方，由于液体的表面张力作用，盖玻片与载玻片会保持贴合、不会掉落，但这样盖玻片与载玻片之间的空间很小，透明剂和荧光染料容易溢出，而实验中使用的透明剂(如冬青油)和荧光染料(DAPI)等大多具有刺激性气味并具有毒性，经常接触会对人体造成伤害。
技术内容本技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。
为此，本技术提出一种适用于共聚焦显微镜的玻片结构，所述玻片结构使用时透明剂和荧光染料不容易溢出。
根据本技术实施例的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，包括：中间玻片，所述中间玻片上设有若干第一通孔；盖玻片和载玻片，所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次层叠设置；弹性材料制成的密封圈，设于所述第一通孔内且厚度略大于所述中间玻片的厚度，使得所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次贴合时所述密封圈的上、下侧分别与所述盖玻片、所述载玻片抵接。
根据本技术实施例的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，至少具有如下技术效果：通过设置密封圈，使用时先把中间玻片放在载玻片上，然后把密封圈放在第一通孔内，然后把观察物置于密封圈内，然后盖上盖玻片，再使用外置的夹紧件夹紧盖玻片、中间玻片和载玻片，由于密封圈的上、下侧分别与所述盖玻片、所述载玻片抵接，透明剂和荧光染料不容易溢出。
根据本技术的一些实施例，所述第一通孔的内侧壁与所述密封圈之间设有第一间隙。
根据本技术的一些实施例，所述密封圈的颜色为黑色。
根据本技术的一些实施例，所述第一通孔有两个。
根据本技术的一些实施例，本技术还包括若干夹紧件，所述夹紧件具有上夹持部和下夹持部，所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片均设于所述上夹持部和所述下夹持部之间，所述上夹持部与所述盖玻片抵接，所述下夹持部与所述载玻片抵接，使得所述盖玻片、所述中间玻片和所述载玻片依次紧贴。
根据本技术的一些实施例，所述盖玻片呈横向设置的矩形板状，所述夹紧件有两个，两个夹紧件分别设于所述盖玻片的左端、右端。
根据本技术的一些实施例，所述夹紧件为回形针。
本技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本技术的实践了解到。
附图说明本技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1是本技术实施例的玻片组件的结构主视图；图2是本技术实施例的玻片组件的结构俯视图；图3是图2中所示的玻片组件与夹紧件的装配结构示意图。
附图标记：玻片组件100、盖玻片110、中间玻片120、载玻片130、密封圈140、夹紧件200。
具体实施方式下面详细描述本技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本技术，而不能理解为对本技术的限制。
在本技术的描述中，需要理解的是，涉及到方位描述，例如上、下、前、后、左、右等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本技术的限制。
此外，若干的含义是一个或者多个，多个的含义是两个以上，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。
如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
本技术的描述中，除非另有明确的限定，设置、安装、连接等词语应做广义理解，所属技术领域技术人员可以结合技术方案的具体内容合理确定上述词语在本技术中的具体含义。
下面参考图1和图2描述根据本技术实施例的适用于共聚焦显微镜的玻片结构。
如图1和图2所示，根据本技术实施例的适用于共聚焦显微镜的玻片结构，包括盖玻片110、中间玻片120、载玻片130和密封圈140。
中间玻片120上设有若干第一通孔；盖玻片110、中间玻片120和载玻片130依次层叠设置；密封圈140由弹性材料制成，密封圈140设于第一通孔内且厚度略大于中间玻片120的厚度，使得盖玻片110、中间玻片120和载玻片130依次贴合时密封圈140的上、下侧分别与盖玻片110、载玻片130抵接。
例如，如图1和图2所示，盖玻片110、中间玻片120、载玻片130和密封圈140合称为玻片组件100，盖玻片110、中间玻片120和载玻片130可均为横向设置的矩形板状，盖玻片110、中间玻片120和载玻片130由上至下依次层叠设置，密封圈140设于盖玻片110和载玻片130之间且设于第一通孔内。
使用时，先把中间玻片120放在载玻片130上，然后把密封圈140放在第一通孔内，然后把观察物、透明剂和荧光染料的混合物置于密封圈140内，然后盖上盖玻片110，再使用外置的夹紧件200夹紧盖玻片110、中间玻片120和载玻片130，即可整体翻转然后置于物镜上方，由于密封圈140的上、下侧分别与盖玻片110、载玻片130抵接，观察物中的透明剂和荧光染料不容易溢出，密封圈140和载玻片130之间可通过热熔胶贴合，使得添加透明剂和荧光染料时透明剂和荧光染料不会从密封圈140和载玻片130之间流出；同时，使用完毕后可拆分盖玻片110、中间玻片120、载玻片130和密封圈140分别进行清洗和灭菌，可重复使用，实验成本较低。
此外，盖玻片110、载玻片130和密封圈140都可直接购买获得，中间玻片120可由另外一块载玻片130使用玻璃开孔器开孔制成，结构简单，制作简便，便于进行推广使用。
在本技术的一些实施例中，第一通孔的内侧壁与密封圈140之间设有第一间隙。
加工中间玻片120时可把第一通孔的直径加工成比密封圈140的外径大，这样把密封圈140放在第一通孔内第一通孔的内侧壁与密封圈140之间即有第一间隙，当然也可先在中间玻片120上加工出第一通孔，再购买外径比第一通孔的直径小的密封圈140。
这样把观察物置于密封圈140内时，透明剂和荧光染料的量能加至稍微溢出密封圈140，再盖上盖玻片110，排出密封圈140内的空气，出去空气的干扰，而溢出的透明剂和荧光染料会留置在第一间隙内，载玻片130、中间玻片120、盖玻片110紧贴时透明剂和荧光染料不会被挤出，实验员翻转、挪动本技术时不会接触到透明剂和荧光染料。
根据本技术的一些实施例，密封圈140的颜色为黑色。
当第一通孔有两个以上时，黑色的密封圈140能避免共聚焦显微镜拍照时孔间荧光的影响。
根据本技术的一些实施例，第一通孔有两个。
如图1和图2所示，中间玻片120具有两个第一通孔，载玻片130、中间玻片120和盖玻片110均呈横向设置的矩形板状，两个第一通孔左右间隔设置，这样能一次观察两个样品，简化实验操作。
需要说明的是，第一通孔的数量为至少一个即可，当为一个时附图中未示出，第一通孔可设于经常中间玻片120的中部。
根据本技术的一些实施例，本技术还包括若干夹紧件200，夹紧件200具有上夹持部和下夹持部，盖玻片110、中间玻片120和载玻片130均设于上夹持部和下夹持部之间，上夹持部与盖玻片110抵接，下夹持部与载玻片130抵接，使得盖玻片110、中间玻片120和载玻片130依次紧贴。
参照图3，盖玻片110呈横向设置的矩形板状，夹紧件200有两个，两个夹紧件200分别设于盖玻片110的左端、右端，夹紧盖玻片110、中间玻片120和载玻片130，则密封圈140保持与盖玻片110和载玻片130抵接，即使翻转挪动本技术，透明剂和荧光染料也不会溢出；而且两个夹紧件200分别设于盖玻片110的左端、右端能使本技术更牢固。
需要说明的是，夹紧件200的数量为至少一个即可，当为一个时附图中未示出，夹紧件200可置于两个第一通孔之间，同样能达到夹紧盖玻片110、中间玻片120和载玻片130的目的。
