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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿ppt

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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共20张PPT)

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共20张PPT)

耐高温菌种提取耐高温酶。
启示： 根据它对生存条件的要求，到相应的环境中去寻找
（二）实验室中目的菌株筛选
原理 ： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包
括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止
回答： 其他微生物生长。
1、在该配方中，为微生物生长提供碳 源和氮源的是什么物质？葡 只有萄能糖够、以尿尿素素
作为氮源的微生
C半固体培养基
D天然培养基
放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的 微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌；
难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
2．间接计数法： 最常用稀释平板计数法。
原理： 1个活菌→1个菌落
统计原则 ①选 30~300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质 地等等，都是区分细菌的重要手段。
4、鉴定： 筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生 物的生存
酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解 成氨→培养基碱性增强→ 酚 红变红→脲酶阳性
五、实验过程注意
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前 都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入 盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰 旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。 注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当
事先规划时间。
六、结果分析与评价
注意：菌落计数偏差
1、统计的菌落数比活菌的实际数目 低 。这是因为当 两个或多个细胞在一起时，每平克板样上品中观的察菌到株的数只是 一个

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿ppt

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿ppt
实践训练
A
C
D
4.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（ ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
03
培养基选择分解尿素的微生物的原理
04
6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
以尿素为 唯一氮源 的培养基
牛肉膏 蛋白胨 培养基
是
分离 尿素 细菌
判断该 培养基 有无选 择性
实验组
对照组
培养基类型
是否 接种
目的
结果
只生长尿素细菌
生长多种微生物
是
6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
以尿素为 唯一氮源 的培养基
实验的具体操作
01
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
03
.制备培养基：
05
.土壤取样
02
取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
04
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
06
样品的稀释
应在火焰旁称取土壤10g。 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
0.2g
MgSO4`7H2O
2.1g
NaH2PO4
1.4g
KH2PO4
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数PPT课件

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数PPT课件
菌株：菌株又称品系，表示任何由一个独
立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的 纯种群体及其后代。因此,一种微生物的每一个 不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌 株。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？

碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
②从物理性质看此培养基属于哪类？功能上 属于哪类？
固体培养基、选择培养基
此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？
原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而 生存。但实际实验中有些细菌可以以其他细菌代谢产生 的废物生长，因此需进一步鉴别
注意：◆应在火焰旁称取土壤10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆稀释倍数为 101 ～106。初次范围宽些稀释101 ～107， 稀释试管按梯度排序,并编号
㈣.取样涂布
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
细菌 放线菌
真菌
稀释倍数
104、105、106
103、104、105 102、103、104
设置对照的目的：
排除实验组中非测试因素对试验结果 的影响，提高实验结果的可信度。
阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出 的问题。
(1)A同学出现此结果的可能原因？
⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质)
(2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验 结果的因素？
目的
保证获得菌落 数在30～300 之间、适于计

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件

培养基的种类情况
培养基
稀释倍数
103
104
105
106
平板1
242
210
202
102
选
择
平板2
250
240
86
98
培
养
平板3
310
250
198
120
基
平均数
162
106
牛肉膏蛋白胨 平板4
培养基
（对照）
菌落计数方法
例 不同浓度的平均菌落数
次 101
102
103
1 1365 164
20
2 2760 296
例：46（103）和296 （102）均在30～300之间，
则：46×103÷296×102≈1.6，
应取二者的平均值。
46×103÷296×102
(
0.1(ml)
) ÷2=3.775×105
3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释 度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
培养基配方三
1.4g 0.2g
Na2HPO4 葡萄糖
1.0g
琼脂
2.1g 10.0g 15.0g
（一）筛选菌株——尿素细菌的分离
1.原理：根据某种微生物的特殊营养要求或其对物理、化 学因素（营养、温度、pH等）的抗性而设计的。
2.功能：使混合菌群中的目的菌株变为优势菌，从而提高 该菌的筛选效果。
3.方法：利用选择培养基来实现。
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106

专题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt

专题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt

收集不同类型和不同施肥方式的土壤样品，使用稀释平板法分离分解尿素的细菌。
02
土壤中分解尿素的细菌简介
土壤细菌的种类繁多，包括多种好氧性、厌氧性及兼性厌氧性的细菌。
土壤细菌在自然界的氮循环和物质转化中起到重要作用，如分解尿素等含氮有机物。
土壤细菌的种类与功能
分解尿素的细菌属于好氧性异养菌，能够利用尿素作为唯一氮源。
采集
将采集的土壤样品进行充分混合，避免样品中存在的差异对实验结果产生影响。
处理
培养基制备
制备尿素培养基，根据实验需求加入适量的酚红指示剂，以便更好地检测分解尿素的细菌。
接种
将处理过的土壤样品接种到尿素培养基上，接种量根据实验要求而定。
培养基的制备和接种
将接种后的培养基放入恒温箱中培养，每隔24小时将培养基转接到新鲜的培养基上，直到获得纯培养物。
未来研究方向
未来的研究应该进一步拓展分解尿素细菌的应用领域，例如在生物修复、污水处理等领域的应用，为环境保护和人类健康做出更大的贡献。
我们应该加强与国际同行之间的合作与交流，引进先进的技术和方法，推动我国在该领域的研究和发展。同时，也应该积极举办和参加国际会议和学术交流活动，提高我国在该领域的国际知名度和影响力。
分光光度计间接计数法
同位素标记法
利用同位素标记物掺入细菌细胞中，用仪器检测同位素标记物的放射性，以推算细菌数量。
要点一
要点二
流式细胞计数法
将样品细胞染色后，利用流式细
05
土壤中分解尿素的细菌的应用前景
促进农作物生长
土壤中分解尿素的细菌能够将尿素分解为氨和二氧化碳，为农作物提供营养，促进其生长。
这类细菌具有尿素酶，能够将尿素分解成氨，以供细胞利用。

土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件

土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件
A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 PPT课件

25mL全营养LB固体培养基： 0.25g蛋白胨，0.12g酵母提取物，0.25g氯化钠和0.25g琼脂糖， 水25mL，灭菌。
方法步骤
❖ 土壤取样：从富含有机物、潮湿、PH≈7的土壤中取样。铲 去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
❖ 制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉 膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择作用。
❖ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释 度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相 同吗？
附答案
❖ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能 统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值， 然后按课本旁栏的公式进行计算。
❖ 这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株 /kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本 中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放 线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此， 为获得不同类型的微生物，就需要按不同的 稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提 供选择培养的条件。
土壤中分解尿素的细菌的分离 与计数
实验重点:
❖ 筛选菌株 ❖ 统计菌落数目
目录
❖ 实验原理 ❖ 目的要求 ❖ 材料用具 ❖ 试剂配制 ❖ 方法步骤 ❖ 结果分析与讨论 ❖ 思考题 ❖ 附答案
一、
原理
分 离
使用专一培养 基（含有尿素） 可从土壤中分 离出分解尿素 的细菌。
统计菌落数目
稀释涂布法常 用来统计样品 中活菌的数目。
设置对照 以LB全营养 培养基做为以 尿素为唯一氮 源的选择性培 养基的对照， 来证明专一培 养基的选择作 用。
筛选菌株
❖ 实验室中微生物的筛选应用的原理
➢ 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、PH值等)，同时抑制或阻止其他微生物生 长。
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结果
以尿素为 实验组 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基
是
分离 尿素 细菌
只生长尿 素细菌
对照组
是
判断该 培养基 有无选 择性
生长多种 微生物
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㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
[三]样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 火焰旁进行
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㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作好标记。注明培 养基类型、培养时间、稀释度、培养物 等。
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㈣.取样涂布
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
稀释倍数 目的
细菌
104、105、106
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实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，A同学从对应的106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质)
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方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
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6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
结果
以尿素为 实验组 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基
是
分离 尿素 细菌
只生长尿 素细菌
对照组
是
判断该 培养基 有无选 择性
生长多种 微生物
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6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
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2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固
体培养基上所形成的一个菌落是由一个单 细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的 一个单细胞。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
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②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
5、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微 生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏 脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源 而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用 此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果 要有说服力，对照的设置是必不可少的。
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的
信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用
前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
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制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中 加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐 点此播放教学视频
练一练
用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目， 其结果与实际值相比（ ） A.比实际值高 B.比实际值低 C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低
放线菌
真菌
103、104、105
102、103、104
保证获得菌落 数在30～300 之间、适于计 数的平板
原因：不同微生物在土壤中含量不同
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㈤.微生物的培养与观察 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
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1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ A ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) D A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数 目。
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◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30— —300的平板，则说明稀释操作比较成功， 并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数 的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不 精确，需要重新实验。
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件( 包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其 他微生物生长。
什么是选择性培养基？
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3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基： KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基
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微生物的培养与观察
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三.结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染， 菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则 菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出 分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 点此播放教学视频
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加 到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培 养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测 试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
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4、课题目的
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌
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一.研究思路
㈠.筛选菌株
㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
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㈠.筛选菌株 1、实例： DNA多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制的技术，此项 技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
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大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
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六、例题解析
答案：A
例1．对细菌群体生长规律测定正确的表述是 A．在液体培养基上进行 B．至少接种一种细菌 C．接种一个细菌 D．及时补充消耗的营养物质
解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。 这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时 测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测 定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长； 恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过 样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能 测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
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一、课题背景
1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之 后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2) + H2O 脲酶 NH3 + CO2Fra bibliotek 四、操作提示
无菌操作 做好标记 规划时间
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五.课外延伸
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变红，说明该细菌能够 分解尿素。
测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水 用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养 基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出 水样中大肠杆菌的数量。
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下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 ( ) A. KH2PO4、NA2HPO4、 MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 1
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实践训练
4.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。