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金黄色葡萄球菌实验标准操作程序岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作作业步骤1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作；2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒；3、操作前手用75%酒精消毒，剪样前用酒精棉球擦拭样品表面；4、固体和半固体样品：称取25g样品，放入225ml生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1:10的样品匀液。
5、液体样品：用微量移液器吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶中（瓶内置适量的无菌玻璃珠），充分混匀，制成1:10的样品匀液。
6、用1mL微量移液器吸取1:10的样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入含有9ml 灭菌生理盐水试管内（吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振荡试管混匀或换用1支1mL无菌吸管反复吹打使混匀，做成1:100的稀释液。
7、按上述操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌枪头。
8、第一方法根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4m接种量分别加入3块Baird-Parker琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
9、在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36 ℃±1℃培养1 h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36 ℃±1 ℃培养，45 h～48 h。
10、典型菌落计数和确认10.1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。
金黄色葡萄球菌简介葡萄球菌葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。
其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。
典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
是一种不利于人体的细菌。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖。
耐热性强，加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。
流行病学特点金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因此，食品受其污染的机会很多。
美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，中国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
金黄色葡萄球菌
生物学特性：
1.球菌，直径0.8-1.0μm左右，显微镜下排列成葡萄串状
2.无芽胞、鞭毛，无荚膜
3.革兰氏染色阳性
4.化能异养菌，呼吸代谢和发酵代谢
5.高度的耐盐性（10-15%NaCl肉汤中生长）
培养特性：
1.营养要求不高
2.需氧或兼性厌氧，在好氧环境下生长最好
3.最适生长温度37°C，干燥环境下可存活数周
4.最适生长pH 7.4
5.菌落光滑、低凸、闪光、奶油状、并且有完整的边缘。
6.血平板菌落周围形成透明的溶血环
生化特性：
（1）可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
（2）金黄色葡萄球菌在厌氧条件下分解甘露醇产酸（非致病性菌则无此现象）
（3）许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
（4）具有较强的抵抗力，磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等高度敏感
贴膏剂预处理
1.取规定量供试品
2.去掉贴膏剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上
3.用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起
4.将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中
5.用力振荡至少30 分钟，制成供试液
生化试验：
血浆凝固酶为阳性（应呈凝固状）阳性对照管液呈凝固状
阴性对照管血浆流动自如。
凝固为阳性反应，不凝固为阴性反应。
金黄色葡萄球菌滤液制剂使用说明书
【药品名称】
通用名：金黄色葡萄球菌滤液制剂
曾用名：金葡液
英文名：Staphylococcus aureus Culture Filtrate
汉语拼音：Jinhuangse Putaoqiujun Lüye Zhiji
主要组成成分：蛋白质、多肽、十八种氨基酸、血浆蛋白凝固物
【性状】本品为微黄色澄明液体，无沉淀、无异物。
【药理毒理】金黄色葡萄球菌通过促进毛细血管生长、促进血肿吸收、机化和加速骨痂形成促进骨折愈合。
经动物急性毒性、长期毒性、异常毒性、过敏性试验及溶血试验证实，本品无毒副作用。
LD50>500ml/kg。
【适应症】用于治疗骨折，能促进骨痂生长，加速骨折愈合，适用于骨折延迟愈合或不愈合。
【用法用量】骨折断端局部肌内注射，5天注射1次，每次1～2.0ml，1个月为1个疗程，根据病情可适当延长或缩短。
【不良反应】可有局部肿胀疼痛，发热37.5～38.5℃之间，6～12小时左右自行消退，严重者或持续不退者予对症处理。
【禁忌】过敏体质，心、肾、肝功能严重不良，孕妇及局部皮肤条件不好的闭合骨折慎用。
【注意事项】
1.使用本品前应进行过敏试验。
2.对陈旧性骨折应用粗针头刺入骨折端或造成新创面后再注入药液。
3.严禁静脉注射。
4.本品应在有经验的专科医生指导下使用。
【孕妇及哺乳期妇女用药】尚不清楚，慎用。
【药物相互作用】尚不清楚。
【规格】凝固活性≥400μg/2ml/支【贮藏】2～8℃避光保存。
【有效期】2年。
科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基使用说明书金黄色葡萄球菌是临床及食品工业中经常遇到的一种致病菌。
由金葡菌引起的院内感染正变得日益严重，因此，正确快速地检测金葡菌尤其是耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）就显得尤为重要。
科码嘉金葡菌显色培养基中添加了针对金葡菌的选择性色素，因而具有较高的特异性和灵敏度。
而且同常规培养基相比，能较好地消除假阳性提高金葡菌的检出率。
为筛选甲氧西林抗性菌株，可以在科码嘉金葡菌显色培养基中添加例如妥布霉素或甲氧西林等抗生素。
一、组分琼脂15.0g/L 蛋白胨及盐分65g/L 色素 2.5g/LpH6.9±0.2二、操作1．取瓶内干粉，溶于1000ml蒸馏水或纯水中，可以根据需要按照82.5 g/L 比例扩大、缩小。
2．将上述干粉缓慢倒入蒸馏水中，充分搅拌溶解。
3．加热至100℃，并按常规不断搅拌。
如果使用高压锅，无需加压，加热不能超过100℃。
混合物也可以在微波炉中加热，用此法加热，煮沸后混合物立即移出微波炉并轻轻搅拌，而后移入微波炉再加热，直至琼脂完全溶解（大量气泡代替泡沫产生，大约需要2分钟）。
4．使用倾注程序：将培养基水浴冷却至48℃，准备直径为90mm的已灭菌的带盖培养皿，每个培养皿接种1ml样品，然后倾注15±1ml上述溶解的培养基，混匀使其凝固，倒置，37℃培养24小时。
5．如果用表面接种程序：将培养基倾注于已灭菌的培养皿中，使其凝固，在室温可保存一天或在冰箱里贮存数天（避光，4℃）。
划线接种，37℃培养24小时。
三、贮存1.干粉需保存在15-30℃干燥环境中。
2.倾注好的培养剂在室温可保存一天，4℃冰箱中避光可以贮存两星期。
四、结果菌落色彩初筛微生物金黄色葡萄球菌其他紫红色、红色、粉红色蓝色、无色或奶油色注：最后的鉴定必须做补充实验。
★使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃四、药敏实验为研究氧氟沙星和妥布霉素对金葡菌的抗菌性，培养基中加入抗生素，使其最终浓度为氧氟沙星2mg/l、妥布霉素8mg/l，孵育48小时。
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
金黄色葡萄球菌生物学性状1、形态与染色革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。
无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。
在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。
2、培养特性需氧或兼性厌氧。
营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。
属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。
3、生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。
致病性菌株能分解甘露醇，产酸。
触酶阳性，可与链球菌相区分。
4、抗原种类多，结构复杂，以葡萄球菌A蛋白较为重要。
（1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。
在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。
（2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。
（3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。
金黄色葡萄球菌中可提出A 群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。
5、分类（1）按色素、生化反应等表型分类，分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三类。
（2）根据有无凝固酶分型：可分为凝固酶阳性菌株和凝固酶阴性菌株。
6、抵抗力葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。
在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。
对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。
该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。
耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合成的量有关。
