实验三 果蝇幼虫唾液腺巨大染色体染色观察

药品 改良苯酚品红等



实验方法

把载玻片置于解剖镜下。载玻片上滴水一滴， 取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解 剖针，左手的解剖针压住幼虫后端１/３处， 固定幼虫。右手解剖针按住幼虫头部，用力向 右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾 腺是一对透明的棒状腺体
在载玻片上除去幼虫其他组织部分，还要把 唾腺周围的白色脂肪剥离干净，再滴上改良 苯酚品红染色。

4.横纹结构：每条染色体的染色线在不同的 区段螺旋化程度不一，出现一系列宽窄不 同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。

5.Puff结构：幼虫 的不同发育期，浓 缩的染色质纤维会 成群解旋、松开， 形成泡状松散结构， 这种泡状结构称 Puff结构，亦称染 色体的疏松。
三、实验用品

实验材料 果蝇的三龄幼虫 用品 解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、吸水纸等

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普通果蝇（2n=8）唾腺染色体的形态：各染色体 着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的 染色中心，第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形（中着丝 粒），各有两臂，Ｘ染色体呈棒状，第Ⅳ对染色 体呈粒状，观察时可见五条臂由染色中心向外蜿 蜒伸展。
果蝇唾腺染色体的特点：

1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大 得多，宽约5μm，长约400μm，相当于普通 染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色 体。
果蝇唾腺染色体的制 备与观察
一、实验目的

练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺 染色体标本的方法；������
了解体细胞染色体联会现象，观察果蝇唾 腺染色体的形态特征，并根据唾腺染色体 上横纹的形态和排列，识别不同的染色体 识别染色体结构变异的细胞学表现。 练习绘制多线染色体图Βιβλιοθήκη 二、实验原理

果蝇唾液腺染色体观察实验报告果蝇（Drosophila melanogaster）是一种常见的模式生物，在遗传学研究中有着重要的应用价值。

果蝇唾液腺染色体观察实验是一种常用的实验方法，通过观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以了解染色体的形态和数量变化，为遗传学研究提供重要的数据支持。

本实验旨在通过对果蝇唾液腺细胞进行染色体观察，掌握染色体的基本结构和形态特征，为今后的遗传学研究奠定基础。

实验材料和方法。

1. 实验材料，成年果蝇、盐酸乙醇、醋酸乙酯、苏木精、酒精、冰醋酸、苏木素、甲醛、石蜡等。

2. 实验方法：（1）取一只成年果蝇，用镊子夹住果蝇的头部，将果蝇的身体用另一只镊子拔去。

（2）将果蝇头部置于盐酸乙醇中，浸泡5分钟，然后用镊子将头部转移到醋酸乙酯中，浸泡5分钟。

（3）将处理后的果蝇头部转移到苏木精中，浸泡5分钟，然后用酒精逐级脱水，最后转移到冰醋酸中浸泡5分钟。

（4）将果蝇头部转移到甲醛中，固定30分钟，然后用苏木素染色，再经过酒精逐级脱水，最后转移到石蜡中浸泡。

（5）将处理后的果蝇头部置于石蜡中，浸泡30分钟，然后取出制作切片，用显微镜观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构。

实验结果和分析。

经过实验操作，观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以看到染色体呈现出条状的形态，其中可以清晰地看到染色体的着丝粒和染色单体。

染色体的数量在观察的过程中也得到了初步的统计，一般情况下，果蝇唾液腺细胞的染色体数量为8条。

结论。

通过本次实验，我们成功观察了果蝇唾液腺细胞的染色体结构，了解了染色体的基本形态特征和数量变化。

这为今后的遗传学研究提供了重要的数据支持，也为我们进一步深入了解果蝇的遗传特性奠定了基础。

总结。

果蝇唾液腺染色体观察实验是遗传学研究中常用的实验方法，通过观察果蝇唾液腺细胞的染色体结构，可以了解染色体的形态和数量变化。

本次实验的成功进行，为今后的遗传学研究提供了重要的数据支持，也为我们进一步深入了解果蝇的遗传特性奠定了基础。

实验三：果蝇巨染色体的制片和观察戚钰10131900107 第九组42号2015.10.13一、实验目的1、练习果蝇幼虫的解剖技术及果蝇唾腺染色体的制片方法。

2、观察果蝇的唾腺染色体，进一步了解基因在染色体上的排列方式。

二、实验原理蝇唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫幼虫唾液腺内的巨大染色体，由于让染色体DNA经过多次复制，但并发送细胞核分裂，重复复制后染色线聚集在一起，因此比一般的染色体大的多。

同时，唾腺细胞中的同源染色体总是处于配对状态，因此在果蝇唾腺细胞只能看到体细胞染色体数目的一半。

由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。

利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，用于细胞学观察和研究。

三、实验步骤1、取材选取黑腹果蝇的三龄幼虫（约5mm），左手持解剖针压住虫体的1/2处，右手用解剖针钉住幼虫头部，轻轻向前拉动，把头部拉开，拉出唾液腺，并剔除唾腺周围的脂肪及其他物质。

2、固定染色吸去生理盐水后加一滴HCl，水解5分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开。

吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干，加2滴醋酸洋红，染色15分钟，保持唾液腺浸没于染液中。

3、制片盖上盖玻片，用吸水纸吸干多余染液，并用手指轻压盖玻片，再用解剖针柄垂直轻敲，或进一步用拇指在盖玻片上适当用力压片，注意敲的过程中勿使盖玻片移动。

4、观察将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。

对染色体分散、个体性清楚的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，以便对照模式照片辨认出不同的染色体臂。

四、实验结果我组所制作的果蝇巨染色体装片在显微镜下的放大图如图1所示。

可以看到染色体已经散开，呈现出五臂的形态，放大后可以看到每条臂上都有深浅不一、宽窄不同的条纹。

巨大染色体图1. 10*40倍镜下果蝇三龄幼虫巨染色体形态图五、分析与讨论：1、我们组一共拉了10只左右的幼虫，成功拉出的共有4组，其中2组染色及压片比较成功，都在10*40倍镜下呈现分散状态，但是遗憾的是由于手机拍照并不能拍的很清楚而且显微镜也不能调到太清楚，所以照片有一些模糊，希望以后能够用电镜拍摄，应该会比较清晰，也会看到更多细节。

果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。

二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。

果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。

由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。

三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。

在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。

A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。

B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。

果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。

在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。

实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。

2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。

将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。

首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。

解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。

在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。

果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。

目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。

了解唾腺染色体的作用和意义。

１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。

因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。

1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。

Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。

２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。

２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。

（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。

唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。

幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。

拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。

去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。

果蝇唾腺染色体标本的制备与观察摘要：多线染色体广泛存在于双翅目、弹尾目的消化道及消化腺细胞中。

为遗传学，尤其是果蝇研究带来不少便利。

不论在经典细胞遗传学时代，还是当今的基因组时代，多线染色体都对遗传学研究有着重要的意义。

本次实验中，我们使用果蝇三龄幼虫唾液腺的染色体为材料制备、观察。

分辨了果蝇的不同染色体，练习了果蝇唾腺染色体标本的制备与观察。

染色体研究通常面临两个困难：一是染色体很小；一是初级少数动植物，如玉米祖先期的染色体上具有染色体里这样的结构可以作为识别或定位的标志外，大多数生物的染色体都没有标志。

而作为遗传学研究的模式生物黑腹果蝇，有丝分裂中期的染色体格外小。

多线染色体就是在这样的背景下被重新发现的。

多线染色体最早在要闻幼虫的唾液腺中发现。

广泛存在于双翅目、弹尾目的消化道及消化腺细胞中。

这些戏胞发育到一定阶段后，停止在间期，，但紧密配对的同源染色体不断复制。

，而复制后产生的染色体彼此不分开而形成。

少数植物中也发现有多线染色体，但没有昆虫体内的大。

多线染色体为遗传学，尤其是果蝇研究带来不少便利。

一个重要进展是Pardue等1907建立了双翅目昆虫多县染色体的原位杂交方法。

有了这种方发，确定一条RNA或DNA序列在染色体上的位置就变得非常简单。

不论在经典细胞遗传学时代，还是当今的基因组时代，多线染色体都对遗传学研究有着重要的意义。

在本次实验中，我们使用果蝇三龄幼虫唾液腺的染色体为材料制备、观察。

1.实验步骤1.1试验材料显微镜，双筒体式显微镜，解剖针两只，小毛笔一只，眼科镊，载玻片，盖玻片，滤纸片，香柏油，镜头纸，果蝇三龄幼虫，卡宝品红染液，盐酸1mol/L，蒸馏水，生理盐水。

1.2试验方法1.2.1三龄幼虫的饲养培养基富含营养；虫口密度要小；低温培养。

1.2.2剥去唾液腺选取果蝇三龄幼虫放在载片上，加一滴0.7％生理盐求，幼虫以体型大、虫龄长的为好。

将载片置双筒解剖镜下。

解剖针不宜过于尖锐，避免用力时刺破头部，拉不出唾腺，反而不便第二次拉取了。

实验3 果蝇唾腺染色体的观察
实验目的：
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染 色体的制片方法；
2. 观察果蝇唾腺染色体的结构特点；
3. 了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义。
实验原理：
双翅目昆虫的幼虫期都具有很大的唾腺细胞。 因为这些细胞发育到一定阶段后就不再进行有丝分 裂，停止在间期。但是染色质还是不断地复制，形 成约1000~4000拷贝的染色质丝，比普通的有丝分 裂中期的染色体大得多，称为多线染色体和巨大染 色体。
果 蝇 唾 腺 染 色 体 的 模 式 图
唾腺染色体的特征：染色体巨大；体细胞联会； 形成染色中心；具有深浅不同、疏密相间的横纹。
由于唾腺染色体的重要特征，其在遗传学上， 如染色体结构变异、染色体化学组成、基因差别表 达等方面都是重要的研究材料。
实验材料：
普通果蝇野生型的三龄幼虫活体。
实验用品：
压片
染色
实验报告：
1 绘出观察到的分散良好的唾腺染色体 的图像；
2 剥离唾腺的注意事项有 讨论：
① 果蝇唾腺染色体的特征；
② 查阅资料，了解唾腺染色体的遗传 学意义。
解剖针
解剖针
脂肪体 解剖镜下看到的剥离后的果蝇唾腺
3 染色：用改良苯酚品红染色10~20min。
4 压片：用铅笔轻轻敲盖片几下，然后用拇指 压片。
5 镜检：先在低倍镜下找到染色体分散良好的 图像，再在高倍镜下仔细观察唾腺染色体的特征。
将三龄幼虫 放在载玻片上
用生理盐水 剥离唾腺 清洗三龄幼虫
观察
用具：双筒解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、 载玻片、盖玻片、酒精灯、铅笔、吸水纸等。
药品：蒸馏水、生理盐水、45%醋酸、改良苯 酚品红染液等。

❖ 1M 盐酸 室温解离 8-10 min ❖ 用1-2滴生理盐水清洗样本 3次 ❖ 1-2滴石碳酸品红染色8min（只可4倍镜观察）
压片
❖ 盖上盖玻片（避免气泡），保证盖玻片下充满染液。 ❖ 解剖针轻敲样本正上方使组织细胞分散。 ❖ 扶住盖玻片边缘，用拇指快速按压样本正上方并维持压
力3秒钟，使细胞膜破裂，细胞质流走，染色体散开。 ❖ 滤纸吸干多余染液
果蝇唾液腺染色体制片与观察
实验目的
❖ 掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术 ❖ 观察唾腺染色体的形态特点
实验材料及流程
❖ 果蝇三龄幼虫 melanogaster 2n=8 virilis 2n=12
流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检
解剖幼虫
❖ 工具：镊子、解剖针 ❖ 生理盐水(0.7% NaCl)中操作、保存。注意液体量的
控制
解剖幼虫-拉断
❖ 唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4 ❖ 两根解剖针的落点：近头端口器 1/3-1/2处 ❖ 口器处解剖针平稳前移，身体破裂，一部分器官随口器
牵拉而出，另一解剖针向前滚动挤出剩余器官。
解剖幼虫-找到唾液腺
❖ 4倍镜下寻找唾液腺（光圈10，淡黄色条状） ❖ 对比肉眼观察，锁定唾腺目标，透明条状，倒像 ❖ 体视镜下唾腺透明度很高不利于寻找
解剖幼虫-剥离唾液腺
❖ 体式镜下剥离唾液腺（肉眼辨认也可） ❖ 解剖针定期引流，维持湿环境
体视显微镜 *
❖ 双物镜 ❖ 立体视觉 ❖ 正像 ❖ 超长焦距 ❖ 放大倍数连续调节
滤纸吸干液体-换液
❖ 一定注意保护样本，不要将其吸到滤纸上 ❖ 液体较多时滤纸离样本远一点，随着液体减少再逐渐靠
近样本解离-水洗-染色 Nhomakorabea镜检

遗传实验报告果蝇唾腺染色体观察【实验目的】1.练习解剖果蝇幼虫的技术2.掌握果蝇唾腺染色体的制片方法3.了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点【实验原理】果蝇为双翅目完全变态的昆虫，幼虫期分三龄。

其幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的多线染色体。

双翅目昆虫的整个消化管细胞发育至一定阶段后就停止有丝分裂，终止在分裂间期。

但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，唾液腺细胞核的染色体仍不断地进行自我复制而并不分开。

经多次复制后，形成约1000~4000拷贝的染色体丝，比普通中期相染色体大得多（约100~500倍），因此又称为多线染色体。

黑腹果蝇染色体数2n=8，存在体联会。

各染色体的着丝粒互相靠拢形成染色中心，由染色体中心向外伸出5条很长的染色体臂和一条极短的染色体。

（如右图）染色体Ⅰ为端着丝粒染色体，所以它的一端在染色中心上，另一端游离；Ⅱ、Ⅲ染色体为中着丝粒染色体，他们从染色中心呈V字形向外伸展，所以分别能看到2L、2R、3L和3R 4条长而宽的“带状物”；点状的第Ⅳ染色体很短小，为端着丝粒。

因此可以见到5条很长的和一条仅靠染色中心的短小的染色体。

在雄性幼虫中，唾腺染色体上不见Y染色体，他捕鱼X染色体联会，而且其着丝粒及其附近的异染色质参与染色中心的形成。

这可能是雄性幼虫唾腺染色体中的X染色体比其他几对染色体相对狭窄一些的缘故。

果蝇唾腺染色体特点：巨大，是多线染色体；有丝分裂停在间期，DNA不断复制，着丝点不分开；同源染色体紧密配对—体细胞联会，染色体呈单倍数。

整个唾腺染色体上分布着染色深浅不同、粗细各异的横纹，这意味着基因的排列。

这些横纹的宽窄、疏密程度以及排列顺序和数目都具有物种的特异性。

黑腹果蝇的多线染色体具有大约5000条横纹。

染色体各条臂的端部，即远离染色中心的游离端恒定的横纹特征，是准确识别各对染色体的重要依据。

在果蝇的特定发育时期，横纹会出现不连续的膨胀，称为疏松区（puff），目前认为这是该部分基因被激活的标志。

果蝇唾腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；2、观察果蝇的唾腺染色体。

二、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。

唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。

唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。

横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。

横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。

唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。

一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。

许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。

果蝇唾液腺：2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构成一个永久间期系统。

唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。

由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。

三、实验材料

野生果蝇
四、实验步骤

1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。


2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。

实验三果蝇唾腺染色体制片观察
一、实验目的
1.练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法
2.观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征
二、实验原理
双翅目昆虫的幼虫期都具有很大的唾腺细胞，其中的染色体就是巨大的唾液腺染色体。

这是由于细胞停止分裂，而染色体仍不断地进行复制而不分开，形成一千个拷贝以上的染色体丝复合体，称为多线染色体。

这些巨大的唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。

三、实验材料
1. 黑腹果蝇三龄幼虫
2. 显微镜、解剖镜、载玻片、盖玻片、解剖针、小烧杯
3. 0.7%生理盐水1N盐酸1%醋酸洋红
四、实验步骤
1. 取肥大的三龄幼虫在载玻片上
2. 解剖唾腺：滴加1滴生理盐水，在解剖镜下，左手针按住幼虫后1/3处，右手持针压
住头部向外拉，可将一对半透明的袋状唾腺拉出
3. 酸处理：剥离脂肪体，加1滴1N盐酸1分钟
4. 染色：吸掉盐酸，用水洗净后滴加染料，10分钟后盖片、压片（用力适当）
5. 显微观察（5条长臂+1条短臂）拍照、画图
X,2L,2R,3L,3R
参考照片：。

解剖针，载玻片，盖玻片，吸水纸等。 0.7％氯化钠（NaCl），1mol/L HCl；改
良苯酚品红染色液；果蝇培养基等。
五 实验方法
1．培养果蝇三龄幼虫 将果蝇放在营养丰富的培养基 中，15℃～18℃下饲养，幼虫要生长肥大，才能获得 较大的唾腺。
培养要求：
①饲料松软，含水量较高，营养丰富，发酵良好 （建议配方：玉米粉10g，红糖13g，琼脂1g，酵 母粉2g，丙酸3～4滴，加蒸馏水100～120ml）。
➢果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞， 其中的染色体是巨大的唾液腺染色体。
➢唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经 过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体 丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相 染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多 线染色体。
➢唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究 的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差 别表达等提供了独特的研究材料。
3．解离 将剥好的唾腺移到载片中央，加一滴1
mol/L HCl于腺体上，解离２～３min，使组织 疏松，以便压片时细胞分散，染色体展开。 4．染色
用吸水纸吸去HCl，加1滴蒸馏水轻轻冲洗 后，小心吸干。加1～2滴改良苯酚品红或其它 染液，染色10～15min。
5．压片
染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片 子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。（注意不要使 盖片移动。）
实验5 果蝇唾腺染色体的观察
一 实验目的 1．练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺染 色体标本的方法。 2．了解体细胞染色体联会现象，观察果蝇唾腺 染色体的形态特征，并根据唾腺染色体上横纹的 形态和排列，识别不同的染色体。 3．识别染色体结构变异的细胞学表现。

果蝇唾腺染色体的标本制备和观察姓名摘要：果蝇唾腺染色体足够大，染色体上的识别标记足够多，广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。

在本实验中，我们以果蝇三龄幼虫的唾腺为材料，通过解离、染色、压片等步骤，制备、观察唾腺染色体，旨在了解并掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剥离技术、掌握唾腺染色体标本的制备方法、了解唾腺染色体的形态结构特点。

实验结果表明，此次实验达到了预期的效果。

关键词：果蝇三龄幼虫的唾腺、唾腺染色体、横纹结构1.引言染色体研究通常面临两个困难：一是染色体很小；二是除极少数动植物，如玉米粗线期的染色体上具有染色粒这样的结构可以作为识别或定位的标志外，大多数生物的染色体都没有标志。

而作为遗传学研究模式动物的黑腹果蝇，有丝分裂中期的染色体则格外小，单倍体总长仅约7.5μm，这么小的染色体，别说识别特征，观察都很困难。

所以自从明确染色体在遗传中的作用后，细腿学家和遗传学家就试图寻找一个物种，它的染色体足够大，染色体上的识别标记足够多，这将对遗传学研究将提供不少的便利。

多线染色体（polytene chromosome）就是在这样的背景下被重新发现的。

1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani）在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。

1933年，美国学者贝恩特（Painter）等又在果蝇和其它双翅目昆虫的幼虫唾腺细胞间期核中发现了巨大染色体（giant chromosome）。

这种染色体的特点是：①染色体宽约5μm，长400μm，体形巨大，是一般中期染色体的100～150倍；②核内有丝分裂特殊。

果蝇幼虫的唾腺细胞发育至一定阶段就停止有丝分裂，终止在间期，但唾液腺细胞核的染色体仍不断地进行自我复制（210～215），但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体；③体细胞配对。

同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大；④横纹结构。

双手各持一枚解剖针，用左手解剖针压住幼虫中部，用
右手解剖针自幼虫口沟后切断头部，体内各器宫便从切口处 挤出，一对唾腺也随之而出。 唾液腺体是一对半透明棒状腺体。迅速剥离唾腺周围的 脂肪体，将唾腺保留在载片中央。
2. 解离：用吸水纸吸去生理盐水，然后加1滴Imol/L HCl溶液于腺体上，作用1～2min。
2.体联会：类似于减数分裂中的同源染色体联会。由于同源 染色体紧密配对几乎相互融合，使果蝇的唾腺染色体只有 二倍体染色体数目的单元数。
3.横纹结构：染色体上有横纹结构，这些横纹的数目和位置 往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；可用于基
因定位；
4.Puff结构：幼虫的不同发育期，浓缩的染色质纤维会成群 解旋、松开，形成泡状松散结构，使相应的基因得以表达， 这种泡状结构称Puff结构，亦称染色体的疏松。
液腺染色体（salivary gland chromosome）。但到后来， E．Heitz和H．Bauer（1933）以及T．S．Parnter
（1933）才指出它在细胞学上的意义。
事实上，双翅目昆虫（如摇蚊、果蝇等）的幼虫期都具 有很大的唾腺细胞，其中的染色体就是巨大的唾液腺染色体。 这些巨大的唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究 的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提
供了独特的研究这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um， 长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为 巨大染色体。
2.多线染色体：果蝇的唾腺细胞停止在分裂间期（永久间
期 ），染色体核蛋白纤维不断复制，平行排列形成巨大 而伸展的多线染色体唾腺染色体经过多次复制而并不分开， 每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以 又称多线染色体(polytene chromosome)。

实验二果蝇培养、生活周期观察及其多线染色体制片服部平次2012级生物科学专业2班1组摘要：果蝇作为一种常见的模式生物，被广泛的应用在遗传学上，用来研究遗传特性和基因的特点。

实验室里常用腹黑果蝇进行研究，我们培养的果蝇主要是研究它的生活周期以及观察它的多线染色体，我们把培养瓶放到培养箱里，隔几天去观察它的卵、幼虫、蛹，记录它的生活状态。

实验表明，果蝇的繁殖量很大，生活周期极短，它的多线染色体较常染色体大，便于观察染色体的形态。

关键词：果蝇培养基多线染色体生活周期引言：果蝇是一种极为常见的生物，在实验室饲养也比较简单。

果蝇作为遗传学研究的模式生物，主要有四个重要特点，其一，果蝇的生活周期十分短暂，两周左右基本就可以完成一个世代交替；其二，果蝇的产卵量比较多，可作为一个研究样本进行分析；其三，果蝇的性状表现丰富，突变类型多；其四，果蝇的唾腺染色体十分巨大，便于观察。

果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，染色体不断复制但细胞不分裂，从而形成了多线染色体，比常染色体要大150多倍。

1 实验材料与方法1.1 实验材料、试剂及实验设备1.1.1果蝇培养基配制1.1.1.1实验设备:高压蒸汽灭菌锅、通风橱、超净工作台。

1.1.1.2实验器皿:培养瓶、培养皿、玻璃棒、白瓷缸。

1.1.1.3实验材料:果蝇、全麦粉、琼脂、红糖、酵母粉、丙酸。

1.1.2 果蝇接种及培养1.1.2.1实验器材:毛笔，载玻片，显微镜，麻醉瓶，培养瓶，白瓷板，恒温培养箱1.1.2.2实验材料:雌雄果蝇1.1.2.3实验试剂:乙醚1.1.3 果蝇唾腺染色体制片1.1.3.1实验器材:解剖针，载玻片，盖玻片，解剖镜，显微镜1.1.3.2实验材料:果蝇的三龄幼虫1.1.3.3实验试剂:生理盐水，改良苯酚品红染液1.1.4果蝇生活周期观察1.1.4.1实验器材:载玻片，解剖针，显微镜1.1.4.2实验材料:果蝇受精卵，三龄幼虫，蛹，雄果蝇[1]1.2实验方法1.2.1 果蝇培养基设计1.2.1.1培养基配方麦麸或全麦粉（85%标准粉加15%麦麸）11g、红糖15g、琼脂0.9g、酵母粉1.7g、丙酸0.67ml、蒸馏水100ml1.2.1.2培养基成分的作用麦麸或全麦粉：用于建构果蝇生长与酵母菌繁殖所需环境红糖：用于为酵母菌繁殖提供原料琼脂：用于固定与培养酵母菌酵母粉：用于作为果蝇培养所需食物丙酸：用于防腐杀菌1.2.2果蝇培养基配制全麦培养基的配制：A.将红糖和琼脂粉放入白瓷缸中，加入190ml蒸馏水煮沸溶解。

实验报告课程名称遗传学实验实验名称果蝇唾液腺染色体制片和观察一、实验原理果蝇唾腺染色体是永久间期染色体，只发生DNA复制，不发生有丝分裂。

在幼虫唾腺细胞内，每条染色体进行了10次左右的复制，形成了约210=1024条染色体拷贝，再结合同源染色体的配对，共用约2048条同源染色体拷贝进行体细胞联会，形成比正常有丝分裂中期的染色体大200倍的、巨大的多线染色体。

这些染色体的着丝点聚集在一起，形成染色中心，同源染色体的两臂向外伸展。

经过染色，唾腺染色体的显示出独具本染色体特色的带和间带模式。

这个模式是恒定的，可用用于基因的定位，如果发生染色体的结构变异，则可以通过模式的改变而发现出来。

不同的染色体，其端部不同，可以用于鉴别染色体。

在观察唾腺染色体时，会发现膨胀泡结构，这是强烈的基因转录迹象。

二、实验结果图一：果蝇幼虫解剖针分离后效果图图二：剥离的腺体一共分离了3条果蝇幼虫才分离出较清晰的唾液腺体，在分离出带腺管的2侧腺体时，上面还有其他东西，因为想剥离的干净一点，所以没急着拍照，结果分离到一半时，一条腺体丢失，所以照片仅显示剥离中期时剩的一条腺体。

图三：唾腺染色体（借用）图四：唾腺染色体——图片放大（借用）带与间带、染色中心、膨胀泡、3R端部（僧帽）特点如上图标示。

三、总结反思从挑取果蝇幼虫，到幼虫的头身分离和剥离腺体，再到染色，这些操作的较为顺畅，并没有出现大的失误。

虽然刚开始分离的两条幼虫因为手法生疏，并没有分离出完整的腺体，但是第三次尝试时就分离出带腺管的2侧腺体，剥离后还剩一条较为完整的腺体。

染色时操作也较为小心，并未让腺体随水流被滤纸吸走。

就剥离腺体这个操作而言，我觉得这是一个需要耐心、眼力和方向感的事情，可以在剥离的时候将载玻片放在显微镜下，同时2根解剖针也进入显微镜的视野内的两侧，用解剖针判断该划掉哪个方向的一部分，一点点去掉不要的东西，最后就可以留下需要的腺体了。

但是操作一定要细心，腺体特别小，划的时候如果一不小心粘到解剖针上也弄不下来，那条腺体也就没用了。