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乌头碱类生物碱的含量测定方法概述陆燕萍;巩晓宇;陈秋燕;邱凤邹【摘要】The content determination methods of single ester alkaloids, diester alkaloids and total alkaloid in radix aconiti, kusnezoff monkshood, aconite and other aconitine drugs are described in this article including HPLC, RP-HPLC, LC-MS, TLCS, High Performance Capillary Zone Electrop- horesis and Spectrophotometry. Based on different mobile phase, HPLC and RP-HPLC is classified. At the same time, the classification of TLCS is carried out studied according to different deployment agents.%总结概括目前川乌、草乌、附子等乌头碱类药物的单酯型生物碱、双酯型生物碱及总生物碱的含量测定方法，主要有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、液－质联用方法、双波长薄层扫描法、高效毛细管电泳法和分光光度法。
该文根据不同的流动相对高效液相色谱法和反相高效液相色谱法进行分类，同时根据不同的展开剂对双波长薄层色谱法进行了分类。
【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2016(025)007【总页数】3页(P1-2,3)【关键词】乌头碱类生物碱;含量测定;高效液相色谱法;反相高效液相色谱法;液-质联用方法【作者】陆燕萍;巩晓宇;陈秋燕;邱凤邹【作者单位】广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172;广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172;广东医学院，广东东莞 523808;广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳 518172【正文语种】中文【中图分类】R282.41;R286.0乌头碱类药物的主要成分是生物碱，包括单酯型生物碱、双酯型生物碱、氨醇型生物碱和其他类型化合物。
乌头碱类生物碱的测定
乌头碱是一种含氮的生物碱，主要存在于乌头属植物中，如乌头、白附子等。
测定乌头碱的方法有多种，常用的方法有以下几种：1. 酸碱滴定法：将待测样品加入酸性介质中，使乌头碱转变为酸性溶液，再加入酸性碘化钾溶液，溶液呈现深蓝色，用硫酸滴定至溶液颜色变浅为止，根据滴定所需的硫酸量计算乌头碱的含量。
2. 气相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入气相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
3. 高效液相色谱法：将待测样品经过提取和洗涤，得到乌头碱的纯化样品。
然后将样品注入高效液相色谱仪中，通过样品在色谱柱中的分离和检测，测定乌头碱的含量。
4. 紫外分光光度法：将待测样品溶解于酸性溶液中，然后使用紫外分光光度计测定样品溶液的吸收光谱，根据乌头碱在特定波长下的吸光度值，计算乌头碱的含量。
以上是常用的几种乌头碱的测定方法，具体选择哪种方法可以根据实际情况和实验要求来确定。
实验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量一、目的要求1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。
2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基本原理和操作方法。
二、基本原理用连续回流提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝做净化剂进行液-固萃取净化处理，使提取液中具有紫外吸收的黄酮类及其他极性大的干扰组分保留于柱上，小檗碱、药根碱等小檗碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。
盐酸小檗碱在345nm±1nm处有最大吸收，在此波长处测定洗脱液的吸收度，以吸收系数法按盐酸小檗碱计算总生物碱含量。
三、仪器与试药1.分析天平、恒温水浴锅、分光光度计。
2.量瓶、三角瓶、烧杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色谱柱。
3.色谱用中性氧化铝，其他试剂均为AR级。
4.万氏牛黄清心丸(市售品)。
四、操作步骤1.提取去剪碎的万氏牛黄清心丸约4g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇(1﹕100)适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50mL量瓶中，用盐酸-甲醇(1﹕100)稀释至刻度，摇匀。
2.净化精密量取上述提取液5mL，置氧化铝柱(内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用30mL乙醇预洗)上，用25mL乙醇洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.测定法精密量取上述净化液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。
以2mL乙醇及0.05mol/L H2SO4液稀释至50mL的混合液为空白，用1cm比色池，E)为728计算即在345nm波长处测定吸收度。
按盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCL)的吸收系数(1%1cm得。
本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于1.7%。
五、思考题1.本实验操作中应注意哪些问题？2.欲证明此方法的可靠性，须做什么试验？如何设计？。
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定与质量评价黄柏片剂是一种常见的中药饮片，具有清热、解毒、活血等药理作用。
其中，生物碱类物质是黄柏片剂的重要活性成分之一，对于黄柏片剂的质量评价具有重要意义。
本文将围绕黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定与质量评价展开论述。
一、黄柏的生物碱类物质黄柏是常用的中药材之一，其主要成分是黄连素和盐酸黄连素。
黄连素是一种含氮的生物碱，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种生物活性。
盐酸黄连素是黄连素的盐酸盐，具有更强的溶解性和更好的药效。
这两种生物碱类物质是黄柏片剂的重要活性成分，对于黄柏片剂的质量评价具有重要意义。
二、黄柏片剂中生物碱类物质的含量测定方法1. 高效液相色谱法高效液相色谱法是测定黄柏片剂中生物碱类物质含量的常用方法。
该方法利用样品中黄连素和盐酸黄连素在固定相上的保留时间进行定量分析，通过对标准品的峰面积与样品峰面积的比值，可以计算出样品中生物碱类物质的含量。
2. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是测定黄柏片剂中生物碱类物质含量的快速、简便的方法。
该方法利用生物碱类物质带有特征性的紫外吸收峰进行定量分析，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以计算出样品中生物碱类物质的含量。
三、黄柏片剂质量评价指标1. 含生物碱类物质的含量黄柏片剂中生物碱类物质的含量是评价其质量的重要指标之一。
根据国家药典中对黄柏片剂生物碱含量的规定，每克黄柏片剂应含黄连素不少于0.12毫克和盐酸黄连素不少于0.90毫克。
只有在符合这两个含量要求的前提下，才能保证黄柏片剂的质量。
2. 总生物碱含量总生物碱含量是衡量黄柏片剂生物活性成分的综合指标。
根据国家药典的规定，黄柏片剂的总生物碱含量应不低于6.0%。
总生物碱含量越高，说明黄柏片剂中的生物活性成分越多，功效更强。
3. 残留溶剂含量残留溶剂是指制剂过程中使用的溶剂残留在最终成品中的量。
针对黄柏片剂，国家药典规定其残留溶剂含量应符合药典中的要求。
这些残留溶剂对人体有潜在的毒性，超标的残留溶剂可能对患者造成潜在的健康风险。
生物碱的测定方法生物碱是一类含有碱性氮原子的有机化合物，具有广泛的生物活性和药理学作用。
测定生物碱的含量是研究其药理活性和毒性的重要手段之一。
本文将介绍几种常用的生物碱测定方法。
一、重量法测定生物碱含量重量法是一种简单常用的测定生物碱含量的方法。
首先，将待测样品溶解在适量的溶剂中，然后通过蒸发浓缩或萃取分离得到生物碱。
最后，用称量法或比色法测定生物碱的质量或浓度。
这种方法操作简便，但对于含有多种成分的样品，可能存在干扰或误差。
二、光谱法测定生物碱含量光谱法是一种基于生物碱分子对特定波长光的吸收特性进行测定的方法。
根据不同生物碱的特点，可以选择紫外-可见吸收光谱、红外光谱、核磁共振光谱等进行测定。
这种方法准确性高，但需要仪器设备和专业知识的支持。
三、色谱法测定生物碱含量色谱法是一种通过生物碱在色谱柱中的分离和保留时间来测定其含量的方法。
常用的色谱方法包括气相色谱、液相色谱和高效液相色谱等。
这些方法能够对复杂的生物样品进行分离和纯化，准确地测定生物碱的含量。
四、生物学法测定生物碱含量生物学法是一种利用生物酶或微生物对生物碱进行催化反应，通过测定反应产物的生成量或消耗量来间接测定生物碱含量的方法。
常用的生物学方法包括酶促反应法、微生物代谢法、细胞毒性测定法等。
这些方法对于生物碱的测定具有较高的选择性和敏感性。
五、电化学法测定生物碱含量电化学法是一种利用电化学原理测定生物碱含量的方法。
常用的电化学方法包括电位滴定法、循环伏安法、电化学生物传感器等。
这些方法在测定生物碱含量时具有快速、灵敏和准确的优点。
六、荧光法测定生物碱含量荧光法是一种利用生物碱分子在特定条件下发出荧光信号来测定其含量的方法。
通过测定荧光强度或寿命可以得到生物碱的含量。
这种方法对于生物碱的测定具有高灵敏度和高选择性。
测定生物碱含量的方法多种多样，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
不同的方法有其优缺点，需要综合考虑样品特点、测定目的和实验条件等因素，选择最适合的方法进行生物碱测定。
生物碱类成分含量测定分析方法研究进展摘要：生物碱类成分是一类重要的具有多种多样的生物活性的天然含氮有机化合物，其含量测定方法多种多样，关于其定性、定量的方法得到了广泛深入的研究。
本文就近年来有关生物碱类成分含量的测定分析方法研究进展作一综述，以期为生物碱类成分含量测定方法的进一步研究提供文献依据和分析思路。
关键词：总生物碱；单体生物碱；含量测定生物碱类成分是一类重要的天然含氮有机化合物，也具有多种多样的生物活性。
生物碱类成分是中草药中主要的化学和生物活性成分之一，因此，常常把生物碱类成分作为中药研究的一指标成分，关于其定性、定量的方法得到了广泛深入的研究。
绝大多数生物碱因为其分子中氮原子上的孤电子对能接受质子而显碱性。
溶解性方面，绝大多数仲胺和叔胺生物碱具有脂溶性，而水溶性生物碱主要包括季铵碱类和某些含N- 氧化物的生物碱。
这些生物碱的理化性质为其提取和含量测定提供了理论依据。
生物碱类成分含量测定方法分为总生物碱和单体生物碱含量测定两大类，目前有关总生物碱以及单体生物碱的含量分析测定方法有很多：化学分析法、酸碱滴定法、直接分光光度法、离子对萃取比色法薄层色谱法、高效液相色谱法和高效毛细管电泳法。
但各有其优点和不足，本文分别对近年来总生物碱和单体碱类成分的含量测定分析方法研究进展做一综述。
1 总生物碱含量测定方法1.1 化学分析法化学分析法包括重量分析法和酸碱滴定法，酸碱滴定法较为常用，此法灵敏度较低，但因操作简便、成本低廉、准确性和稳定性较好，而仍被用于某些生物碱的含量测定。
酸碱滴定法又根据所用溶剂性质不同，分为水溶液酸碱滴定法和非水溶液滴定法，根据生物碱成分碱性强弱的不同采用不同溶剂的酸碱滴定法。
如对于某些碱性较弱的生物碱类成分，因在水溶液中进行滴定时没有明显的滴定突跃，故选择非水滴定法，并用质子性溶液冰醋酸等增强其碱性。
王安行等[1]采用酸性染料两相滴定法测定浙贝母总生物碱的含量。
也有研究者用非水滴定法分别测定咳喘平胶囊[2]和黄杨宁片[3]的总生物碱含量Krisztina 等[4]通过研究比较非水滴定法测定13种生物碱类，发现当生物碱的pKa值大于7 时，此法具有良好的准确度和精密度。
生物碱的测定方法生物碱是一类含有碱性基团的有机化合物，广泛存在于自然界中的植物和动物体内。
生物碱具有多样的生物活性，包括神经递质、毒素、药物等。
因此，准确测定生物碱的含量对于研究其在生物体内的作用机制以及开发相关药物具有重要意义。
测定生物碱的方法有很多种，下面将介绍几种常用的方法。
1. 毛细管电泳法：毛细管电泳法是一种基于电荷和大小的分离原理，可以对生物碱进行有效分离和测定。
该方法具有分离效果好、分析速度快、样品消耗少等优点，适用于各种类型的生物碱测定。
2. 气相色谱法：气相色谱法是通过气相色谱仪将生物碱样品分离并通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、分析速度快等优点，适用于测定生物碱含量较低的样品。
3. 液相色谱法：液相色谱法是通过液相色谱仪将生物碱样品分离并通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、适用范围广等优点，适用于各种类型的生物碱测定。
4. 荧光法：荧光法是利用生物碱分子在特定条件下发射荧光信号的特性进行测定。
该方法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，适用于测定生物碱含量较低的样品。
5. 分子吸收光谱法：分子吸收光谱法是通过测量生物碱在特定波长下吸收光线的强度来定量分析。
该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，适用于测定生物碱含量较高的样品。
在实际测定生物碱的过程中，需要先选择适合的测定方法，然后提取样品中的生物碱，并根据测定方法的要求进行前处理。
接下来，根据测定方法的原理和操作步骤进行测定，并根据标准曲线或计算公式计算出生物碱的含量。
需要注意的是，不同的生物碱可能需要不同的测定方法，因此在选择测定方法时需要考虑生物碱的性质和测定要求。
此外，为了确保测定结果的准确性和可靠性，还需要注意实验条件的控制、仪器的校准以及数据的处理等方面。
准确测定生物碱的含量对于研究其生物活性和开发相关药物具有重要意义。
在选择测定方法时，需要根据生物碱的性质和测定要求进行合理的选择，并在实际操作中注意实验条件的控制和数据的处理，以确保测定结果的准确性和可靠性。
实验六 硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1、掌握酸性染料比色法的基本原理和操作方法。
2、掌握注射液含量测定的步骤和计算方法。
3、了解管制药品的实验注意事项二、实验原理在适当的介质中，生物碱类药物（B ）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物（BH+In-），即为离子对。
用有机溶剂提取离子对，在一定波长处测定其吸收度，即可计算出生物碱药物的含量。
三、实验结果对照品吸光度：0.594 供试品吸光度：0.532标示量% =每ml 含量/标示量*100%=A 供*C 对*稀释倍数/A 对 * (1/标示量) * 1.027*100%=0.532*50*10/0.594 * (1/500) *1.027*100% =91.9%>90.0%[实验结果]符合药典规定四、注意事项1、硫酸阿托品系管制药品，实验需要多少取用多少。
实验完毕，空瓶和剩余硫酸阿托品一律交于带教老师，绝对禁止带出实验室。
2、硫酸阿托品在pH3.6时，与溴甲酚绿定量结合成有色络合物（离子对），可被氯仿定量提取，并在420nm 处呈最大吸收。
3、本实验所有溶液和试剂都应准确吸取，应遵循平行原则。
4、振摇要充分。
放置氯仿层澄明后才能分取。
分取氯仿层时，最初分得的液体1~2ml 应弃去，测定用的氯仿液必须澄清且不应掺有水珠。
5、实所用分液漏斗必须事先检漏，使用前应洗涤、干燥，活塞处应涂好凡士林。
五、问题与讨论1、酸性染料比色法测定生物碱类药物的基本原理是什么？影响测定的主要因素有哪些？ 在适当的介质中，生物碱类药物（B ）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物空白对照组（水组）颜色很淡的微黄色几乎看不清。
供试组颜色深于空白对照组，但浅于对照组。
对照组颜色最深（BH+In-），即为离子对。
中药制剂中总生物碱含量测定方法
中药中含有各种活性成分，其中总生物碱是一类重要的生物成分。
总生物碱含量测定是中药研究和生产中的一个重要指标。
以下是中药制剂中总生物碱含量测定方法。
一、试剂和仪器设备
1. 注射用二甲苯、氯化钠、氢氧化钠、弗兰克试剂、盐酸、氯仿、石油醚等试剂。
2. 电子天平、恒温水浴器、分光光度计、pH计等仪器设备。
二、标准品的准备
将标准品曲马多溶于氯仿制成100μg/mL的标准溶液。
三、样品处理
1. 取适量样品，加入适量注射用二甲苯，使其充分浸泡。
2. 加入氢氧化钠调节pH值，使其接近12。
3. 加入恒定浓度的氯化钠溶液，使样品中的总碱含量沉淀。
4. 离心分离并取沉淀。
5. 用氯仿将沉淀溶解。
6. 加入弗兰克试剂，测定其吸光度，计算总生物碱含量。
四、结果计算
根据标准品和样品的吸光度值计算出总生物碱含量。
五、注意事项
1. 操作中必须保持清洁卫生，避免污染。
2. 操作中保证 pH 值稳定，减少误差。
3. 操作过程中注意仪器和试剂的准确性和稳定性。
4. 仪器设备要进行严格的校准和维护，以确保测量精度和准确性。
总结：中药制剂中总生物碱含量测定方法是一个重要的指标。
本方法简单易行，可用于中药的研究和生产中。
在操作过程中需要注意操作顺序和仪器和试剂的准确性和稳定性。
