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GE Healthcare实施您ÄKTApurifier的首次运行重要用户信息所有用户必须阅读整本手册以充分理解ÄKTApurifier的使用安全。
WARNING（警告）警告标识强调必须严格遵循指令以避免人身伤害。
在说明书完全弄懂和所有规定条件都具备后才能开始动手操作。
Caution（小心）小心标识用于引起注意以避免人身伤害，必须遵循指令和条件以避免毁坏产品和其它设备。
在说明书完全弄懂和所有规定条件都具备后才能开始动手操作。
Note（注意）注意标识用于指出对产品的无故障及最佳使用的重要信息。
CE证书产品符合适用于CE规定的所有要求。
相应合格证的复印件函索即寄。
CE标志和相应合格证对该仪器是有效的。
当仪器– 连接到其它标有CE标志的 GE Healthcare 仪器上，或，– 连接到本手册中推荐或所述的其它仪器上, 和，– 除了在本手册中提到的变更外，按 GE Healthcare 所提供的说明使用。
警告本产品为A类产品。
在局部环境下，本产品可能引起无线电干扰，在此情况下用户可能需要进行适当的测量。
销售条款和规定除非另有书面协议，在 GE Healthcare 集团供应范围内，所有售出货物和服务都服从公司的销售条款和规定。
这些销售条款和规定的复印件函索即寄。
如果您对本产品有任何意见，我们将乐意接受。
请寄往：GE HealthcareSE-751 84 UppsalaSweden商标水滴图样, ÄKTA, ÄKTApurifier, UNICORN and Superloop 均为 GE Healthcare 的商标。
Amersham 和 Amersham Biosciences 为 GE Healthcare 的商标。
.Windows为Microsoft Corporation 的注册商标。
办事处地址GE HealthcareSE-751 84 UppsalaSwedenGE Healthcare 香港办事处香港九龙望角亚皆老街8号朗豪坊办公大楼12楼电话：（852）2100 6314传真：（852）2100 6338GE Healthcare 北京办事处北京市经济开发区永昌北路1号电话：（010）5806 9689传真：（010）6787 1162邮编： 100176GE Healthcare 上海办事处上海市虹桥开发区兴义路8号万都中心2401室电话：（021）5257 4650－67337传真：（021）5208 1282邮编： 200336GE Healthcare 广州办事处广州市建设六马路33号宜安广场1212室电话：（020）8363 3828－67961，67956 传真：（021）8363 3291邮编： 510060800热线：800－810－9118© GE Healthcare Life Sciences 2003版权- 所有权利受保护目录1关于本指南 (5)1．1 必要条件 (5)1．2 印刷上的规定 (5)2系统和软件 (6)2．1 概论 (6)2．2 UNICORN综述 (9)2．3 帮助 (11)3 建立方法 (12)4准备运行系统 (15)4．1 系统连接 (15)4．2 系统的一般准备 (16)4．2．1充满入口管道 (17)4．2．2 充满样品环 (17)5开始运行 (18)6查看运行 (23)7查看和打印结果 (26)7．1 查看 (26)7．2 打印和生成报告 (29)8缓冲液制备 (32)9探索 (34)10进一步应用 (36)索引（略）简短说明 (38)注意：本手册所涉及内容以英文原版为准1关于本指南本指南是为不熟悉UNICORN™ 软件和ÄKTApurifier™的用户而写的。
ÄKTA常见问题解决方案系统（System）Q：样品与缓冲液怎么脱气和过滤？A：溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤瓶过滤（如右图），并且在负压条件下保持10min脱气。
脱气的方法还包括：超声15min以上或者使用注射用水配制缓冲液。
对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，吸取上清。
Q：系统怎么保存？A：使用完毕，须用水将系统冲洗干净（关机前，电导检测数值<0.1ms/cm），之后用20%乙醇清洗系并保存所有的流路。
Q：系统的清洗？A：按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。
用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用中性的缓冲液（例如PBS）和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。
系统泵（Pump）Q：系统中进了气泡，怎么排除？A：排除气泡的方式有两种：system control→Manual→Pump→PumppurifierA/B，进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；或者将空注射器放置在泵头黑色接头处（如右图），拧开泵头，抽出气泡后，拧紧泵头即可。
Q：泵后润洗系统，如果进入气泡怎么处理？润洗液不循环，怎么处理？A：润洗系统只是起润滑作用，有小气泡不会影响缓冲液的系统或者进入柱子；如果有大段气泡影响润滑时，则将润洗瓶中有接头处接空注射器，将气泡抽出即可。
如果润洗液不循环，说明单向阀堵塞或损坏，可以使用超声清洗或更换。
紫外监测器(UV Monitor)Q：如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？A：可以使用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗；或者用注射器推10%的表面活性剂（如Decon90，Deconex11，DBS25，SDS等）注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗。
Q：怎么查看检测器的使用时间？A：三波长检测器灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time（如果>4000h，需要更换紫外灯）；光栅转动时间：面板菜单-Check-press OK-Check Flip Time （如果>2000h，需要维护）；紫外灯的能量：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity （如果灯的能量<20%，需要更换内部光纤）固定波长检测器灯使用寿命：（AKTApurifier UPC/FPLC）：灯的使用时间：面板菜单-Check-pressOK-Check Lamp Run Time，如果达到以下使用时间，需要更换相应灯——汞灯在254 nm的寿命，室温一般为7000h（冷室2000h)；汞灯在280 nm的寿命，室温一般为3500h；锌灯的寿命，室温一般为2000h；面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity. 如果灯能量小于以下数值，需要更换相应灯——R <300 mV for 254 nm ；R <150 mV for 280 nm；R<150 mV for 214 nm。
AKTApurifer层析仪操作规程
1、打开电脑和显示器，打开层析仪电源，等待仪器自检完成后，点击电脑桌
面上的UNICORN软件，输入用户名和密码进入软件控制系统。
2、系统清洗：依次用水和缓冲液。
A管放入A缓冲液中，B管放入B 缓冲
液中，进样阀4，5出口管和收集阀的废液出口接到废液瓶中，在System control窗口下，点击Manual打开pump菜单，选择PumpWashPurifier命令，指定冲洗液入口，执行。
样品环的清洗用注射器从进样阀3号位推入缓冲液，反复几次。
3、手动控制：在运行前设定Alarm & Mon 中的报警压力。
缓冲液平衡柱，
用注射器从进样阀3入口推入过滤好的样品，着路在样品环中。
待基线稳定后，在flowpath菜单中injectValve选择切换到inject状态上样，并在Alarm & Mon菜单中选autozeroUV 将紫外调零，上样后转换到load状态，进行样品的洗脱操作。
4、自动控制：先在Method Edit窗口中编辑好方法，然后用注射器从进样阀
3入口推入过滤好的样品着路在样品环中，在System control的窗口中直接按Run，调出编辑好的程序，按照提示将它运行。
5、纯化结束后，用水和20％乙醇依次清洗管路和保存。
如果用泵上样品，
运行PumpWashPurifier命令，将上样品的入口选中，并放置在1MNaOH 中，运行30min，然后用缓冲液，水和20％乙醇依次清洗和保存管路。
AKTApurifier层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。
若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。
一系统组件及系统功能介绍1系统组件(1)泵Pump系统泵：(systempump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。
(2)阀Valve三通阀：(SV-903)两个。
分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2,B1/B2)切换。
(3)(4)9002(1)(a)A、(b)pH(2)上样(4)收集二开机程序1开启电脑；2打开AKTApurifier电源；3启动UNICORN软件，输入用户名(Username)和密码(Password)，默认用户(default)密码为default，待AKTA自检结束后，在systemcontrol窗口中显示系统准备就绪（Instrumentsareready)。
三UUNICORN软件简介Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：Main:1.系统关闭(QuitProgram)和退出、登陆(Logon/off)；2.系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等；3.文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；4.方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。
MethodEditor:1.方法编辑；2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等）SystemControl:1.系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(RunMethod)；2.系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves；3.运行监测，有四个窗口：Rundata/Curves/Flowscheme/Logbook。
Evaluation:结果处理，如积分(intergrate)、移动(shift)、计算(Subtract/Add/Multiply/Divide)、平滑(Smooth)、截取(CutCurve)、绘制(CreatCurve)、打印(Print)等在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。
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教材内容一、ÄKTApure层析仪简明操作规程 (3)二、仪器常见维护保养 (5)1.每日维护 (5)2.每周维护 (5)3.每月维护 (6)三、ÄKTApure手动命令介绍 (7)1.开机 (9)2.实验前的准备 (10)3.手动命令控制层析实验 (14)4.校正 (30)5.清洗与关机 (32)四、脱盐演示实验 (35)1. 实验准备 (36)2. 准备收集器 (40)3. 手动运行实验 (40)4. 编辑方法自动运行脱盐实验 (43)5. 结果分析与讨论 (45)6. 清洗与关机 (45)五、方法编辑 (48)1.凝胶过滤方法编辑 (50)2.离子交换方法编辑 (58)3.层析柱CIP方法编辑 (63)4.Column Preparation方法编辑 (65)六、Evaluation (67)1.打开结果 (68)2.显示效果更改 (69)3.曲线积分 (70)4.查看数据点 (72)5.结果对比 (73)6.结果导出 (75)一、ÄKTApure层析仪简明操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（主机控制面板白灯常亮）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤（样品也可高速离心后取上清使用）。
缓冲液需在使用前用低频超声脱气15 min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道入口放入平衡缓冲液（binding buffer）中，将B1管道入口放入洗脱缓冲液（elution buffer）中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择execute manual instructions→pump →pump A wash和pump B wash，选中A1和B1入口，点击execute。
泵洗完成后自动停止。
4、安装层析柱在manual instructions里选择pump→system flow，输入流速1 ml/ml，insert；选择Alarms→alarm pre column pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
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您可以在本指南中学到UNICORN的基础知识以及如何从UNICORN操作ÄKTApurifier。
UNICORN是ÄKTApurifier色谱系统的一个控制和管理的软件包。
它在IBM兼容 PC机上Windows™下运行，并包括连结控制PC机与ÄKTApurifier色谱液体处理部件的硬件。
在本指南中，将学习到如何：• 建立方法• 准备运行系统• 完成运行• 简单求值• 生成报告• 完成自动方法优化（探索）• 自动地制备各种pH缓冲液（BufferPrep）在计算机前逐页领会指南。
时间就很容易度过。
注意：遵照说明进行不需要阅读包含在附加信息中的注释（这些注释用较小字体写出）1.1 必要条件系统使用前，阅读安装指南单行本：按指南中所述• 系统和软件必须安装并起作用，以及• 检测器和泵必须校准1.2 印刷上的规定菜单命令和对话框提示在文本中都是用黑体。
用冒号分隔菜单级别，如File:Open是指在File 菜单中的Open命令。
2. 系统和软件2.1 概论ÄKTApurifier是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起。
它们是：• Pump-900为双端口高效梯度泵系列。
在ÄKTApurifier 100，流速高达100 ml/min以上，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）在ÄKTApurifier 10，流速高达10 ml/min以上，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）• Monitor UV-900，同时监控190－700nm范围内高达3个波长的多波长UV-Vis监测器。
• Monitor pH/C-900*，在线电导和pH监测的组合监测器。
如果安装部分收集器，它应装在系统的右侧。
*选配件组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在系统的右侧。
分离装置由UNICORN软件控制。
图中：监测器pH/C-900、切换阀 A SV－903、切换阀B SV－903、电导流动池和出口阀PV908 为选配件。
P-900泵，监测器UV-900和监测器pH/C-900也可在没有UNICORN软件的情况下由模块单独控制。
但在本指南中，您将只学习如何从UNICORN操作色谱系统。
按位于底部平台前左侧的ON/OFF按钮，打开色谱系统。
注释：以下为在分离装置中的各组件和不同模块之间的流动路径和说明。
在您第一次运行时没有必要仔细通读本注释。
图中：部分收集器和出口阀为选配件。
1 泵有4个泵头，2个用于泵A，2个用于泵B。
泵A是最靠前面的一个。
2 缓冲液通过转换阀泵出，再进入混合器。
入口A1和B1分别插入缓冲液A和B中。
当用BufferPrep自动制备缓冲液时用入口A2和B2。
它们也可用于在方法运行期间更换缓冲液。
2流动路径继续从泵到混合器并向前经过在线滤器到注入阀。
4 样品环连接在注入阀的端口2和6之间。
样品环用注射器手工充满。
为此，连接一上样接口到注入阀的端口3上。
5液流经注入阀后，液流被导入柱中，然后向前进入到UV 流动池及电导流动池。
6 流动路径继续到限流器，[并通过pH流动池（选购）]，再向前到出口阀，出口阀用于转换出口液体流到废液瓶、部分收集器或出口收集。
7 如果需要，流动路径可继续流向部分收集器（选购）。
2.2 UNICORN 综述1 打开计算机。
先按Ctrl-Alt-Del登陆Windows，然后点击OK。
稍后出现Windows桌面。
2 在UNICORN图标上双击，起动UNICORN。
3 在开动期间，信息窗口出现。
4 在Logon对话框中，从Users列表中选择用户并输入密码。
如果您确是第一次登陆，选择用户default并输入密码default。
点击OK.。
注意：按常规在开始使用ÄKTApurifier前应输入用户名和个人密码。
5打开四个模块，并且它们各自的快捷键位于屏幕底部的任务栏中。
UNICORN Main Menu窗口出现在屏幕上。
6Main Menu窗口是UNICORN显示的主要部份，主要用于文件处理。
从此窗口您可通过控制系统来导航。
在Methods窗格到Main Menu左边，显示出您建立的所有方法文件。
一个方法文件包括一系列控制运行的指令。
在Results窗格右边，显示出所有的结果文件。
一个结果文件是一次运行的结果，包括所有的文档(例如所用方法) 和产生的色谱图。
总的来说，UNICORN由四个不同的模块组成，Main Menu是其中之一。
其余的模块在工具栏中用图标呈现。
这些模块是：• Method Editor（方法编辑器）打开有对话窗口的Method editor建立新方法。
• System control（系统控制）打开对话窗口控制系统和运行您的方法• Evaluation（数据处理）打开对话窗口求值您的结果。
要进行模块窗口之间的切换，在屏幕底部任务栏中点击其各自的按钮。
工具栏中还有其它按钮，这些按钮是：• Instant run（即时运行）打开对话框，在此您可直接挑选运行方法，对立刻开始常规运行很方便。
• Logon/Logoff（进入/退出）打开对话框，控制进入/退出程序。
• Method Queue*（方法队列）打开对话窗口，指定新的方法队列。
• Existing Method Queue（当前方法队列）打开对话窗口，显示正在运行的方法队列。
--------------------------------------------------------------------------------* Method Queue用于将几个方法连接到一起。
2.3 帮助全面的在线帮助是现成的。
要得到有关指令或模块的帮助，将光标放在指令/模块上，并按F1键。
或者，点击在每个模块右上角的Help菜单并选择Help for......，得到有关当前指令或模块的一般性的帮助，并找到新的帮助主题，或对特殊的主题选择Index。
在任何对话框中，要得到如何用当前活化的对话框来取得帮助点击Help按钮。
3 建立方法UNICORN软件供给一个方法向导程序（Methed Wizard）用于建立新方法。
此向导程序是帮助您建立方法的有问题和指令的许多对话窗口。
建立方法：1点击在Method Editor模块的Method Wizard图标。
如果需要，挑选您想要用的系统并点击OK。
Method Wizard窗口出现。
注意：通过点击Set Default您可以重建所有设置到默认值（只能在此对话框中进行）。
2 选择一色谱技术，例如，Anion-Exchange（阴离子交换）。
3 选择您打算要用的柱。
对应该柱的正确的柱体积、推荐的柱流速和正确的压力限制就将在方法中自动执行。
注释：如果您手动改变了默认值，并因此超过所选柱的推荐值，在您保存方法时将会得到警告。
