浅谈高效液相色谱仪的保养与维护

文件名称 岛津LC-20AT高效液相色谱仪使用、维护、保养操作规程

1.目的：建立岛津LC-20AT高效液相色谱仪维护操作规程，保证正确操作。

2.范围：适用于岛津LC-20AT高效液相色谱仪的维护操作。

3.责任：QC使用人员、维护人员。

4.内容：

4.1仪器组成：

脱气机：DGU-20A5R 四元低压泵：LC-20AT

自动进样器：SIL-20AC 柱温箱：CTO-20A

检测器A：SPD-20A 检测器B：RID-10A

4.2开机

4.2.1依次打开高效液相色谱仪“四元泵”、“进样器”、“柱温箱”“检测器（VWD/RID）”电源，仪器开机自检。

4.2.2打开数据采集器（电脑），按“Ctrl”+“Alt”+“Delete”，输入用户名与密码登录Windows系统

4.2.3双击击桌面上的图标，确认任务栏上SystemTray中的[LabSolutionsService]图标显示绿色。

4.2.4在弹出的对话框中输入用户ID与密码，单击“确定”登入LabSolutions

4.2.5在“LabSolutions主项目”视窗里单击[选择项目]，选择实验项目，单击确定

文件名称 岛津LC-20AT高效液相色谱仪使用、维护、保养操作规程

4.2.6在[仪器]栏选择所要联机的仪器，双击打开，进入数据采集界面，仪器显示“脱机”、“未就绪”或“就绪”状态

4.3数据采集

4.3.1点击数据采集界面菜单栏“”图标，点击“”或“” 打开或新建方法文件。若新建或修改方法，根据样品检验操作规程，对相应参数进行设置

4.3.1.1在[数据采集时间]项下设置“LC结束时间”并勾选所用的检测器，检测器A为VWD检测器、检测器B为RID检测器；在[时间程序]项下设置控制参数，[泵]项下

文件名称 岛津LC-20AT高效液相色谱仪使用、维护、保养操作规程

1 / 4 高效液相色谱仪的维护与保养

液相色谱仪应该进行适当的维护保养，维护保养按照维护频率分为日常维护、每周维护及每月维护。每周维护、每月维护活动均应记录在仪器维护记录本上。

1日常维护

1.1溶剂配制

所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水。

溶剂必须经过滤膜过滤，过滤水和有机相时应该选用不同的滤膜。纤维素膜主要用于水溶液，尼龙滤膜和PTFE膜均是通用型滤膜。常用0.45μm滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，建议使用0.22μm滤膜。

溶剂使用前必须脱气，常用超声脱气20-30min。

1.2开机

准备新鲜的纯水和有机溶剂以及方法所需的溶液。

按顺序打开仪器各组件电源→电脑电源→打开工作站。

确认工作站和仪器连接正常，通过工作站或手动打开排气阀，将需要用到的通道分别100%以流速3ml/min~5ml/min排气。（所需流量参考日常工作的排气流量）（多个泵同时排气容易对泵造成损耗，不建议！）

确认各通道排气完成后，关闭排气阀。用20倍以上的柱体积的有机溶剂冲洗系统。（注意：有机溶剂冲洗前需确认之前关机时已经移除系统中的缓冲盐）

调用运行方法，使用5~10倍柱体积的方法所需流动相比例平衡系统。平衡系统前用所需方法的流动相比例在排气阀打开的情况下以3ml/min~5ml/min运行一段时间，让泵中的流动相比例快速达到所需的流动相比例。

更换洗针溶剂、更换密封垫清洗溶剂。

1.3试验中注意

1.3.1流动相

在选择A、B、C、D泵放置流动相时，将盐溶液连接在一个底部梯度阀端口上，有机溶剂连接在一个上部梯度阀端口上。最好使有机溶剂通道位于盐溶液通道的正上方。

最好不要将纯水溶液作为流动相的一组，如果使用了水相作为流动相的一组，应注意定期更换、过滤溶剂，不应超过2天，避免阳光直接照射。如果试验允许，可向水相中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。

1.3.2色谱柱

使用流动相前千万注意，流动相与色谱柱内的保存溶剂和系统内存留溶剂的混溶性，避免形成乳化小液滴，从而毁坏柱子。可以使用异丙醇作为过渡溶剂。

高效液相色谱系统的维护与保养大连依利特分析仪器有限公司

１．　流动相

Ø保持贮液瓶清洁，定期清洗或更换；Ø尽量使用ＨＰＬＣ级溶剂和试剂；

Ø含有缓冲盐和非ＨＰＬＣ级的流动相一定要过滤；Ø含有缓冲盐的流动相应现用现配，防止微生物生长和组分改变。

更换流动相注意事项

高效液相色谱常用的流动相包括多种

有机溶剂、水、各种缓冲溶液等，它们之

间存在互溶性的问题，同时也存在缓冲溶

液盐析出的问题。

更换互溶性流动相将新流动相置于储液瓶中。１．打开放空阀，启动泵使新的流动相从放空阀出口流出

２０ｍＬ左右。２．关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，

用小容器放置于进样阀的出口处。３．启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出１０ｍＬ左右。

４．重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约３０倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，流动相更换完毕。

更换非互溶性流动相

１．用中介溶剂更换泵中的旧流动相（不要接色谱柱）。

２．如果色谱柱中流动相也需要更换，用该溶剂冲洗色

谱柱。

３．用新流动相更换中介溶剂。

更换缓冲液流动相

１．用５％～２０％甲醇水更换色谱系统中缓冲液（包括色谱柱）　。（非常重要）２．用新流动相更换过渡溶剂。

３．由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液时容易将缓冲液中的盐结晶出来，而结晶盐对

密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子和定子都有很大的损坏，也容易阻塞输液管路，因此要特别仔细操作。４．用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵，照以上步骤更换溶剂，然后用纯甲醇或乙腈冲洗。

泵的密封圈的维护保养：

Ø每天要把泵中的缓冲液冲洗干净，防止盐沉积；

Ø用ＨＰＬＣ级试剂；

Ø用烧结不锈钢吸液过滤头；泵的密封圈是泵

最易磨损的部件２．泵头

３．　进样阀

Ø最易磨损：转子密封Ø保养事项：

１、样品进样前要过滤；２、停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留样品和缓冲盐；３、不要用气相色谱用的尖头针进样。

４．　检测器

Ø保持检测器清洁，每天与色谱柱一同清洗；

Ø用脱过气的流动相，防止空气卡在检测池内；

高效液相色谱日常简易保养及维护

高效液相色谱日常简易保养及维护

1、流动相的制备要求：

高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；

流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法）

2、吸滤头：

特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；

清洗不成功则需要更换。

3、单向阀：

如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放臵在小烧杯中，切记不可与安装方向倒臵超洗！

4、泵头：

泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修（如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等）

5、过滤器：

当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。

6、排液阀：

此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。

7、手动进样器：

平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。

8、流通池：

在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗（可根据说明书进行操作或申请维修）。

9、工作站：

出现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；

或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。

泵压不稳

1、泵头有气泡——流动相脱气/大流量冲洗泵/用注射器抽取流动动相

2、单向阀故障——清洗

若上述操作仍不能解决，可用异丙醇冲洗流动（无色谱柱冲洗，由手动进样器直接进检测器），流量为3-4ml/min,冲洗50分钟左右，然后重新安装色谱柱，更换流动相平衡，如此再不能解决泵压波动故障，可申请更换配件。缓冲盐的使用

流动相含有盐分时，做完实验后一定要进行流路冲洗；

首先用水冲洗，打开排液阀用PURG键转换出原有含盐的流动相，然后关闭排液阀打开泵冲洗全部流路45分钟以上，如此更换流动相为水和甲醇混合液冲洗全部流路30分钟（此步骤一般可省去，根据实验而论），最后更换纯甲醇冲洗全部流路10分钟以上。