(完整版)无菌检测标准操作规程(培养法)

1 范围适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。

无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。

2 引用标准GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。

第2部分:生物学试验方法。

《中华人民共和国药典（2015年版）》菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行3器材及试剂3.1器材:a)试管b)酒精灯c)75%乙醇棉d)灭菌刻度吸管(1mL)e)灭菌平皿(9cm)f）勺锥形瓶g)三角烧瓶h)灭菌剪刀、镊子i)恒温培养箱j)生化培养箱k)高压蒸汽灭菌器l)电热千燥箱3.2培养基及试剂:a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。

3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。

4实验操作:4.1实验前准备:4.1.1培养基要求:用于培养需(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典(二部)》附录中《无菌检查法》的规定。

培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。

制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。

培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

4.1.2器具灭菌:与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min,或置电热干燥箱内160℃——2h。

无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。

2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。

4. 职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。

5.程序：5.1. 定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。

5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。

5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。

5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒子监测规程（SOP ZL0005）。

实验设备及用具：5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。

5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。

5.3.3.除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。

5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。

5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。

5.5. 培养基：5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。

5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。

5.6. 对照用菌液：5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。

无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。

临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。

二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。

2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。

3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。

4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。

(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。

1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。

无菌检查操作规程(doc 8页)1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。

3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。

4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。

5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。

在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。

缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。

在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内（饭第3页/共7页盒）一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。

5.2.2.5滤器将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡湿润，取出后固定在细菌过滤器的滤板上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。

在灭菌前滤器的螺勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入容器内，再将盛滤器的容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。

5.2.3用具的灭菌：将包扎好的用具，在121±0.5℃蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易致染菌，应置温箱或或加温烘干。

5.3培养基、试剂：5.3.1一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。

使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经30-35℃培养48小时，真菌培养基须经20-25℃培养72小时，证明无菌生长后方可使用。

无菌技术操作规范(精选)无菌技术操作规范(精选)无菌技术在现代医学和生物科学中扮演着重要的角色，它用于细胞培养、微生物实验以及手术等领域，帮助保持实验环境的纯净和减少病原体的传播。

为了确保无菌技术操作的准确性和有效性，下文将介绍一些关键的无菌操作规范。

一、实验前准备在进行无菌实验之前，必须做好充分的准备工作。

首先，工作区域必须清洁整齐，并经过消毒处理。

使用消毒剂擦拭所有的工作台面、器械、培养皿和试管等。

同时，确保操作者身穿无菌手套和实验服，以减少人体污染。

二、操作前检查在进行无菌操作之前，必须检查所有操作所需器材的无菌状态，包括培养皿、培养基和培养液等。

检查培养皿是否有裂纹、污染或已经褪色。

检查各种培养基和培养液是否超过保存期限或者已经变质。

三、细胞接种和分装在细胞接种和分装过程中，必须严格遵循无菌操作规范。

首先，将需要操作的细胞培养物置于无菌工作台上，将培养皿轻轻打开。

然后，将培养物从培养皿中提取出一定数量的细胞悬液，使用无菌材料进行分装到需要的培养皿中。

操作完成后，确保培养皿盖子紧密关闭，减少外界的污染。

四、灭菌操作在实验室中，灭菌操作是十分重要的环节，它能有效地杀灭病原菌和杂菌，确保实验结果的可靠性。

一般来说，有两种常用的灭菌方法：湿热灭菌和化学灭菌。

湿热灭菌是将操作器械放入高温高压的蒸汽器中进行灭菌。

化学灭菌则是使用消毒剂如酒精、漂白粉等对器材进行处理。

五、防止交叉污染为了避免交叉污染的发生，必须保持操作区域的干净和整洁，并严格分区。

每个区域必须配备相应的器材，且不可随意混用。

擦拭工作台面和器材时，应使用不同的工具和消毒纸，防止不同区域之间的污染。

六、无菌技术操作中常见问题及解决方法在无菌操作中，有一些常见问题需要注意。

例如，培养皿无法密封、培养液发霉或者无法成功进行细胞接种等。

面对这些问题，操作者应当保持冷静，并及时进行问题排查和解决。

可以更换培养皿或培养液，确保器械和培养物的无菌状态，以保证实验结果的准确性。

无菌检验操作规程无菌检验操作规程一、目的和适用范围为了保证实验室无菌检验的准确性和可靠性，规范无菌检验操作，并确保实验室工作人员的安全和健康，特制定本操作规程。

本操作规程适用于实验室进行无菌检验的所有工作，包括培养基制备、无菌器具处理、样品采集和处理、培养方法等方面。

二、基本要求1. 实验室应具备无菌检验所必需的设施和设备，并保持良好的清洁卫生环境。

2. 实验室工作人员应严格按照操作规程进行操作，并保持良好的个人卫生习惯。

3. 实验室应保证培养基的质量，确保无菌性和适用性。

4. 实验室应建立必要的记录和档案，对无菌检验的结果进行及时记录和分析。

三、无菌器具处理1. 确保无菌器具的质量，每批次器具在使用前应进行质量检验。

2. 器具的清洗和消毒应在专门的消毒台上进行，使用无菌的工具和材料。

3. 清洗器具时应使用无菌特效洗涤剂，并充分冲洗干净。

消毒时应使用适当浓度的消毒剂，消毒时间应符合标准要求。

4. 清洗后的器具应存放在无菌柜或密封的袋子中，以防再次污染。

四、样品采集和处理1. 采集样品前，要对采样器具进行清洁和消毒处理，并使用无菌容器保存样品。

2. 采样时要保持无菌采样器具的封闭性，避免外界环境的污染。

3. 对于液体样品，应在无菌操作台上进行，严禁倒杯操作。

对于固体样品，应在无菌条件下处理。

4. 样品采集完成后，应及时将采样器具和容器送到实验室，并妥善保存，以防止再次污染。

五、培养基制备1. 制备培养基的操作应在无菌操作台上进行，工作台面应经过清洁和消毒处理。

2. 使用的培养基应经过质量检验，确保无菌性和适用性。

3. 制备培养基时，要注意保持操作的无菌性，避免污染。

4. 制备完成的培养基应标明名称、批号和有效期，并妥善保存，避免污染和变质。

六、培养方法1. 培养前要将培养基及所需器具放置在无菌操作台上，以使其达到与环境相同的温度。

2. 培养时要保持培养器具的密封性，避免外界空气和微生物的污染。

3. 培养容器的开启和关闭要快速，并尽量避免与空气接触时间过长。

无菌检查.操作规程无菌检查是指对无菌状态的物品、器械、培养基等进行检查，以确定其是否具有无菌性的一种操作。

无菌检查主要是为了保证医疗器械和药品的质量，防止传播致病菌和交叉感染。

下面是无菌检查的操作规程，共1200字。

一、仪器与试剂准备1. 玻璃器皿：无菌检查中常使用的玻璃器皿应先清洗，然后用高压蒸汽高温灭菌。

确保玻璃器皿表面没有任何污物和细菌。

2. 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、肉膏琼脂等。

使用前应检查培养基包装是否完好，是否过期，如有问题应废弃，以免影响检测结果。

3. 培养皿：无菌培养皿应提前准备好，如果有无细菌培养基的培养皿，最好优先选择使用。

4. 培养皿贴壁：无菌贴壁是为了避免液体滴入培养皿内引起细菌污染，使用前应检查贴壁是否完好。

5. 双口试管：用于无菌培养物的传递，提前准备好。

二、人员准备工作1. 手部卫生：进行无菌检查前，操作人员应进行手部卫生，包括洗手和消毒。

先用流动水清洗手部，然后使用75%酒精进行消毒。

2. 穿戴无菌操作服：无菌检查需要穿戴无菌操作服，操作服要求干净、整洁，且经过高温蒸汽灭菌。

穿戴手套前，应先检查手套是否完整、无损。

3. 工作台表面消毒：将工作台表面用70%酒精进行擦拭消毒，确保无菌操作环境。

三、操作步骤1. 取一份待检物品：如医疗器械或药品，然后进行外观检查。

确保物品包装完好，无明显损伤和破损。

2. 打开培养皿：将培养皿的盖子拉开一些，方便后续操作。

3. 将待检物品放入培养皿：用镊子或无菌力ps，将待检物品放入培养皿内，尽量避免让待检物品直接接触培养皿的边缘。

4. 培养皿倒置：将培养皿倒置放于工作台上，检查物品是否有菌落生成。

5. 灭菌培养皿口：用长火柴将培养皿上的边缘逐一燃烧，防止细菌飞溅和传播。

6. 检查结果：观察培养皿上是否有菌落生成。

如果有菌落，则证明待检物品不符合无菌要求；如果无菌皿上没有菌落生成，则证明待检物品具有无菌性。

7. 结果记录：将无菌检查结果记录在检验记录表格上，包括待检物品的名称、批号、检查日期等信息。

目的:制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范围:本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。

责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容:1、标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H.2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法.检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查.若供试品符合该项检查方法的有关规定,仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。

3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。

其全过程必须严格遵守无菌操作.防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出.操作前环境洁净度应经验证。

日常检验需对试验环境进行监控.5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。

4、人员要求:无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。

6、检验数量及检验量：6。

1、接种每种培养基所需的最少检验数量：2％或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法,应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。

6。

2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量(100ml≤V≤500ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤.7、细菌培养温度为30~35℃，真菌培养温度为23~28℃。

8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头)、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、HTY智能全封闭集菌仪、一次性使用集菌培养器.9、消毒剂配制：9。

1、75%乙醇溶液（配制酒精棉球用).9。

2、0。

2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。

9。

3、2％来苏尔溶液(配制消毒棉球用）。