小鼠肾脏石蜡永久制片结果分析报告
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病理标本观察实验报告总结一、实验目的本次实验的目的是通过对病理标本的观察,了解病理学基本概念和常见疾病的病理变化,以及掌握常用病理标本处理技术。
二、实验过程1. 病理标本制备:将小鼠肝脏、心脏、肾脏等器官取出,用生理盐水清洗后固定在10%中性缓冲福尔马林溶液中。
2. 石蜡包埋:将固定好的组织标本经过甲醇梯度脱水后,用乙醇和苯并加入适量的石蜡进行包埋处理。
3. 切片染色:将包埋好的标本切成5μm厚度的切片,然后进行染色处理。
其中常用的染色方法有HE染色、Masson染色等。
三、实验结果1. 小鼠肝脏切片观察:肝细胞排列紧密,中央静脉周围有明显血窦。
HE染色显示肝细胞核大而圆,胞浆呈深粉红色。
Masson染色显示纤维化程度较轻。
2. 小鼠心脏切片观察:心肌细胞排列整齐,有明显的纵横交错的纤维。
HE染色显示心肌细胞核圆形,胞浆呈深粉红色。
Masson染色显示心肌纤维化程度较轻。
3. 小鼠肾脏切片观察:肾小球内有明显毛细血管丛,肾小管排列整齐。
HE染色显示肾小球内有明显的Bowman囊和肾小管,核呈圆形或椭圆形。
Masson染色显示肾小球内无明显纤维化。
四、实验分析通过对病理标本的观察,我们可以发现不同器官在组织结构上存在差异。
例如,肝脏中央静脉周围有血窦,而心脏和肾脏则不存在这种结构。
同时,在不同染色方法下,我们也可以观察到不同的病理变化。
例如,在Masson染色下,我们可以看到组织中是否存在明显的纤维化。
五、实验总结通过本次实验,我们了解了病理学基本概念和常见疾病的病理变化,掌握了常用病理标本处理技术。
同时,我们也发现了不同器官在组织结构上的差异以及不同染色方法下观察到的病理变化。
这对于我们进一步深入学习病理学知识具有重要意义。
石蜡切片制作实验报告(二)石蜡切片制作实验报告实验目的掌握石蜡切片的制作方法,了解其在生物学研究中的应用。
实验原理通过将样品置于石蜡中,使其固定后切割成薄片,然后染色观察样品中的细胞和组织结构。
实验材料•组织样品•石蜡•石蜡切片机•切片染色盒•水、乙醇、甲醇等试剂实验步骤1.取适量的组织样品,放入石蜡中固定。
2.用石蜡切片机将固化后的石蜡和组织样品切割成薄片。
3.用甲醇或乙醇脱除石蜡。
4.进行染色处理,如使用伊红染色。
5.将染好色的切片放入切片染色盒中,加入水并覆盖。
实验结果通过显微镜观察切片中的细胞和组织结构,可窥见其微观世界。
依据样品的不同,可看到各种细胞器、细胞分裂、组织的形态、结构和功能等信息。
实验注意事项1.操作时应戴手套和护目镜以保护手部和眼睛。
2.切片机的切割速度应适中,避免快过头造成样品损伤。
3.染色剂应均匀覆盖于切片表面,以免造成不必要的误差。
实验结论石蜡切片技术是生物学科研中必不可少的一种技术手段,能够突显样品中的微观结构,帮助科研工作者更好地了解和研究生物体的各种组织和器官。
实验应用石蜡切片技术在生命科学与医学领域得到了广泛的应用,如: - 组织学研究:观测组织中各种细胞器、细胞分裂、细胞凋亡等现象。
- 免疫学研究:确定免疫组织化学定位,如免疫组织化学染色等。
- 病理学研究:观测肿瘤等病理组织的构造特征。
- 分子生物学研究:观测基因的表达、蛋白质的结构等。
- 药理学研究:观察药物对细胞和组织的影响。
实验可能出现的问题及解决方法1.样品切面出现粗糙、污染现象:可能是切割速度太快,应适当降低切割速度。
2.切片中出现气泡或破损:可能是样品固定不够完整或者太多切片被叠加在一起,应减少切割深度或重新采集样品。
3.切片上未能完全染色:可能是涂抹染色剂时没有均匀涂抹,应均匀涂抹液体染色剂或更换染色试剂。
4.显微镜观察时出现模糊影响:可能是显微镜镜头或平台不够清洁,应及时清理。
结语石蜡切片技术是生物学研究中不可或缺的重要手段,在多个领域都得到了广泛应用。
小鼠肾脏病理切片的解读需要考虑肾脏的结构和功能,以及可能出现的各种病理变化。
肾脏的基本功能是生成尿液,借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物,同时经重吸收功能保留水分及其他有用物质,以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。
肾脏的内部结构,可分为肾实质和肾盂两部分。
肾实质分内外两层:外层为皮质,内层为髓质。
肾皮质位于肾实质表层,富含血管,新鲜时呈红褐色,由一百多万个肾单位组成。
每个肾单位由肾小体和肾小管所构成,肾单位是肾脏结构和功能的基本单位。
在解读肾脏病理切片时,我们需要关注肾小体、肾小管和肾间质等不同结构的病理形态。
例如,肾小球纤维素样坏死的病理形态相较于正常样品,肾小球毛细血管壁坏死,成细丝状或颗粒状红染物,似纤维素。
弥漫增生性肾小球肾炎的病理形态相较于正常样品,由于内皮细胞和系膜增生,所以毛细血管球增大,细胞数目增多,肾小球囊腔狭窄,炎细胞浸润。
肾小管疾病的类型及其病理形态包括肾小管坏死和肾小管上皮细胞水肿变性²。
肾小管坏死的病理形态表现为肾小管上皮崩解,细胞碎片阻塞管腔²。
肾小管上皮细胞水肿变性的病理形态表现为肾小管上皮细胞肿胀,凸向管腔²。
肾间质疾病的类型及其病理形态包括急性过敏性间质性肾炎和肾盂肾炎。
急性过敏性间质性肾炎的病理形态表现为肾间质水肿,伴少量炎症细胞浸润。
肾盂肾炎的病理形态表现为肾盂中大量炎细胞聚集浸润。
这些都是一些基本的病理形态,具体的切片解读可能需要根据实际的病理切片和临床情况进行。
如果你需要更具体的帮助,建议你提供更多的信息,或者直接咨询相关的病理专家。
小鼠肾脏石蜡永久制片结果分析报告一、引言肾脏是小鼠体内重要的排泄和调节器官,对其进行组织学研究有助于深入了解小鼠的生理和病理状态。
本报告旨在对小鼠肾脏石蜡永久制片的结果进行详细分析。
二、材料与方法(一)实验动物选用健康成年小鼠若干只,体重在 20 25 克之间。
(二)样本采集与处理在无菌条件下,迅速取出小鼠肾脏,用生理盐水冲洗干净,然后将其放入 10%中性福尔马林溶液中固定 24 小时。
(三)石蜡包埋与切片经过固定的肾脏组织依次进行脱水、透明、浸蜡和包埋处理。
使用切片机将包埋好的组织切成 4 5 微米厚的切片。
(四)染色采用苏木精伊红(H&E)染色法对切片进行染色。
(五)显微镜观察与图像采集在光学显微镜下观察切片,并使用图像采集系统获取图像。
三、结果(一)肾小球肾小球呈圆形或椭圆形,由毛细血管袢组成。
在正常情况下,肾小球的毛细血管内皮细胞、基底膜和足细胞结构完整。
毛细血管腔通畅,无明显的狭窄或扩张。
(二)肾小管肾小管包括近曲小管、远曲小管和集合管。
近曲小管上皮细胞呈立方形,胞质嗜酸性较强,刷状缘明显。
远曲小管上皮细胞较矮,胞质嗜酸性较弱,无刷状缘。
集合管管径较大,上皮细胞为立方形或柱状。
(三)肾间质肾间质为少量结缔组织,其中可见成纤维细胞、巨噬细胞等。
间质内血管分布正常,无明显的炎症细胞浸润。
(四)异常发现在部分切片中,观察到肾小球毛细血管基底膜增厚,这可能提示肾小球的滤过功能受到一定影响。
此外,少数肾小管上皮细胞出现空泡变性,可能与细胞代谢紊乱有关。
四、讨论(一)肾小球基底膜增厚肾小球基底膜增厚是多种肾脏疾病的早期表现之一。
其原因可能包括免疫复合物的沉积、代谢紊乱、遗传因素等。
进一步的研究需要结合免疫组化等技术,确定是否存在特定的蛋白质沉积。
(二)肾小管上皮细胞空泡变性空泡变性可能是由于细胞内脂肪代谢异常、水分积聚或毒素损伤所致。
需要考虑小鼠的饮食、环境因素以及是否存在潜在的感染等,以明确导致这一变化的具体原因。
一、实验目的1. 了解石蜡制片的基本原理和操作步骤。
2. 掌握石蜡制片法在组织切片中的应用。
3. 提高实验操作技能,为后续病理学实验奠定基础。
二、实验原理石蜡制片法是一种常用的组织切片技术,其原理是将组织经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤,制成石蜡切片,便于观察和研究。
石蜡具有优良的透明性和可塑性,适用于制作较厚的切片。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜组织、固定液、70%、85%、95%、100%酒精、二甲苯、甘油蛋白、石蜡、载玻片、切片刀、切片机、烤箱、显微镜等。
2. 实验仪器:解剖针、眼科镊子、手术刀、量筒、漏斗、滴管、酒精灯、小木块、切片木框、切片盒、吸水纸、标签纸、熔蜡箱、展片台、真空泵等。
四、实验步骤1. 取材:将新鲜组织固定于4%多聚甲醛24小时以上,取出后修整平整,放入脱水盒内。
2. 脱水:将脱水盒放入吊篮,于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
具体步骤如下:- 75%酒精1小时- 85%酒精1小时- 90%酒精1小时- 95%酒精1小时- 无水乙醇I 30分钟- 无水乙醇II 30分钟- 醇苯5-10分钟- 二甲苯I 5-10分钟- 二甲苯II 5-10分钟- 蜡I 1小时- 蜡II 1小时- 蜡III 1小时3. 浸蜡:将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出,按照包埋面的要求放入包埋框并贴上标签。
于-20℃冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4. 切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚约4微米。
切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烤箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
5. 染色:将石蜡切片依次放入二甲苯、无水乙醇、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精中脱蜡至水,然后进行HE染色。
6. 洗片:将染色后的切片放入清水中洗去浮色。
7. 晾干:将切片放入干燥箱中晾干。
石蜡切片的实验报告石蜡切片的实验报告石蜡切片是生物学和医学领域中常用的技术手段,它可以将组织样本固定在切片上,以便于观察和分析。
本次实验旨在探究石蜡切片技术的原理、步骤和应用。
一、石蜡切片技术的原理石蜡切片技术是一种常用的组织学研究方法,它的原理基于石蜡的透明性和稳定性。
石蜡是一种具有较高熔点的蜡状物质,具有良好的剪切性和切片稳定性。
在进行石蜡切片前,需要将组织样本进行固定、脱水和浸渍处理,使其具备适合切片的性质。
然后,将固定好的组织样本浸入石蜡中,石蜡渗透进入组织细胞中,将其包裹在石蜡中形成固定的切片。
最后,使用显微镜对切片进行观察和分析。
二、石蜡切片的步骤1. 组织样本的固定:将组织样本取出后,迅速进行固定处理。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等,可以使组织样本保持原有的形态结构。
2. 脱水处理:将固定好的组织样本进行脱水处理,以去除组织中的水分。
脱水过程中,需要逐渐使用浓度递增的酒精进行浸泡,使组织逐渐脱水至无水状态。
3. 浸渍处理:将脱水后的组织样本浸泡在石蜡溶液中,使其充分浸渍。
浸渍时间根据组织样本的大小和类型而定,一般需要数小时至数天。
4. 石蜡包埋:将浸渍好的组织样本放入石蜡模具中,加热使石蜡融化,将组织样本包裹在石蜡中。
包埋过程中需要控制温度和时间,以确保石蜡充分渗透到组织中。
5. 石蜡切片:使用石蜡切片机将包埋好的组织样本切割成薄片。
切片时需要调整切片机的切割速度和刀片的角度,以获得理想的切片质量。
6. 切片染色:将切好的石蜡切片进行染色处理,以增强组织结构的对比度和可见性。
常用的染色方法有血液学染色、组织学染色等。
7. 显微镜观察:将染色好的石蜡切片放置在显微镜下进行观察和分析。
通过显微镜的放大功能,可以清晰地观察到组织样本的细胞结构和组织构成。
三、石蜡切片技术的应用石蜡切片技术在生物学和医学领域中有广泛的应用。
首先,它可以用于病理学研究,帮助医生诊断和治疗疾病。
通过观察石蜡切片下的组织结构,医生可以了解病变的类型、程度和分布情况,从而制定相应的治疗方案。
石蜡切片实验报告(一)石蜡切片实验报告摘要•石蜡切片实验是一种常用的组织学技术,用于研究生物组织的结构和功能。
•本报告通过对石蜡切片实验的描述和结果分析,总结了该实验的步骤和注意事项。
引言•石蜡切片实验是一种常用的技术,被广泛应用于医学、生物学等领域。
•本报告旨在总结石蜡切片实验的基本原理、步骤和注意事项,并分析实验结果。
实验原理•石蜡切片实验是一种将生物组织固定、浸泡、包埋和切割的方法。
•通过该实验可以获取生物组织的切片,用于观察细胞结构和功能。
实验步骤1.生物组织固定:将待实验组织固定在适当的固定液中,以保持细胞的形态。
2.组织浸泡:将固定后的组织浸泡在逐渐浓度上升的酒精溶液中,以去除水分。
3.组织包埋:将浸泡后的组织置于熔化的石蜡中,使其逐渐渗透和包埋。
4.组织切割:将包埋好的组织用切片机切割成薄片,通常为5-10微米厚。
5.切片染色:将切割好的组织片进行染色,以突显细胞结构和功能。
6.切片封装:将染色好的组织片放置在玻璃载板上,并用封片剂封装,以保护切片。
实验注意事项•实验过程中需注意个人安全,避免与切割仪器和刀片直接接触。
•切片时需控制切片机的速度和厚度,以获得理想的切片质量。
•染色时需掌握适当的染色时间和浓度,避免染色过度或不足。
实验结果与讨论•通过石蜡切片实验,我们成功获取了生物组织的切片。
•切片经过染色后,细胞核、细胞质和细胞器可以清晰地观察到,有助于进一步研究组织的结构和功能。
•实验结果表明,石蜡切片实验是一种可靠、高效的技术,适用于各种生物组织的研究。
结论•本报告总结了石蜡切片实验的步骤和注意事项,并分析了实验结果。
•通过石蜡切片实验,我们可以观察和研究生物组织的结构和功能,为相关领域的研究提供重要数据支持。
第1篇一、实验背景石蜡切片技术是组织学、病理学等领域中常用的制片方法之一。
通过石蜡切片,可以观察到组织细胞的细微结构和形态变化,为疾病的诊断、治疗和科研提供重要的依据。
本实验旨在通过石蜡切片技术的操作,掌握石蜡切片的制作过程,了解其原理和应用,为后续相关实验和研究奠定基础。
二、实验目的1. 理解石蜡切片技术的原理,掌握石蜡切片的制作步骤。
2. 学习并熟练使用石蜡切片相关实验器材,如切片机、烤箱、显微镜等。
3. 掌握组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等石蜡切片技术的基本操作。
4. 通过石蜡切片观察,了解组织细胞的结构和形态变化,为后续实验和研究提供参考。
5. 提高实验操作技能,培养严谨的实验态度和团队协作精神。
6. 掌握石蜡切片技术在临床病理诊断和科研中的应用价值。
三、具体实验目的1. 理解并掌握组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等石蜡切片技术的基本原理和操作步骤。
2. 熟练使用切片机、烤箱、显微镜等实验器材,确保实验操作的顺利进行。
3. 学习并掌握石蜡切片的染色技术,如苏木精-伊红染色法(H.E染色法),以便观察组织细胞的细微结构和形态变化。
4. 通过石蜡切片观察,了解不同组织、不同疾病状态下细胞的结构和形态变化,为临床病理诊断提供依据。
5. 分析实验结果,总结石蜡切片技术在临床病理诊断和科研中的应用价值。
6. 结合实验操作,探讨石蜡切片技术在实际应用中可能遇到的问题及解决方法。
7. 通过实验报告撰写,提高写作能力和实验总结能力。
四、实验内容1. 组织固定:采用4%多聚甲醛固定新鲜组织,确保组织结构的完整性。
2. 脱水:将固定后的组织依次浸入不同浓度的酒精溶液中,去除组织中的水分。
3. 透明:将脱水后的组织浸入不同浓度的醇苯溶液中,使组织达到透明状态。
4. 浸蜡:将透明后的组织浸入石蜡中,使组织完全浸渍在石蜡中。
5. 包埋:将浸蜡后的组织放入融化的石蜡中,制成蜡块。
6. 切片:将蜡块置于切片机上,进行切片,切片厚度为4μm。
石蜡切片实验报告石蜡切片是一种常用的组织学实验技术,已经被广泛应用于医学、生物学等领域。
本实验报告将详细介绍石蜡切片实验的步骤、原理以及实验中可能遇到的问题和解决方案。
第一部分:实验步骤石蜡切片实验的步骤主要包括标本制备、石蜡浸渍、切片和染色几个关键环节。
首先,我们需要收集适当的组织标本,如动物器官或植物组织。
这些标本需要经过固定处理,通常使用福尔马林进行固定,然后进行脱水和透明化处理,最终被浸渍进入石蜡中。
在石蜡浸渍的过程中,我们需要将标本逐渐浸入温度逐渐升高的石蜡中,以使其充分浸渍并软化。
这个过程中需要注意温度的控制,同时还要避免气泡的产生。
一旦标本被完全浸渍在石蜡中,我们可以使用石蜡切片机进行切片。
在切片过程中,我们需要调整切片机的切片厚度,通常为4-6微米。
此外,为了得到较好的切片质量,我们还需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当。
切片完成后,我们需要将切片置于载玻片上,并进行染色处理。
染色可以提高组织的对比度,使细胞和组织结构更加清晰可见。
常用的染色方法包括血液学染色、核染色和生物标记染色等。
第二部分:实验原理石蜡切片实验的原理是基于石蜡的高渗透性和易于切割的特点。
通过浸渍和固化过程,标本会充分浸泡在石蜡中,使其变得坚硬而易于切割。
切片机通过旋转刀片来切割标本,形成薄而均匀的切片。
石蜡切片实验的目的是为了观察和研究细胞和组织的结构。
通过切片和染色,我们可以清晰地看到细胞的形态、组织的排列以及细胞内的细胞器结构。
这对于研究疾病的发生机制、药物治疗的效果评估以及生物学基础研究等方面都具有重要意义。
第三部分:实验问题与解决方案在石蜡切片实验中,可能会遇到一些常见的问题,如切片不均匀、切片断裂或组织变形等。
这些问题可能会影响实验的结果和观察效果。
为了解决这些问题,我们可以在实验过程中采取一些措施。
首先,在标本制备过程中,我们可以控制好固定时间,避免过长或过短的固定时间导致的组织变形。
其次,在切片机操作过程中,我们需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当,以避免切片不均匀或切片断裂的问题。
石蜡切片实验报告一、实验目的石蜡切片技术是组织学、病理学等研究中常用的一种实验方法。
本次实验的目的是通过石蜡切片的制作过程,掌握组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、染色和封片等一系列操作步骤,以便能够清晰地观察组织结构和细胞形态,为后续的研究和诊断提供可靠的依据。
二、实验材料与设备1、实验材料新鲜的组织样本(如肝脏、肾脏、肌肉等)甲醛溶液(用于固定)乙醇(不同浓度,用于脱水)二甲苯(用于透明)石蜡(用于浸蜡和包埋)苏木精伊红染液(H&E 染液,用于染色)2、实验设备切片机烤箱水浴锅显微镜镊子、剪刀、载玻片、盖玻片等三、实验步骤1、组织固定将新鲜的组织样本切成适当大小(约 1cm×1cm×05cm),迅速放入甲醛溶液中进行固定。
固定的时间根据组织的大小和性质而定,一般为 12 24 小时,以确保组织中的蛋白质和其他成分得到良好的固定,保持细胞形态和结构的完整性。
2、脱水固定后的组织依次放入浓度递增的乙醇溶液中进行脱水,具体步骤为:70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇 100%乙醇,每个浓度浸泡1 2 小时。
脱水的目的是去除组织中的水分,为后续的透明处理做好准备。
3、透明脱水后的组织放入二甲苯中进行透明处理,浸泡时间约为 1 2 小时。
二甲苯能够替代组织中的乙醇,使组织变得透明,以便后续的浸蜡操作。
4、浸蜡将透明后的组织放入已融化的石蜡中进行浸蜡,温度控制在 60 65℃,浸蜡时间为2 4 小时。
浸蜡的过程是让石蜡逐渐渗透到组织中,为包埋提供条件。
5、包埋预先准备好包埋模具,将浸蜡后的组织放入模具中,倒入融化的石蜡,使其完全覆盖组织,然后将模具放置在冷台上冷却,使石蜡凝固,形成组织蜡块。
6、切片使用切片机将蜡块切成厚度为4 6μm 的薄片,切片时要注意保持切片的完整性和连续性。
7、展片将切好的切片放入 40 45℃的水浴锅中,使切片展开平整。
8、贴片用镊子将展开的切片捞起,贴附在载玻片上,放入烤箱中烘干,使切片牢固地贴附在载玻片上。
小鼠肾脏石蜡永久制片结果分析报告XXX,YYY,ZZZ摘要本文通过石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对小鼠(Mus musculus)肾脏的显微结构进行了初步研究。
此外,还对石蜡永久制片过程中的一些问题进行了总结。
实验中通过控制制片过程中的某些条件,例如对透明、包埋、透蜡、染色等步骤中的处理时间的控制,以达到掌握精确的制片技术。
关键词小鼠肾脏显微结构,时间控制,石蜡切片A nalysis report in result of Mouse kidney permanent paraffin sectionXXX,YYY,ZZZAbstract The microstructure of Mus musculus kidney were studied by permanent paraffin sectioning and microscope photography.In addition,some problems were summarized in the process of permanent paraffin sectioning.In this experiment,certain conditions were controlled in the sectioning process,in order to master the accurate sectioning technology,for example, time controlling in the process of transparent,embedding,wax absorption,dyeing and other steps.Keywords microstructure of Mus musculus kidney,time controlling,paraffin sectioning为了清楚地在显微镜下观察组织细胞的形态结构与细胞之间的组织关系,就需要对组织进行切片。
常用的切片法有火棉胶切片、冰冻切片、石蜡切片等。
火棉胶切片不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩或变脆,适用于精细材料(如脑)的切片,又火棉胶有韧性,不易卷折或破裂,适用于大块、多空洞组织(脑、眼球等),此外,骨、牙等硬质组织在脱钙处理后也可用火棉胶包埋。
冰冻切片法是将组织冰冻后直接切片的方法,用时短,操作较石蜡切片简便,组织变化不大,不需要对组织进行固定、脱水、透明、包埋等操作,能很好地保存脂肪、类脂等成分。
此外,冰冻切片法能够较完好地保存各种抗原及酶的活性,特别是对于那些对有机溶剂或高温耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。
但冰冻切片要求组织块较小,又不易做连续切片,且冰晶对细胞形态也有破坏,因此应用受到限制。
相对火棉胶切片和冰冻切片,石蜡切片操作成熟,结果稳定,因而应用也最广泛,各种动植物组织几乎都可以制作石蜡切片。
本文主要介绍使用石蜡制片法制作小鼠肾脏切片的过程,以及在操作过程中的各种条件因素对结果的影响。
石蜡制片法的主要操作步骤包括:取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片、染色、封片等过程。
其中,每一过程又都包括几个不同的操作,如取材包括选取小鼠、处死、解剖取肾、肾脏切割四步;又如染色包括脱蜡、复水、苏木精染色、镜检、伊红染色、镜检、脱水等操作。
每一步、每一个操作都会对实验结果产生或多或少的影响,因此对每一步、每一个操作都要仔细,都要进行探讨、试验,整个实验才可能成功。
每个操作从各个不同方面影响着实验结果。
例如肾脏切割这一步,需要将肾脏平放,按丁字形切成三块。
这样要求是为了能在取材最少的状况下,从三个不同角度切片观察肾脏。
因此在做实验前应该充分理解实验中的每一个操作,实实在在,不能想当然。
只有在理解每一操作的意义的基础上,我们才会规范地操作,实验结果也才会更有保证。
1材料和方法1.1动物材料来源小鼠(Mus musculus)(图1,图2)于2011年10月17日取自海洋生命学院海洋生物工程系,体长约10㎝(不计尾长)。
图1.切片机图2.烘片机1.2实验工具与试剂1.2.1实验工具线手套、乳胶手套、解剖剪、剪状夹、镊子(尖头&粗头)、染色缸、木块、挂历纸、酒精灯、铁片、刀片、切片机(图3)、毛笔、载玻片、盖玻片、烘片机(图4)、烘箱、通风橱、显微照相系统等。
图3.切片机图4.烘片机1.2.2实验试剂10%福尔马林、无水乙醇(分析纯天津市广成化学试剂有限公司)、95%乙醇(分析纯天津市广成化学试剂有限公司)、蛋白甘油、中性树胶、二甲苯、石蜡(熔点58℃)等。
1.3石蜡切片制作方法取材、10%福尔马林固定、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、透蜡、石蜡包埋、切片、蛋白甘油贴片、烘片、苏木精-伊红染色、中性树胶封片等过程。
2制片过程2.1制片记录表在实验前需要将本次实验的流程以及时间安排详细地列个表,以便在实验时有所依照和限制,确保每一环节严格按照时间安排进行,避免意外事件造成某一环节的中断或时间上的变化。
本文依据的制片记录表如下:材料小鼠肾脏(2011.10.17/8:30)固定液10%福尔马林。
固定时间10%福尔马林:22.5h 。
(2011.10.17/8:30 —2011.10.18/7:00)冲洗(2011.10.18)脱水(2011.10.18/7:00—11:00)乙醇30%50%70%85%时间7:00—7:307:30—8:008:00—8:308:30—9:00乙醇95%95%100%100%100%时间9:00—9:309:30:10:0010:00—10:2010:20—10:4010:40—11:00透明*(2011.10.18/11:00—13:10)1/2无水乙醇+1/2二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯+石蜡(38℃)11:00—11:4011:40—12:0012:00—12:2012:20—12:4012:40—13:10浸蜡(2011.10.18/13:10—15:20)石蜡石蜡石蜡13:10—13:4013:40—14:2014:20—15:20包埋(2011.10.18/15:20—15:40)切片厚度5μm (切片:2011.10.19/8:10—9:40&14:20—16:20。
烤片:24h ,2011.10.19—2011.10.20)染色1、二甲苯Ⅰ10min ,Ⅱ10min 2、无水乙醇Ⅰ5min ,Ⅱ5min 3、95%乙醇Ⅰ5min ,Ⅱ5mn 4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、50%乙醇5min7、蒸馏水5min表1.制片记录表2.2取材本实验所用材料为健康小鼠(Mus musculus )肾脏,小鼠体长约10㎝(不计尾长),采用拉颈法处死,立即解剖取肾。
肾脏大小约0.6㎝×0.4㎝×0.3㎝,取材时暗红色。
将肾脏放入生理盐水中清洗干净,平放,按丁字形切割成三块,以便从三个不同角度切片观察。
切割时注意下刀要快而干脆,不可来回切割,以免压坏组织细胞,对结果造成影响。
切割完毕,三块肾脏组织需立即浸入10%福尔马林中固定,固定时间视材料、组织块大小而变化,本实验中固定时间为22.5h 。
2.3脱水组织块固定后,需经过梯度乙醇脱水,才可进一步用二甲苯透明。
本实验依据表1中的流程进行脱水。
脱水所用的梯度乙醇要提前配制,装入磨砂细口瓶中保存(无水乙醇和95%乙醇直接从试剂瓶取用)。
需要注意的是,脱水过程一定要彻底,否则二甲苯不易透入。
因此,脱水用的无水乙醇要密封好,且要经过2—3级,以充分脱水。
此外,后面透明用的二甲苯也需密封好,以防吸水。
乙醇对组织有收缩作用,浸泡时间过长会影响组织形态,因此不可脱水过夜,若必须过夜,则需停于70%乙醇中。
梯度乙醇脱水后,组织块表面灰白色,隐约透出红色(图5)。
预实验:8、苏木精染液20min9、水洗3次,使缸里的水至无色10、【1%盐酸酒精分色3~10s ,镜下观察】11、水洗蓝化10min12、50%乙醇3min13、70%乙醇3min14、80%乙醇3min15、伊红染液5—8s16、95%乙醇Ⅰ3min ,Ⅱ3min17、无水乙醇Ⅰ3min ,Ⅱ3min18、二甲苯Ⅰ3min ,Ⅱ3min19、中性树胶封片20、烘箱72h正式实验:8、苏木精染液30min 9、水洗3次,使缸里的水至无色10、【1%盐酸酒精分色3~10s ,镜下观察】11、水洗蓝化10min 12、50%乙醇5min 13、70%乙醇5min 14、80%乙醇5min 15、伊红染液6—10s 16、95%乙醇Ⅰ5min ,Ⅱ5min 17、无水乙醇Ⅰ5min ,Ⅱ5min 18、二甲苯Ⅰ5min ,Ⅱ5min 19、中性树胶封片20、烘箱72h备注 1.小鼠肾脏取材后立即用生理盐水清洗。
2.采集材料后,立即固定,不得延误!!!3.材料从固定液取出后,需立即冲洗!!!以便将固定液全部除去。
4.材料脱水一定要脱干净,时刻避免水分掺入!!!5.二甲苯极易挥发,极易吸水,要做好密封准备!!!6.总的石蜡透入时间,按一般标准约1~1.5h ,若组织块较大,需适量延长透蜡时间。
7.组织块包埋后立即置于冷水中,使它立刻凝固。
蜡块一定要充分凝固,才可切片。
8.染色过程中要不时地镜检,以确定是否需要分色。
2.4透明组织块经梯度乙醇脱水后,即可浸入二甲苯透明。
二甲苯与乙醇互溶,又与石蜡互溶,因此可以作为中间媒介使石蜡透入组织。
二甲苯导致组织变脆,长时间浸泡会使组织破碎,微观结构受损,而且切片在烤片后易破碎脱落,因而透明时间不可过长。
本次实验由于透明时间过长,导致了如上所描述的一系列后果,在后面会进一步描述。
二甲苯有挥发性,且有毒性,有关二甲苯的操作应在通风橱里进行,含有二甲苯的废液需倒入指定的废液桶里。
透明后,组织块外观略有膨胀,恢复暗红色(图6)。
图5.脱水后图6..透明后2.5透蜡石蜡在常温下凝固,因此透蜡需在高于常温(由于有二甲苯溶解石蜡,温度可略低于石蜡的熔点)的条件下进行,由于前一步存在二甲苯,需置于通风橱中。
为使石蜡完全浸入组织,透蜡时间相对较长,而且需三级石蜡。
最后一级透蜡缸需置于烘箱中,使石蜡保持液态,方便包埋。
2.6包埋包埋之前,要准备好纸盒,纸盒的大小应准确把握,要能完全包住组织块,便于夹持;又要小巧,便于修蜡和避免浪费。
可先将纸盒底部浸在水中,倒入少许石蜡,使其快速凝结成薄层,之后再将组织块放入,并随即倒入熔化的石蜡,石蜡没过组织块2—3㎜即可。
之后要使用烧热的尖头镊子调整蜡中组织块的方位,使要观察的面朝上。
然后将纸盒大部分浸入冷水中,等待石蜡上表层发白坚实后,才可将整个纸盒没入水中。