微生物检验的基本技术93页PPT

膜磷壁酸 壁磷壁酸 表面蛋白：SPA、M蛋白
Ｇ－菌细胞壁 特殊结构 (外膜)
磷脂
脂蛋白
类脂Ａ：毒性部分
脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异
特异多糖：种和型特异
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Ｇ＋和Ｇ－菌细胞壁差异：
特征 强度 厚度
肽聚糖层数 肽聚糖含量
磷壁酸 外膜 结构
革兰氏阳性菌 较坚韧
厚，20～80nm
牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动 物血清治愈白喉。
（３） 抗生素的发现：
目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高
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3． 现代微生物学时期：近二、三十年
（1）新病原微生物的发现
a．传统病原卷土重来； b．新型病原。
（2）致病机理的深入研究
a．采用新技术； b. 各种致病因素的分子机理及调控。
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（二）细菌的变异现象
形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异
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（三）细菌变异的机制
突变
基因的转移和重组
转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌 游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体 菌的部分遗传特性。
转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基 因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。
微生物的进化分类、生命活动规律及与动植 物、人类、自然相互关系。 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医 按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、
微生态学 等
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医学微生物学(medical microbiology)：与医 学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免 疫性及有关技术和理论的应用。

险较小 · 保存期比较短， · 反复传代有引 · 比较容易掌握 起变异的可能；
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
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2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
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一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
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一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
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二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
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二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
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四、微生物限度检查法
1、定义

个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查

加强交通建设管理，确保工程建设质 量。08:42:0608 :42:060 8:42Th ursday , December 17, 2020
安全在于心细，事故出在麻痹。20.12. 1720.1 2.1708:42:0608 :42:06 December 17, 2020
踏实肯干，努力奋斗。2020年12月17 日上午8 时42分 20.12.1 720.12. 17
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
5.复 染— 红色 的藩 红染 液第 二次 染色
细菌呈现第一次染色的 效果紫色，革兰氏阳
性菌（紫阳G＋）；
呈现第二次染色的效果 红色；称革兰氏阴性菌
（红阴G -）
Inoculating an agar plate to obtain single colonies
划线接种பைடு நூலகம்分离纯化
灼烧
微生物生化反应：
沙门氏菌的TSI试验
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20. 12.1720 .12.17 Thursday , December 17, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。0 8:42:06 08:42:0 608:42 12/17/2 020 8:42:06 AM
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20. 12.1708 :42:060 8:42De c-2017 -Dec-2 0

神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
染色原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐
有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
影响革兰染色的因素
操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短
染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长
对胞内寄生菌感染的免疫：主要依靠细胞 免疫抗感染
医院感染
医院感染的概念
广义上讲，医院内感染包括在医院内各 类人群所获得的感染，主要指病人在住 院期间有又发生的其它感染。
感染率：
发生感染的病人数
感染率＝
出院病人数
×100％
一、二、三级医院总的医院感染率应低于 7％、8％、10％
医院感染的流行病学
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。

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pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
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消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
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利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
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大肠杆菌
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金黄色葡萄球菌
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2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
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2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。

高，中和指数超过50者为阳性。还可 感染后2周 lgM抗体达高峰。
示可能有病毒增殖。 人感染乙脑病毒后5-7d即出现IgM，随
用抗体捕获的ELISA法检测特异性lgM
抗体，有助于登革早期诊断。
第三节 森林脑炎病毒
森林脑炎是经蜱传播的自然疫源 性疾病，森林硬蜱为其主要传播 媒介。蜱也是储存宿主。本病亦 可经胃肠道传播。出现高热头痛、 脑膜刺激症、昏迷等症状。病死 率约20％—30％。病后可获持久 免疫力。
抗体检测
清补体结合抗体效常价超过用l：32的，红细方法有补体结合试验、红细胞 凝集抑制试验及中和试验等。单份血 常用鹅血红细胞吸附试验、
如出现行动迟缓耸毛、共济 单份抗体效价1：16有诊断
清补体结合抗体效价超过l：32，红细 及脑脊液中乙脑病毒抗原，结
如出现行动பைடு நூலகம்缓耸毛、共济 经4-7日后，乳鼠可表现以迟缓性麻痹
患者血清及脑脊液中的特异性IgM抗 体。感染后第4天出现，2～3周达 高峰，阳性率可达90％以上。与血 凝抑制试验同时测定，符合率可达 95％。双份血清血凝抑制抗体效价 增高4倍可以确诊；单份血清效价 在1：320以上有诊断意义。
补体结合抗体出现较晚，故不能作 为早期诊断指标。可用于近期感染 的诊断。单份抗体效价1：16有诊断 价值；双份抗体效价升高4倍可以确 诊。 应用乙脑MoAb致敏羊血细胞反向被 动血凝抑制试验，阳性率为83％。 方法简便快速，已有商品供应。
失调、抽搐或瘫痪等表现时，提 双份血清血凝抑制抗体效价
单正链RNA，有包膜，动物感染范围 经4-7日后，乳鼠可表现以迟缓性麻痹 如出现行动迟缓耸毛、共济
示可能有病毒增殖。 高，中和指数超过50者为阳性。
3．蚊虫胸腔接种 用白纹伊蚊和 埃及伊蚊做胸腔接种，将接种 蚊在28℃～30℃培养10天，取 蚊脑及唾液腺压碎涂片，用免 疫荧光技术检测病毒。

物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法
热力灭菌法
干热灭菌法— 焚烧：废弃物、尸体
灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械
湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7
℃15-30s,主要用于牛乳消毒。
多数氨基酸、简单蛋白 质等
有 机 碳
糖、有机酸、醇、脂类 等
烃类
葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、 糖蜜等
天然气、石油及其不同馏份、 石蜡油等
C(?)
C· O
—
CO2
—
CO2
C· O· X
NaHCO3
NaHCO3、CaCO3、等
微生物的氮源谱
类 型 元素水平 N· C· H· O· X N· C· H· O N· H 无 机 氮 化合物水平 复杂蛋白质、核酸等 培养基原料水平 牛肉膏、酵母膏、饼粕 粉、蚕蛹粉等
化学消毒灭菌法
消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧
化剂、表面活性剂、烷化剂。
消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、
粘膜、饮水、厕所、空气、手。
影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物
二、 培养基(culture medium)
无机盐的生理功能
细胞内一般分子成分（P、S、Ca、Ma 、Fe等） 一般功能 渗透压的维持（Na+等）
生理调节物质
大量元素 无
酶的激活剂（M a2+等）
pH的稳定
化能自养菌的能源（S、Fe2+、NH4+、NO2-等）
机

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可以接受的标准 — 平板法
1、重现性良好 - 三批不同批次的样品/产品 - 三次独立的试验
2、验证数据合理有效（微生物的回收率） - 阴性对照：无污染事件发生 - 样品组（ 回收率）： A = C ± 30% （ 偏差≤ 30%）
3、样品的处理方法和检验方法与检验规程相符
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改良马丁培养基 20-25℃ 1824h
改良马丁斜面培养基 20-25℃ 5-7天
PTP课件17
微生物计数方法验证用菌株：
USP29版
菌株名称
ATCC编号
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)
ATCC 8739
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538
大肠杆菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1848h
沙门菌
10g (10ml)样品
90ml TSB 35-37 ℃,1824h
铜绿假单胞菌
10g (10ml)样 品 90ml 缓冲蛋白 胨水
金黄色葡萄球 菌
10g (10ml)样 品
90ml 缓冲蛋 白胨水
梭菌
10g (10ml)样品
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
PTP课件14
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 （3） pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
固体：10g 供试品+稀释剂至100ml 液体：10ml供试品+稀释剂至100ml