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肿瘤干细胞及其耐药机制欧扬郭秀丽(山东大学药学院新药药理研究所,济南250012)摘要肿瘤干细胞是存在于造血系统肿瘤和一些实体瘤中具有干细胞特性的细胞。
肿瘤干细胞假说认为,经药物治疗后肿瘤复发和转移与肿瘤干细胞残存有密切关系。
其原因可能是肿瘤干细胞高表达ABC转运蛋白和B c-l2抗凋亡蛋白,同时其本身又具有一些干细胞特性。
对肿瘤干细胞耐药机制的研究,将有助于发现新的肿瘤治疗靶点和更好的抗癌策略。
关键词肿瘤干细胞;耐药性;ABC转运蛋白;治疗中图分类号R730.2Tum or Ste m C ells and D rug R esistance OU Yang,GUO X i u-L i(D e part m ent of N e wdrug P har m a-cology,School of Phar m aceu tical S ciences,Shandong University,Ji nan250012,China)Abst ract The tum or ste m ce lls possessing ste m ce lls properties have been descri b ed i n hae m atopo ietic cancer and so m e so lid tu m ors.It is believed the regenera ti o n and displace of cancer after che m otherapy have ti g h ten relati o n w ith the residual tu m or ste m ce lls.The m ain reason is t h at tum or ste m cells over-ex-press ATP-b i n d i n g cassette drug transporters and B c-l2.M oreover,tu m or ste m ce lls have the character o f ste m cells.M ore insight into the m echan is m s o f tum or ste m cells m ight he l p l e ad to ne w therapeutic tar-gets and better anticancer strateg i e s.K ey w ords tum or ste m cells;drug resistance;ATP-b i n d i n g cassette drug transporters;t h erapy在肿瘤研究中,干细胞研究帮助人们加深对肿瘤的发生、发展及转移的认识。
论述MGMT在脑胶质瘤中的表达及其意义脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，占颅内肿瘤的40%以上，年发病率约为十万分之五。
目前临床常规治疗是以手术切除为主，术后联合放疗和化疗等综合治疗。
术后化疗可以部分杀灭或抑制残存的肿瘤细胞，是胶质瘤综合治疗措施中的重要步骤之一，而影响化疗效果的重要因素之一就是肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及耐药性如何。
相关研究表明，决定DNA修复酶-O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT) 表达量的主要因素就是MGMT基因启动子的甲基化状态，而MGMT在胶质瘤组织中的表达与肿瘤细胞的耐药性相关，有可能影响到患者的化疗效果及预后。
本研究通过测定胶质瘤组织中MGMT的表达水平，拟预先评估患者对烷化剂等化疗药物的耐药性，对于指导临床个性化化疗，提高疗效等方面有着重要意义。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 纳入标准收集昆明医学院第三附属医院神经外科2009年1月至2011年10月手术切除的63例经病理学诊断为胶质瘤的肿瘤标本组织。
所有患者术前未行放化疗及患有其他肿瘤。
1.1.2 病例特点患者年龄14岁～75岁，平均41.2岁，其中男性33例，女性30例；按照WHO关于中枢神经系统肿瘤分类法，将63例脑胶质瘤分为4组：Ⅰ级组7 例，Ⅱ级组20例，Ⅲ级组19例，Ⅳ级组17例。
各组别患者年龄及性别构成无统计学差异。
1.1.3 标本处理所有肿瘤组织标本均尽快送至病理科，经中性福尔马林液固定16h～24h，然后石蜡包埋，4€%em厚度连续切片2张。
一张切片行HE染色，作为组织学分级，一张切片行免疫组织化学染色。
1.2 方法1.2.1 主要试剂浓缩型鼠抗人MGMT单克隆抗体、通用型SP广谱试剂盒、DAB显色剂均购自北京中山金桥生物公司。
按照试剂盒说明书提供的实验方法进行。
1.2.2 免疫组织化学染色石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢甲醇溶液，室温下孵育20分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗后，在室温下抗原修复；滴加鼠抗人MGMT单克隆抗体，孵育60min(37℃)；生物素标记的第二抗体，室温孵育10min；链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育10min；DAB 显色；显微镜下观察显色情况，显色适度后自来水冲洗中止反应，然后脱水、透明、封固，光镜下观察并摄片。
实验研究复方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响武海博，梁燕，沈雷，范展，傅国惠△摘要：目的探究复方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响。
方法将24只雄性SD大鼠分为对照组和低、中、高剂量组[复方藤梨汤6、12、24g/（kg·d）]，每组6只，制备含药血清处理人脑胶质瘤U251细胞。
采用CCK-8法检测细胞活力，集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞周期分布与细胞凋亡，定量聚合酶链反应检测原癌基因C-myc、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）基因表达，Western blot法检测细胞凋亡蛋白［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8］以及β-连环蛋白（β-catenin）、上皮性黏附蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达。
结果选取体积分数10%的含药血清为最终剂量。
与对照组比较，低、中、高剂量组细胞活力、克隆形成数、C-myc mRNA、CyclinD1mRNA、Vimentin表达水平降低，处于S期细胞比例、Bax/Bcl-2比值、Caspase-3表达水平升高（P＜0.05）；低、高剂量组G1期细胞比例降低（P＜0.05）；中、高剂量组G2期细胞比例、β-catenin表达水平降低，Caspase-8和E-cadherin表达水平升高（P＜0.05）；高剂量组细胞凋亡率升高（P＜0.05）。
结论复方藤梨汤含药血清可促使人脑胶质瘤U251细胞阻滞于S期，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，通过调节β-catenin、E-cadherin和Vimentin表达抑制上皮间质转化。
关键词：神经胶质瘤；上皮-间质转化；细胞增殖；细胞凋亡；细胞增殖抑制药（中药）；复方藤梨汤含药血清；人脑胶质瘤U251细胞中图分类号：R739.41文献标志码：A DOI：10.11958/20221840Effects of Fufang Tengli Decoction drug-containing serum on proliferation,apoptosis and epithelial-mesenchymal transition of human glioma U251cellsWU Haibo,LIANG Yan,SHEN Lei,FAN Zhan,FU Guohui△Department of Neurology,Nanyang Central Hospital,Nanyang473000,China△Corresponding Author E-mail:Abstract:Objective To explore effects of Fufang Tengli Decoction drug-containing serum on the proliferation, apoptosis and epithelial-mesenchymal transition(EMT)of human glioma U251cells.Methods A total of24male SD rats were divided into the control group,the low-dose,medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups[6,12,24g/ (kg·d)],6rats in each group.After10d of continuous intragastric administration,blood samples was collected to prepare drug-containing serum,and human glioma U251cells were treated for24h.The cells activity was detected by Cell Counting Kit-8.The cell cloning was detected by colony formation assay.The distribution of cells cycles and apoptosis were detected by flow cytometry.The expressions of proto-oncogene C-myc and cyclin D1(CyclinD1)genes were detected by quantitative polymerase chain reaction.The expressions of B-cell lymphoma-2(Bcl-2),Bcl-2associated X protein(Bax),cysteine aspartase-3(caspase-3),caspase-8,β-catenin,epithelial cadherin(E-cadherin)and vimentin(Vimentin)were detected by Western blot assay.Results The drug-containing serum with10%volume fraction was selected as the final dose. Compared with the control group,cells activity,number of clone formation and expression levels of C-myc,CyclinD1mRNA and Vimentin were decreased,while numbers of cells in S phase and expression levels of Bax/Bcl-2and Caspase-3were increased in the low-dose,medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups(P＜0.05).The proportion of cells in G2phase and expression level ofβ-catenin were decreased,while expression levels of Caspase-8and E-cadherin were increased in the medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups(P＜0.05).Cell apoptosis rate was increased in the high-dose Fufang Tengli Decoction group(P＜0.05).Conclusion Fufang Tengli Decoction drug-containing serum can block human glioma U251cells in S phase,inhibit cell proliferation,induce apoptosis,regulate expressions ofβ-catenin,E-cadherin and Vimentin,and inhibit EMT.基金项目：河南省医学科技攻关计划联合共建项目（LHGJ20191452）；河南省科技厅科技攻关项目（202102310408）作者单位：南阳市中心医院神经内科（邮编473000）作者简介：武海博（1988），男，主治医师，主要从事胶质瘤方面研究。
多药耐药机制研究及其抑制策略多药耐药（Multi-drug resistance, MDR）是指细菌、寄生虫和真菌对多种药物产生的耐药性。
MDR是世界范围内临床治疗的巨大挑战，限制了许多传统抗生素和抗寄生虫药物的有效使用。
在这篇文章中，我们将深入探讨多药耐药的机制及其抑制策略。
多药耐药机制1. 基因突变基因突变是常见的多药耐药机制之一。
细菌、寄生虫和真菌通过突变特定基因的方式来产生对药物的抗性。
突变可以改变靶标蛋白的结构或功能，使得抗生素无法与其结合，从而减弱或完全阻止了药物对细胞的作用。
2. 表达外泌体外泌体是一种纳米级别大小的膜囊泡，可以被细胞释放到外部环境中。
多种细菌通过表达外泌体来排出抗生素分子，破坏了抗生素对宿主细胞的杀伤作用。
此外，外泌体还可以转移耐药基因和耐药质粒，使得耐药性在不同微生物间传播。
3. 上调毒力相关基因一些微生物在受到抗生素威胁时会上调毒力相关基因，以增加其对宿主细胞的侵袭能力和存活能力。
这种策略使得微生物在低浓度抗生素下仍能存活和复制，增加了治疗的难度。
4. 活性泵增强活性泵也是导致多药耐药的重要机制之一。
细菌和寄生虫可以通过增加活性泵的表达来排除外来分子，包括抗生素等有害物质。
这种机制使得微生物能够更有效地清除药物，降低对抗生素等化学物质的敏感性。
多药耐药抑制策略面对多药耐药问题，科学家们致力于开发新的解决方案。
以下列举了一些重要的多药耐药抑制策略。
1. 新型抗菌剂开发针对已知的耐药机制，科学家们致力于开发新型的抗菌剂，以克服已经存在的多药耐药问题。
这些新型抗菌剂可以通过结构优化或设计新颖靶点来克服细菌、寄生虫和真菌对传统抗生素和抗寄生虫药物的耐受性。
2. 绕过耐药机制另一种重要的策略是利用已有知识绕过已知的耐药机制。
例如，在面对基因突变导致的耐药时，可以开发针对其他结构或功能相似但不易被突变所影响的靶标蛋白。
3. 多靶点组合疗法研究证明，同时针对微生物的不同靶标可以显著提高治疗效果并降低出现多药耐药的概率。
分 类 号：R739.41 R979.1+1 单位代码：10183 研究生学号：**********密 级：公 开吉林大学硕士学位论文替莫唑胺治疗脑胶质瘤的应用研究Temozolomide treatment in glioma Applied Research作者姓名：周垂兵专业：外 科 学研究方向：脑肿瘤及脑血管病的外科治疗与颅脑损伤指导教师：罗毅男 教 授培养单位：第一临床医院2009年3月替莫唑胺治疗脑胶质瘤的应用研究Temozolomide treatment in glioma Applied Research作者姓名：周垂兵专业名称：外 科 学指导教师：罗毅男 教 授学位类别：医学硕士论文答辩日期：2009年05月25日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。
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吉林大学博士(或硕士)学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。
除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。
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本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名：日期：年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。
论文级别：■硕士□博士学科专业：外科学（神经外科）论文题目：替莫唑胺治疗脑胶质瘤的应用研究作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林大学第一医院神经外科 (130021)作者联系电话：138****8561内容提要本文主要探讨替莫唑胺治疗脑胶质瘤的疗效、各级别脑胶质瘤之间的Ki-67和MGMT有无显著差别以及Ki-67与MGMT之间有无相关性。
MDR1在人脑肿瘤干细胞中的表达及意义曾飞跃;王延金;陈风华;杨转移;邓永文;方加胜【摘要】目的:探讨脑肿瘤干细胞(BTSCs)上多药耐药基因1(MDR1)及其编码蛋白P-gP的表达,为抗癌治疗寻找靶向分子.方法:取10例胶质母细胞瘤患者肿瘤组织标本,制成单细胞溶液,接种于含EGF、bFGF、B27的无血清培养基中培养.分离获取BTSCs,对其传代培养,期间用Dispase消化分离获取到肿瘤干单细胞.免疫荧光方法检测BTSCs特异性标志物CDl33,并用免疫组织化学和荧光的方法检测MDRl的表达.Wgstern-blotting检测MDR1编码蛋白P-gp的表达.结果:所有的标本均培养出BTSCs,可在体外增殖和扩增分化,表达特异性的标志物CDl33,通过免疫组织化学和免疫荧光结果提示,BTSCs上存在MDR1,MDR1在BTSCs的表达率为(45.3±5.4)%.Western blotting结果表明BTSCs上表达P-gp.结论:BTSCs表达MDR1,并且其上表达P-gp,这可能是使BTSCs更耐受化疗的原因之一.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(035)005【总页数】5页(P769-773)【关键词】肿瘤干细胞;脑;多药耐药基因;P-糖蛋白【作者】曾飞跃;王延金;陈风华;杨转移;邓永文;方加胜【作者单位】中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R739.4;R73-351胶质瘤是颅内最常见的肿瘤，占颅内肿瘤的50%～60%。
目前对于胶质瘤主要治疗方法是手术辅以术后的放疗及化疗，但是效果均不理想。
602017.08基础研究神经外科患者术后颅内感染病原菌耐药性研究李红星 金耀东 王 静河北省保定市徐水区人民医院 河北省保定市 072550【摘 要】目的：分析并了解神经外科患者术后颅内感染病原菌耐药性，为术后颅内感染的治疗提供指导。
方法：选取800例神经外科手术患者，选择新入院患者38例，针对手术第1、2、4、7天头皮标本头皮展开一系列培养，将其培养结果与药敏结合相结合，常规培养细菌、真菌，并对脑脊液检出的病原菌及药物敏感性进行分析。
结果：共发生颅内感染50例（6.25%），利用脑脊液共培养出了病原菌50株，其中的39株是革兰阳性菌，占78.00%，另外38例患者通过头皮培养共有病原菌146株被培育出来，其中革兰阳性菌占大多数。
结论：多种因素都会造成神经外科术后患者颅内感染的发生，革兰阳性菌在脑脊液、头皮培养中都占大多数，局灶性颅内逆行感染为最大的感染影响因素。
【关键词】神经外科患者；术后颅内感染；病原菌；耐药性研究病原体突破机制防御屏障一旦侵入到特定部位并生长繁殖，将会造成局部或全身炎症反应，这就是我们平时经常说的“感染”。
相关调查研究显示[1]，颅内感染与泌尿系统、外伤切口感染及肺部感染是医院的四大感染，颅内感染发生以后会影响神经系统，严重时不容易得到控制，经常会出现预后不良、致残甚至致死等问题，应用抗菌类药物可以有效控制颅内感染，但是同时也出现了致病菌耐药性问题。
本次研究主要对医院颅内感染致病菌耐药性的相关问题进行分析，以期为临床上抗菌药物的应用提供指导，现在进行如下分析。
1 资料与方法1.1 基线资料800例患者均为2015年5月~2017年5月之间我院神经外科收治，所有患者经脑脊液常规生化检查，所有患者中共有207例出现了白细胞增多的现象，127例患者出现了浑浊现象，其中脓性的有17例；149例患者出现了蛋白增高的现象，107例糖与氯化物降低。
800例患者中共有男性432例，女性368例，年龄在12~65岁之间，疾病种类：外伤、脑血管病分别是273例、373例，另外有颅脑损伤107例，47例其他；基础疾病：高血压234例，糖尿病217例，其他349例；共有502例使用抗菌药物，298例未使用。
替莫唑胺治疗多形性胶质母细胞瘤的化疗耐药机制陈欢欢;蔡炜嵩【摘要】胶质瘤约占原发性颅内肿瘤的50％以上,多形性胶质母细胞瘤(GBM)为WHOⅣ级胶质瘤,复发率高,5年生存率不到10％.化疗是GBM综合治疗中的重要一环,而替莫唑胺作为多形性胶质母细胞瘤基石化疗药物在临床广泛应用,然而因其化疗耐药性的存在,严重影响了治疗效果的进一步提高.本文针对目前胶质瘤化疗药物的主要耐药机制:多药耐药、DNA损伤修复机制、凋亡通路异常、胶质瘤干细胞学说等几个方面,结合替莫唑胺药理机制进行分析、总结,希望对提高替莫唑胺在多形性胶质母细胞瘤中的疗效有一定启示.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2015(018)002【总页数】5页(P215-219)【关键词】多形性胶质母细胞瘤;替莫唑胺;化疗耐药【作者】陈欢欢;蔡炜嵩【作者单位】中国医科大学附属盛京医院肿瘤科,沈阳110022;中国医科大学附属盛京医院肿瘤科,沈阳110022【正文语种】中文胶质瘤(Glioma)是成年人最常见的颅内恶性肿瘤，其中多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma Multiforme,GBM)占胶质瘤的40%～50%，是人类生存预后最差的恶性肿瘤之一。
临床上现普遍采取手术切除，术后替莫唑胺同步放化疗序贯替莫唑胺口服化疗为主要治疗手段。
然而，即便经积极治疗后，GBM中位生存期平均仅为14.6个月,5年生存率不到10%[1]。
除GBM恶行程度高、侵袭性生长及某些部位手术难度较大外，胶质瘤的放疗抵抗与化疗耐药也是肿瘤复发预后不良的重要原因。
有研究表明，替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)对恶性胶质瘤的有效率约45%[2]，TMZ耐药是造成GBM化疗失败的主要原因之一。
TMZ是第二代咪唑并四嗪类烷化剂，广泛应用于恶性胶质瘤和黑色素瘤中。
TMZ 口服给药，易通过血脑屏障，生物利用度高。
进入胶质瘤碱性组织中后，自动分解,其分解产物作用于肿瘤DNA，甲基化肿瘤DNA嘌呤残基—主要分为甲基化鸟嘌呤N7(70%)、O6(6%)以及腺嘌呤N3(9%)、O3，为N7-meG、O6-meG及N3-meA、O3-meA，使DNA在复制时出现碱基错配，最终致DNA双链断裂,干扰DNA合成,使肿瘤细胞G2/M期停止生长，诱导肿瘤细胞自噬或凋亡。
人脑胶质瘤细胞多药耐药性的形成及其耐药特性的研究【摘要】目的探讨人脑胶质瘤细胞多药耐药性(MDR)的形成规律及其耐药特性。
方法采用长春新碱(VCR)在体外对人脑胶质瘤BT325细胞持续诱导获得了表现为MDR特征的人脑胶质瘤细胞模型，以MTT法测定胶质瘤细胞增殖，透射电镜行超微结构研究，通过流式细胞仪，检测培养的胶质瘤细胞与32例术后胶质瘤新鲜组织标本中P-糖蛋白的表达。
结果耐药的胶质瘤细胞BT325／VCR对长春新碱的耐受程度为其亲本细胞的24倍，对阿霉素、威猛交叉耐药，对5-氟脲嘧啶敏感。
透射电镜下见BT325／VCR细胞常染色质明显，线粒体丰富，粗面内质网增多。
研究表明BT325／VCR表现为P-糖蛋白介导的典型MDR。
胶质瘤新鲜组织标本中，P-糖蛋白表达阳性率为37.5%(12／32），同肿瘤的恶性程度呈正相关(P＜0.01)。
结论长春新碱能够诱导人脑胶质瘤细胞产生P-糖蛋白介导的典型MDR。
胶质瘤中多药耐药基因产物P-糖蛋白表达的阳性率同肿瘤的恶性程度呈正相关。
应用流式细胞仪能早期发现耐药细胞，具有临床推广价值。
【关键词】脑胶质瘤多药耐药P-糖蛋白流式细胞仪长春新碱Establishment and characterization of multidrug resistance in human g lioma cell line and surgical glioma specimensFAN Yimin, WANG Hongqin, LI Baoyu, et al.Department of Neurosurger y, The First Clinical College of ShanxiMedical University, Tai Yuan 030001【Abstract】Objective To try to explain the machanims and characteristics of multidrug resistance in human glioma and to inv e stigate the clinical significance of predicting the responsiveness of individual glioma cells to chemotherapeutic agents. Methods Multidr ug resistant glioma subline was isolated from BT325 human glioma cell line under selection pressure of vincristine. The human glioma cells growth was measured b y MTT assay in vitro. Electronic transmission microscope was used to e xamine the fine str ucture of cultured human glioma cells. The expression of P-glycoprotein in cult u red human glioma cell line and 32 surgical glioma specimens was tested by flow c ytometer with P-glycoprotein monoclonal antibody JSB1. Results The multidrug resistant glioma subline-BT325/VCR was resisted to vincrist i ne, 24 times as high as that of BT325 human glioma cell line, andalso significa ntly resisted to adriamycin and teniposide, but sensitived to fluracil. Under e l ectronic transmission microscope, the BT325/VCR subline was documented to be rich in m itochrodria, rough endoplasmic reticulum and euchromatin. The BT325/VCR cell lin e showed a overexpression of P-glycoprotein and P-glycoprotein medicated typic al multidrug resistance phenotype. In 32 surgical glioma specimens, there was no e vidence of complete absense of P-glycoprotein, with a definifion of more than 3 7 .5%(12/32) of P-glycoprotein as positive. Significant positive correlation bet we en the positive rate of P-glycoprotein expression and the degree of tumour mali g nancy were also found. Conclusions Vincristine could ind u ce P-glycoprotein mediated typical multidrug resistance. Multidrug resistance n a turally occurred in many human gliomas, and well correlated between the positive expression rate and the malignancy in glioma. The flow cytometer assay for P-g l ycoprotein detection might be preferable to determinations of multidrug resistan t glioma cells, thereby be beneficial for the design of treatment protocols.【Key words】Glioma Multidrug resistance P-glycoprotein Flow cytometer Vincristine恶性胶质瘤化疗失败的主要原因之一为肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(Multidrug resistance, MDR)。
MDR即对一种化疗药物耐药的肿瘤，同时对另外一些与之化学结构、作用机制完全不同的化疗药物的交叉耐药。
典型的MDR是由一种被多药耐药基因(mdrl)编码的膜糖蛋白——P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达所致［1，2］。
研究胶质瘤多药耐药细胞形成规律及其耐药特性，有助于深入认识肿瘤MDR机理和寻找新的治疗对策。
材料与方法1.材料来源：P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1购自英国BMB公司，MTT为Sigma 产品。
人脑多形性胶质母细胞瘤细胞株BT325引自北京市神经外科研究所。
全部组织标本选自1996年6月～1997年3月间在我院住院手术的脑胶质瘤患者。
2.实验方法：人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞株常规无菌培养。
采用逐级递增培养液中长春新碱的浓度，使其产生多药耐药［3］。
采用改良的MTT法［4］，检测细胞生长及对化疗药物的耐药性。
药物诱导过程中，在倒置显微镜下直接观察细胞形态变化。
收集BT325及BT325／VCR细胞，固定，包埋，制片，采用透射电镜观察。
流式细胞仪检测脑胶质瘤细胞P-糖蛋白表达［5，6］。
3.统计分析：应用Foxbase建立数据库，由SPSS统计软件行相关及回归分析，组间显著性检验用SAS统计软件处理。
结果1.人脑胶质瘤细胞耐药性的建立：对VCR敏感的BT325细胞，用MTT法测得其IC50为9.1812ng/ml，实验中选用5ng/ml的VCR为初始诱导浓度，经过3个半月的持续诱导，得到在VCR浓度为200ng/ml中生长良好的BT325/VCR细胞，用MTT法测得其对VCR的IC50为224.5ng/ml，对VCR的耐受程度为BT325细胞的24倍。
BT325／VCR细胞无药培养4周后，对VCR的耐药性未见明显降低，其IC50为206.99。
存活细胞仍保持在90%以上(1)。
2.细胞生长曲线及群体倍增时间：以培养第3至11天的细胞数作，绘制出细胞生长曲线。
胶质瘤BT325细胞生长曲线的直线方程为Y=－3.76＋1.96X，相关系数γ=0.95，倍增时间为51.12小时。
BT325／VCR的细胞生长曲线的直线方程为Y=－3.44＋1.73X，相关系数γ=0.94，倍增时间为56.16小时。
表明BT325／VCR细胞产生耐药性后，其增殖能力未受到明显影响(2)。
VCR浓度(ng/ml)1 VCR对胶质瘤细胞的生长抑制曲线时间(天)2 胶质瘤细胞的体外增殖曲线3.一般形态及超微结构研究：BT325、BT325／VCR细胞均贴壁生长，形状不同，大小较均匀，光镜下两种细胞形态无差异。
在VCR诱导期间，随着VCR剂量逐渐增加时，细胞形态变化不明显，当VCR剂量跨度过大时，细胞大多被杀伤，细胞皱缩，稀疏。
透射电镜下，BT325／VCR细胞核多分叶状，常染色质明显，粗面内质网增多，线粒体丰富。
4.耐药细胞对化疗药物的交叉耐药性：耐VCR的胶质瘤细胞BT325／VCR表现为典型的MDR特性，即对蒽环类和植物碱类药物阿霉素和威猛有交叉耐药性，耐药程度分别是BT325细胞的38倍和21倍，而对抗代射药物5-氟脲嘧啶无交叉耐药性。
用MTT比色分析法测得结果如表1所示。
5.多药耐药基因表达产物P-糖蛋白的检测：使用抗P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1对BT325／VCR和BT325细胞进行流式细胞仪检测，发现亲本细胞(BT325)由于没有或很少P-糖蛋白表达，不能结合JSB-1单抗，荧光强度非常低，而耐药细胞有P-糖蛋白的过度表达，荧光强度明显增强，曲线右移，表示胶质瘤细胞经VCR诱导耐药后，有mdrl基因产物P-糖蛋白的过度表达，这种差别，达100倍之多，能清楚地在流式上表现出来。
