志贺菌属
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志贺菌属简介志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌,通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。
CDC分类系统(1989)将生化性状相近的A、B、C群归为一群,统称为A、B、C血清群,将鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢-最为常见。
(一)生物学特性1.形态与染色:革兰阴性短小杆菌,(2~3)μm×(0.5~0.7)μm,无荚膜,无芽胞,无鞭毛,有菌毛。
2.培养特性:需氧或兼性厌氧,液体培养基中呈浑浊生长,在普通琼脂平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑型菌落,宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落医学|教育网搜集整理。
3.生化反应:志贺菌属的细菌KIA:K/A、产气-/+、H2S-,MIU:动力-、吲哚+/-、尿酶-,氧化酶-,不产生赖氨酸脱羧酶,氧化酶试验阴性。
4.抗原结构:志贺菌属只有O抗原而无鞭毛抗原,个别菌型及新分离菌株有K抗原。
(二)致病性致病物质:侵袭力:菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞,诱导细胞内吞。
内毒素:破坏肠粘膜;肠壁通透性;肠壁植物神经——腹痛,腹泻,里急后重,粘液脓血便。
外毒素(志贺毒素,ST):肠毒素活性;细胞毒活性;神经毒活性。
所致疾病:细菌性痢疾,简称菌痢医学|教育网搜集整理。
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
传染源为病人和带菌者,经粪口传播。
(三)微生物学检验1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便,选择脓血便或粘液便,必要时可用肛拭子采集。
2.检验办法及鉴定(1)分离培养:取粪便(粘液或脓血部分)或肛拭标本接种GN肉汤增菌及再开展分离培养。
一般同时接种强弱选择性不一样的两个平板。
强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基(SS);弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。
培养18~24h后选取可疑菌落开展下列鉴定。
(2)鉴定1)初步鉴定:挑选可疑菌落3~4个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。
以呈现2+凝集现象的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。
一般认为,伤寒沙门菌O抗体凝集价在1:80以上,H抗体在1:160以上,甲、乙、丙型副伤寒沙门菌凝集价在1:80以上才有诊断意义。
注意事项
1.加入诊断菌液时,由对照管开始往前,每管各加O.5ml。
2. 结果观察时不要振荡试管,先观察,必要时再轻摇试管使凝块从管底升起,最后按液体的清浊,凝块的大小进行记录,对照管(不凝集)与试验管同时对着光线往暗处看液体透明度和凝集块。
3.“H”凝集呈絮状,以疏松之大团铺于管底,轻摇试管即能荡起,而且极易散开。
4.“O”凝集呈颗粒状,以坚实凝片沉于管底,轻摇试管不易荡起,且不易散开。
志贺菌属(痢疾杆菌)
志贺菌属是人类及灵长类动物细菌性痢疾最常见的病原菌,又称痢疾杆菌。
形态与染色:革兰阴性杆菌,无芽孢,无鞭毛,无荚膜,有菌毛。
培养特性:因不发酵乳糖而在肠道选择培养基上为无色透明或者半透明菌落。
抗原构造:菌体(0)抗原,无鞭毛(H)抗原,部分菌株有K抗原,
分类:根据生化反应特征,将志贺菌属分为4群:痢疾志贺菌群(A群),福氏志贺菌群(B群),鲍氏志贺菌群(C群),宋内志贺菌群(D群)。
鉴定:一般标本为粪便和肛拭子。
镜检:革兰阴性杆菌。
分离培养:将标本接与SS平板,麦康凯或伊红亚甲蓝平板,如肠道选择性平板有不发酵乳糖的无色透明或不透明菌落生长,则需要进一步鉴定。
生化鉴定:氧化酶阴性,硝酸盐还原阳性,在克氏双糖(KIA)斜面产碱,底层产酸,不产气,硫化氢为阴性,IMViC结果为-+--,MIU 为--/+-,赖氨酸脱羧酶阴性。
鉴别要点:志贺军属与肠侵袭性大肠埃希菌鉴别:在血清学上有交叉反应,生化特性相近,志贺菌分解葡萄糖产酸不产气,动力试验、赖氨酸脱羧酶、醋酸钠及黏液酸盐试验菌阴性,可与肠侵袭性大肠埃希菌鉴别。
志贺菌属与类志贺邻单胞菌鉴别:可用氧化酶、动力试验鉴别、志贺菌为阴性,后者阳性。
志贺菌属与伤寒沙门菌鉴别:可用动力试验、硫化氢和因子血清09鉴别,志贺为阴性,而沙门阳性。
志贺氏菌属的生物危害评估报告一、细菌的传播与致病志贺菌属是主要的肠道病原菌之一,也是引起人类细菌性痢疾的病原体。
本属细菌分布于全世界,是炎症性痢疾的典型病原菌,很多地区5%~10%的腹泻性疾病是由该菌属所致。
弗氏志贺菌和宋内志贺菌比鲍氏志贺菌和毒力特别强的痢疾志贺菌分布更广。
美国犹他州所有临床实验室工作者志贺菌病的年发病率为0.7/1 000,而临床微生物学工作者的年发病率为 5.4/1 000。
在英国临床实验室,沙门菌病和志贺菌病的年发病率分别为0.137/1 000和0.322/1 000,大多数感染者为微生物学工作者。
感染者和恢复期带菌者的排泄物是传染源,经粪-口途径直接传播,经污染的食物或物体可间接传播。
苍蝇可作为机械性媒介,水源性传播不常见。
卫生条件差的拥挤人群中最易发生流行,流行区的幼儿志贺菌病特别常见,而成人得病较轻。
恢复期和亚临床带菌者是重要传染源,但真正的长期带菌者罕见。
感染很少或不诱导产生免疫性,因此同一菌种的再感染是可能的。
志贺菌可穿入低位肠段的粘膜,引起粘液分泌,充血,白细胞浸润,水肿,并常有表浅粘膜溃疡。
志贺菌感染相关的水泻由内毒素介导所致,因这种内毒素可引起肠道分泌增多。
由志贺菌感染所导致的症状包括:(1)急性细菌性痢疾经潜伏期1~4日,幼儿的起病突然,表现为发热,烦躁不安,嗜睡,厌食,恶心或呕吐,腹泻,腹痛和腹胀以及里急后重。
3日内大便中出现血液,脓液和粘液.大便次数可增加到≥20次/d,体重下降和失水严重。
若不治疗,患儿可在12日内死亡;若患儿存活,则在第2周急性症状消退.成人可表现为无发热的非血性,非粘液性腹泻,很少有或完全没有里急后重.但其最初的症状可为发作性腹绞痛,急于排便,起初排出成形大便并在排便后可缓解腹痛.以后反复发作,并且日趋严重和频繁.腹泻变得明显,系软便或含有粘液,脓及常有血液的水泻。
严重的里急后重可造成直肠脱垂和大便失禁。
成人患病常可自愈:轻者4~8日,重者3~6周。
志贺菌属细菌是引起人类细菌性痢疾的主要肠道病原菌之一。
一、分类
志贺菌属可用特异性抗血清将其分为4个血清群(种):A群为痢疾志贺菌,B群为福氏志贺菌,C群为鲍特志贺菌,D群为宋内志贺菌。
1989年CDC分类系统将生化反应特性相近的A、B,C群归为一群,统称为志贺菌A、B、C血清群;而将生化反应特征与之相异,鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。
DNA G+C含量为49~53mol%。
二、临床意义
志贺菌属细菌的致病主要与细菌的侵袭力、内毒素和外毒素有关,志贺菌属细菌因菌毛的作用,细菌黏附于肠黏膜的表面,并侵入上皮细胞内生长繁殖,形成感染病灶,引起炎症反应。
本菌属各菌株均有强烈的内毒素,由于内毒素的释放可造成上皮细胞死亡及黏膜下发炎,并形成毛细血管血栓,导致坏死、脱落和溃疡,患者出现典型的脓血便;另一方面可引起全身中毒症状(内毒素血症),导致发热、意识障碍,甚至中毒性休克。
A群志贺菌1型和2型产生的志贺毒素,ST对Vero细胞有毒性作用也称为Vero毒素VT对小鼠有强烈的致死毒性,有VT1和VT2两种。
ST属VT1型。
志贺菌属细菌主要引起人类细菌性痢疾,简称菌痢,一年四季均可发病,以夏秋季节发病率最高,典型的急性菌痢表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便、里急后重,发热等症状。
小儿常可引起中毒性菌痢,患儿常无明显的消化道症状而表现为全身中毒症状,若抢救不及时,往往造成死亡。
四种志贺菌中,痢疾志贺菌引起的菌痢较为严重,其他志贺菌引起的感染则相对较轻,具有自限性且很少致死。
我国以福氏志贺菌和宋内志贺菌引起的菌痢最为多见。
多数菌痢为散发病例,可引起人与人之间的传播。
偶可因食用了被污染的水和食物而引起暴发流行。
三、生物学特性
为革兰阴性短小杆菌,菌体大小(1~3μm×(0.7~1.0)μm,无芽胞,无荚膜,无鞭毛,有菌毛。
培养特性为兼性厌氧,最适生长温度为35℃,最适pH为7.2~7.4。
营养要求不高,能在普通琼脂培养基上生长,且生长良好。
在肠道选择培养基上可形成乳糖不发酵、中等大小、无色透明或半透明菌落,宋内志贺菌常形成粗糙型菌落。
志贺茵属菌种有O抗原,无H抗原,部分菌种有K抗原。
O抗原是分类的依据,有群特异性和型特异性两种抗原,根据生化反应和O抗原的不同,将志贺菌属分为4个血清群(A、B、C、D)和40余个血清型。
O抗原耐热,加热100℃ 60分钟不被破坏。
K抗原存在时能干扰O抗原与相应抗血清的凝集作用。
加热100℃ 60分钟可消除K抗原对O抗原的干扰作用。
本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠杆菌科细菌为低。
在1%苯酚中15~30分钟或加热60℃ 10分钟即被杀死,对酸较敏感,在运送培养时须使用pH 7.0的磷酸盐甘油或转运培养基,确保检出率的提高。
四、微生物学检验
(一)检验程序
志贺菌属细菌检验程序同图9-1。
(二)标本采集
主要检验标本为粪便、肛拭等,志贺菌在有大肠埃希菌及其他细菌繁殖并且产酸的粪便标本中,往往数小时即死亡,所有标本应及时接种或采集黏液脓血便作床边接种,如不能及时接种,可置甘油保存液或卡.布运送培养基内送检。
健康体检者可用肛拭取样。
(三)分离培养和鉴定
1.分离培养
分离培养基可选用MAc和SS,亦可用对志贺菌分离效果较好的木糖-赖氨酸.去氧胆酸盐(XLD)培养基。
2.鉴定
(1)初步鉴定:取可疑菌落(MAC上无色不透明;SS上不透明或透明:EMB上无色或不透明的琥珀色;xLD上呈红色的菌落),经生化反应、血清学试验等进一步鉴定到属和种。
志贺菌的基本生化反应特征为:TSIA产酸,枸橼酸盐阴性,脲酶阴性,动力阴性,V-P试验阴性。
(2)最终鉴定:须作全面生化反应和血清学试验,各菌群(种)间的鉴定依据为痢疾志贺菌甘露醇阴性,宋内志贺菌ONPG和鸟氨酸脱羧酶均阳性。
偶尔出现生化鉴定为志贺菌但与抗志贺菌血清不凝集的现象,可制成菌悬液置100℃水浴加热15~30分钟并重复凝集试验,此种菌株有可能是(EIEC),需注意进行鉴别,各菌群的生化鉴别见表9-10。
志贺菌属与大肠埃希菌的鉴别:志贺菌属无动力,赖氢酸脱羧酶阴性,发酵糖产酸、一般不产气,分解黏多糖,在醋酸盐和枸橼酸盐琼脂上产碱,见表9-11。
志贺菌属与伤寒沙门菌鉴别:伤寒沙门菌在KIA上的特性与志贺菌相似,鉴别特点是伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性,能与沙门菌因子血清凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。
志贺菌属与类志贺邻单胞菌鉴别:可用动力和氧化酶试验加以鉴别,志贺菌属均为阴性,而类志贺邻单胞菌为阳性。
凡生化反应符合志贺菌属者均需作血清学鉴定,可先用志贺菌属4种多价血清(A 群1,2型、B群1~6型、C群1~6型及D群)做玻片凝集试验,凝集后进一步作定型鉴定。
①A群:痢疾志贺菌,甘露醇阴性,共有10个血清型(1~10),其0抗原从1~X共10种,均为独立的血清型,各型之间无共同抗原关系。
A群各菌型均有K 抗原(A1~A10)。
②B群:福氏志贺菌,有6个血清型和x、Y 2个变型。
每个菌型均有两种抗原,即型抗原与群抗原。
型抗原只存在于同型的菌株中。
除2a及6型外,均不具有K抗原。
6型菌株缺少共同的群抗原,故福氏多价血清中应包含6型因子血清,否则将会造成漏检。
③C群:鲍特志贺菌,共有15个血清群,均有型抗原(OI~XV),尚未发现亚型。
均含有K抗原(C1~C15)。
④D群:宋内志贺菌,仅有一个血清型,但有光滑型(S)和粗糙型(R)两种菌落。
R型菌落不能被S型血清所凝集,因此宋内志贺菌的诊断血清应同时含有S及R两种因子血清(I相和Ⅱ相)。
五、药敏试验的药物选择
CLSI M100-S24推荐,对于从粪便中分离的志贺菌,仅需常规测试和报告氨苄西林、一种氟喹诺酮类和磺胺甲嚼唑/甲氧苄啶,必要时可增加头孢曲松、头孢噻肟及头孢克肟常规试验并报告。
志贺菌对第一代和第二代头孢菌素、头霉素和氨基糖苷类抗菌药物体外可能有活性,但临床治疗无效,所以对该菌属细菌的药敏结果,第一代和第二代头孢菌属、头霉素和氨基糖苷类抗菌药物不需做药敏试验,或者不管体外药敏试验结果如何,均报告为耐药,参见表9-5。