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心脏和软骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的基因型鉴定侯宁;王剑;李文龙;张继帅;杨晓【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2005(16)3【摘要】我们曾经报道了分别在心脏(α-MHC-Cre)和软骨细胞(Col2A1-Cre)特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的成功研制.为了对这2种转基因小鼠进行特异性的基因型鉴定,设计了2对特异性PCR引物,其中一条引物分别位于α-肌球蛋白重链基因(α-MHC)启动子和Ⅱ型胶原(Col2A1)启动子上.以6种不同组织特异性Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA为模板,利用设计的特异性引物以及位于Cre编码区的通用引物进行PCR反应.结果显示,2对特异性引物可以分别将心肌细胞特异性和软骨细胞特异性Cre重组酶转基因小鼠与其他组织特异性Cre重组酶转基因小鼠有效区分开来.【总页数】3页(P262-264)【作者】侯宁;王剑;李文龙;张继帅;杨晓【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 [J], 刘德鸿;沈丽萍;蔡蕾;王津津;匡颖;孙宁2.肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 [J], 侯宁;杨冠;范雄伟;吴秀山;杨晓3.成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 [J], 程萱;翁土军;谭晓红;侯宁;王健;林福玉;黄培堂;杨晓4.角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制 [J], 程萱; 毛春明; 杨晓5.Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达[J], 刘飞; 孟军; 范立强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一、实验目的1. 熟悉心脏的解剖结构，了解心脏各部分的功能。
2. 掌握心脏生理学的基本知识，包括心脏的生理功能、心脏的血液循环、心脏的电生理学等。
3. 通过实验，观察心脏在生理和病理条件下的变化，加深对心脏生理学的理解。
二、实验材料1. 实验动物：小白鼠（体重约20g）。
2. 实验器材：手术显微镜、解剖剪刀、镊子、缝针、缝线、生理盐水、生理盐酸、酒精、碘伏、心电图机、心电生理刺激器等。
3. 实验试剂：氯化钙、氯化钾、氯化钠、葡萄糖、肝素等。
三、实验步骤1. 实验动物准备：将小白鼠放入代谢笼中，适应环境。
待小白鼠安静后，进行麻醉。
2. 心脏解剖：沿小白鼠胸骨中线切开皮肤，暴露心脏。
用剪刀剪开心包，暴露心脏。
3. 心脏生理学实验：（1）观察心脏解剖结构：观察心脏的四个腔室，即右心房、右心室、左心房、左心室。
观察心脏瓣膜，包括二尖瓣、三尖瓣、主动脉瓣、肺动脉瓣。
（2）心脏生理功能实验：①心脏跳动观察：用镊子夹住心脏，观察心脏跳动情况，记录心率。
②心脏瓣膜功能实验：分别夹住二尖瓣、三尖瓣、主动脉瓣、肺动脉瓣，观察心脏跳动情况，记录瓣膜关闭情况。
③心脏收缩力实验：用缝针在心脏表面缝合一根细线，连接心电生理刺激器。
给予心脏刺激，观察心脏收缩力变化。
4. 心脏病理学实验：（1）心脏损伤实验：用生理盐酸腐蚀心脏表面，观察心脏损伤情况。
（2）心脏电生理学实验：连接心电图机，记录心脏电生理活动。
给予心脏刺激，观察心电图变化。
四、实验结果与分析1. 心脏解剖结构：小白鼠心脏有四个腔室，即右心房、右心室、左心房、左心室。
心脏瓣膜包括二尖瓣、三尖瓣、主动脉瓣、肺动脉瓣。
2. 心脏生理功能：（1）心脏跳动观察：小白鼠心率约为每分钟300次。
（2）心脏瓣膜功能实验：在夹住二尖瓣、三尖瓣、主动脉瓣、肺动脉瓣时，心脏跳动减弱，瓣膜关闭情况良好。
（3）心脏收缩力实验：给予心脏刺激后，心脏收缩力增强，心电图显示心肌收缩活动。
3. 心脏病理学实验：（1）心脏损伤实验：生理盐酸腐蚀心脏表面后，心脏出现损伤，心率减慢。
人工心脏动物实验报告第一部分：引言人工心脏技术一直在医学领域持续发展，旨在为心脏疾病患者提供一种替代自然心脏功能的治疗方法。
为了评估和改进人工心脏的性能和安全性，动物实验是必要且不可或缺的研究手段之一。
本报告将描述我们进行的人工心脏动物实验的设计、实施和结果。
第二部分：方法2.1 动物模型的选择我们选择了成年大鼠作为实验对象，因为其心脏形态与人类心脏相似度较高，并且其相对较小的体型方便手术操作和监测。
2.2 手术前的准备在手术前，我们对动物进行了必要的麻醉，并确保动物处于无痛苦的状态。
接着，我们通过消毒和剃毛等步骤来准备手术区域。
2.3 人工心脏植入通过剖腹手术，我们进一步暴露并切开大鼠的心脏区域。
然后，我们将人工心脏适配器缓慢而稳定地植入到心脏的主动脉与右心室之间，确保稳固固定。
2.4 实验设计我们将实验对象分为两组，每组包含10只大鼠。
其中，一组为实验组，接受人工心脏的功能测试与监测；另一组为对照组，未接受人工心脏植入。
在实验期间，我们记录了不同时间点的心电图、心动周期、心脏排血量等指标。
第三部分：结果与讨论3.1 实验结果实验组中，人工心脏的功能表现良好，如心功能稳定，心脏排血量正常等。
心电图指标也显示出正常的心脏电活动。
对照组的心脏功能和指标没有出现显著变化。
3.2 讨论通过本次动物实验，我们成功验证了所设计的人工心脏对大鼠心脏功能的支持性能。
这为进一步开发和优化人工心脏技术提供了有力的基础。
第四部分：结论在本次人工心脏动物实验中，我们成功地植入并测试了人工心脏的功能。
结果表明，人工心脏能够有效地代替自然心脏，提供正常的心脏功能支持。
这为人工心脏技术的发展和临床应用提供了重要的参考和依据。
应用基因芯片技术探讨小鼠胚胎心脏发育过程中的差异表达基因李勇;陈祥贵【期刊名称】《疾病控制杂志》【年(卷),期】2003(7)4【摘要】目的脊椎动物心脏发育基因表达谱远未明确 ,为此利用基因芯片技术研究小鼠心脏发育过程中的基因表达变化。
方法分别提取第 10 d～ 11d龄和 18d 龄的小鼠胚胎心脏m RNA,通过逆转录反应分别标记成两种荧光 c DNA探针 ,然后与载有一组靶基因的基因表达谱芯片杂交 ,研究心脏在不同发育时期的基因表达差异。
结果在 84 0 4个靶基因中 ,14 3个基因差异表达 ,其中上调基因 5 2个 ,下调基因 91个 ;分别是细胞分裂、凋亡、信号传递、基因和蛋白质表达调控、组织细胞结构、物质和能量代谢相关的基因以及某些功能尚不清楚的基因。
其中一些基因可能是心脏发育的控制基因。
【总页数】6页(P291-296)【关键词】基因芯片;小鼠;胚胎;心脏发育;基因表达;基因差异【作者】李勇;陈祥贵【作者单位】北京大学公共卫生学院营养系,分子毒理与发育分子生物学实验室,北京100083【正文语种】中文【中图分类】R394;Q78【相关文献】1.小鼠早期胚胎发育过程中胚胎发育相关功能基因mRNA的表达 [J], 周鑫;柴保国;赵卫东;郑振宇2.小鼠胚胎心脏发育过程中胰岛素基因增强子结合蛋白1的时序表达与组蛋白乙酰化酶p300的关系 [J], 孔娟娟;陈国珍;孙慧超;余仲苏;朱静;黄国英;田杰3.糖尿病小鼠胚胎早期发育的差异表达基因 [J], 陶凌云;倪丽菊;胡建华;高诚4.牛体外受精胚胎早期发育过程中基因差异表达的研究 [J], 陈苏仁;张鑫;栗雪冰;仓明;刘东军5.小鼠胚胎心脏发育过程中组蛋白乙酰化酶亚型p300调控心脏特异转录因子的动态表达 [J], 杨雪芳;田杰;陈国珍;孙慧超;钟立霖;吴晓云;朱静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠的心脏功能分析王书美;吕丹;陈炜;张晓娟;曹兴水;张连峰【摘要】Objective To establish the heart-specific expression Calponin 1 transgenic mice and investigate its effects on the development of heart and cardiomyopathy. Method The transgenic vector was constructed by inserting the human Calponin 1 gene into the down-stream of α-MHC promoter. The transgenic mice were generated by the method of microinjection. The genotype of transgenic lines was identified by PCR, and the expression levels of the Calponin 1 gene were detected by Western Blot. The pathologic changes of the heart structure and function were analyzed by echocardiography, hematoxylin and eosin(HE) stain and Masson stain. Result The expression of Calponin 1 was detected in the heart of different age wide-type mice by Western Blot, but was down-regulated in the mice with DCM. Compared with the wild type mice, transgenic mice showed significant heart remodeling, left ventricular systolic diameter increased by 28％ (P ＜ 0. 01, n = 12), left ventricular diastolic diameter elevated by 16. 2％ (P ＜ 0. 01, n = 12) , left ventricular posterior wall during systolic decreased by 15.7％ (P ＜ 0. 01, n = 12) , and left ventricular posterior wall during diastole reduced by 21％ (P ＜ 0. 01, n = 12). Transgenic mice, versed wild type, showed weakened heart function, ejection fraction diminished by 11.5％ (P ＜ 0.01, n = 12) and fraction shortening reduced by 14.6％ (P ＜ 0.05, n = 12).The heart of the transgenic mice exhibited an enlarged ventricular chamber whencompared with that of the wild type with HE stain and Masson stain. Conclusion Over-expression of Calponin 1 in the heart of the transgenic mice caused a phenotype similar with dilated cardiomyopathy. It suggested that Calponin 1 might be one of the modifier genes which involved in the pathogenesis of cardiomyopathy.%目的建立心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠,研究Calponin 1对心脏发育及心肌病的调节作用.方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Calponin 1转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western Blot检测Calponin 1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠的心脏结构和功能,HE染色和Masson染色检测转基因小鼠心脏的病理改变.结果 Calponin 1在野生型小鼠心脏中有表达,在扩张型心肌病小鼠的心脏组织表达降低.通过显微注射法,建立了2个心脏组织Calponin 1基因高表达的转基因小鼠系.与野生型小鼠相比,Calponin 1转基因小鼠收缩期左室内径(LVID,systolic)增加28%(P＜0.01,n=12),舒张期左室内径(LVID,diastolic)增加16.2%(P＜0.01,n=12),收缩期左室后壁厚度(LVPW,systolic)减小15.7%(P＜0.01,n=12),舒张期左室后壁厚度(LVPW,diastolic)减小21%(P＜0.01,n=12),射血分数(ejection fraction,EF)降低11.5%(P＜0.01,n=12),短轴内径缩短率(fraction shortening,FS)降低14.6%(P＜0.05,n=12).转基因小鼠心脏组织病理H&E染色和Masson染色显示,转基因小鼠心室扩张,心肌细胞不均匀肥大,细胞间隙变大,心肌间质纤维增多.结论 Calponin 1在心脏特异过表达引起转基因小鼠心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,心室壁变薄,射血分数及短轴缩短率降低等扩张性心肌病表型,推测Calponin 1是参与心肌病病理发生的基因之一.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2011(021)001【总页数】6页(P59-63,封3)【关键词】碱性凋宁蛋白;转基因小鼠;扩张性心肌病;心脏超声【作者】王书美;吕丹;陈炜;张晓娟;曹兴水;张连峰【作者单位】中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院和北京协和医学院,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R541;R332Calponin 1（CNN1）基因编码的碱性调宁蛋白（calponin 1，CNN1）是一个首先从鸡砂囊和牛主动脉中分离出的相对分子质量为3.4×104的碱性蛋白［1，2］。
心肌细胞特异性Snhg5过表达转基因小鼠的建立和应用孔静祎;徐京平;刘澜涛;王添乐;侯宁;李振华;杨晓;王剑【期刊名称】《实验动物科学》【年(卷),期】2022(39)2【摘要】目的建立心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因小鼠,用于研究Snhg5在心脏稳态维持中发挥的功能。
方法通过构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用显微注射导入小鼠的受精卵中,经过胚胎移植获得转基因首建者小鼠。
利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)检测子代小鼠Snhg5基因整合情况,并检测Snhg5在各个组织中的表达情况,进一步通过形态观察、组织学和分子水平的检测分析转基因小鼠的心脏表型。
结果成功构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用受精卵显微注射技术获得Snhg5转基因首建者小鼠4只。
通过对子代小鼠各组织中Snhg5的表达进行检测,发现Snhg5只在心脏组织中特异性地过表达。
进一步的表型分析发现,与对照小鼠相比,转基因小鼠在异丙肾上腺素刺激下更容易发生病理性心脏重塑。
结论成功建立了心肌细胞特异性Snhg5过表达的转基因小鼠,为研究Snhg5在心脏组织中的功能及病理性心脏重塑的发生机制提供了良好的动物模型。
【总页数】6页(P11-16)【作者】孔静祎;徐京平;刘澜涛;王添乐;侯宁;李振华;杨晓;王剑【作者单位】军事科学院军事医学研究院生命组学研究所【正文语种】中文【中图分类】Q95-3【相关文献】1.睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立2.可诱导心肌特异性表达TRX蛋白转基因小鼠模型的建立3.可调控肝脏特异性表达HCV全基因转基因小鼠模型的建立4.心脏组织特异性表达 Neuregulin -2转基因小鼠的建立及心脏功能分析5.心脏特异性表达KCNQ1V180L转基因小鼠的建立及表型分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2016年2月第24卷 第1期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICAFebruary2016Vol.24 No.1[基金项目]十二五重大新药创制科技项目(编号:2013ZX09302302)。
[作者简介]裴彦宇(1990-),女,硕士研究生,主要从事药物临床前安全性评价研究。
[通讯作者]高虹(1968-),女,硕士生导师,从事药物临床前安全性评价研究。
E⁃mail:gaoh@研究报告利用心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠评价药物心脏毒性的初步探索裴彦宇,孙井江,赵显莉,贺银丽,魏若尧,高虹∗(中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021) 【摘要】 目的 使用两种心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠来评价药物西布曲明(sibutramine)的心脏毒性作用,选择出在评价药物的心脏毒性中具有更高敏感性的动物模型。
方法 8周龄雄性Tg(+)型小鼠、sTg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分别随机分成5组,每组10只,溶媒对照组(灌胃给予纯净饮用水)及4个实验组(50、100、150、300mg/kg西布曲明)。
给药过程中进行一般症状观察以及存活率的测定;给药15d后取血并解剖取心脏,测定各组实验小鼠血生化心脏损伤指标:乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK⁃MB)。
并进行病理组织学检查,免疫组织化学方法观察心脏组织缝隙蛋白43(connexin43,CX43)的表达情况。
结果 (1)血生化指标显示,在给药剂量50mg/kg和100mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于WT型小鼠(P <0.05或P<0.01);在给药剂量50、100和150mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于sTg(+)型小鼠(P<0.05或P<0.01);而在给药剂量300mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著低于WT和sTg(+)型小鼠(P<0.05或P<0.01),且sTg(+)型小鼠减小的程度最小。
(2)病理组织学结果显示,Tg(+)和WT型小鼠各个给药组均表现出心脏损伤的迹象。
(3)免疫组织化学染色显示,随着给药剂量的加大,Tg(+)、sTg(+)和WT型三种小鼠CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量均逐渐下降,且染色颜色逐渐变浅;而CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量下降程度和染色颜色变浅程度由高到低分别为,Tg(+)型小鼠,其次是WT型小鼠,sTg(+)型小鼠。
结论 Tg(+)型小鼠在评价药物潜在心脏毒性试验中可能比WT型小鼠具有更高的敏感性,而sTg(+)型小鼠则是很好的心脏毒性保护模型。
【关键词】 细胞色素P4502E1;基因修饰;西布曲明;药物毒性【中图分类号】Q95-33 【文献标识码】A 【文章编号】1005⁃4847(2016)01⁃0053⁃07Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2016.01.010Exploration of the use of heart⁃specific CYP2E1geneticallymodified mice in evaluation of drug⁃induced cardiotoxicityPEI Yan⁃yu,SUN Jing⁃jiang,ZHAO Xian⁃li,HE Yin⁃li,WEI Ruo⁃yao,GAO Hong∗(Institute of Laboratory Animal Science,Chinese Academy of Medical Sciences(CAMS)&Comparative Medicine Center,Peking Union Medical College(PUMC),Beijing100021,China)【Abstract】 Objective To select more sensitive animal model to evaluate the cardiotoxicity of drugs,we used the heart⁃specific CYP2E1genetically modified mice(α⁃MHC CYP2E1transgenic mice[Tg(+)mice]andα⁃MHC CYP2E1 silencing transgenic mice[sTg(+)mice])to evaluate the drug sibutramine⁃induced cardiotoxicity.Methods The8⁃week old male Tg(+),sTg(+),and C57BL/6mice(wild type,WT),50mice in each group,were randomly divided into5groups:the solvent control group(intragastric gavage of pure drinking water),and the four sibutramine(50mg/kg, 100mg/kg,150mg/kg and300mg/kg)treatment groups,respectively.The general condition of the mice was observedand the survival rate was determined during the drug treatment period.At15days after the sibutramine administration,the blood biochemical indicators of cardiotoxicity lactate dehydrogenase(LDH),creatine kinase(CK),and creatine kinase isoenzyme(CK⁃MB)were assessed,and then the mice were sacrificed and heart tissue samples were taken for pathological examination and immunohistochemical observation of the expression of connexin43(CX43).Results (1)The blood bio⁃chemical indicators in the sibutramine50mg/kg and100mg/kg Tg(+)treated mice were significantly higher than those in the WT mice(P<0.05or P<0.01),and significantly higher in the50mg/kg,100mg/kg and150mg/kg sibutramine treated Tg(+)mice than in the sTg(+)mice(P<0.05or P<0.01).However,when the sibutramine was given at a dose of300mg/kg,the values of those indicators in the Tg(+)mice were significantly lower than that in the WT and sTg (+)mice(P<0.05or P<0.01),with the lowest level in the sTg(+)mice.(2)The pathological examination re⁃vealed cardiotoxic changes in the Tg(+)and WT mice.(3)The immunohistochemical analysis showed that alongside with the increasing drug dose,the expression of CX43was decreased in the intercalated disks of cardiomyocytes in the Tg(+), sTg(+)and WT mice,and the color staining intensity was mostly decreased in an order of Tg(+)>WT>sTg(+) mice.Conclusions Tg(+)mice may have a higher sensitivity in the evaluation of potential cardiotoxicity than WT mice,and sTg(+)mouse is a good model of protection against cardiotoxicity.【Key words】 Cytochrome P4502E1;Gene modification;Sibutramine;Drug toxicity Corresponding author:GAO Hong,E⁃mail:gaoh@ 细胞色素P4502E1(cytochrome P2E1, CYP2E1)是细胞色素P450混合功能氧化酶系的重要成员之一,参与机体内许多内外源性物质的代谢与活化[1]。
CYP2E1主要分布于肝脏,同时在肝外组织如心脏、肾脏等处也有高表达[2]。
一直以来,心脏毒性都是药物临床前和药物临床检验和防治的重点,选择一种理想的药物评价模型是决定药物安全性评价效果的关键因素之一[3]。
本实验选用的两种心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠[(心脏特异性CYP2E1转基因小鼠,α⁃MHC CYP2E1transgen⁃ic mice,Tg(+)和心脏特异性CYP2E1基因沉默小鼠,α⁃MHC CYP2E1silence mice,sTg(+)],来进行药物西布曲明心脏毒性评价的初步探索,以期选择一种敏感性更高的基因修饰动物模型,为评价具有潜在心脏毒性药物的临床前安全性寻找一种更加快速、灵敏、准确的动物模型。
1 材料与方法1.1 实验动物SPF级雄性Tg(+)和sTg(+)各50只,8周龄,20~25g左右,均由中国医学科学院医学实验动物研究所遗传中心构建;雄性WT50只,8周龄,SPF 级,20~25g左右,购自北京维通利华实验动物技术有限公司【SCXK(京)2012-0001】。
