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丙型肝炎病毒血清学分型应用的可行性研究_张天泰

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作者单位:730000　兰州医学院附属一院(张天泰、高评、陈青锋、谢晨);中国药品生物制品检定所(张庶民);北京医科大学微生物系(庄辉)·论著·丙型肝炎病毒血清学分型应用的可行性研究张天泰　张庶民　高评　谢晨　陈青锋　庄辉 【摘要】　目的　探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性。

方法　应用EIA法对兰州地区148例抗-HCV阳性者进行血清学分型。

结果　血清学方法的分型率为56.08%(83148),其中血清1型占50.60%(4283),血清2型占43.37%(3683),1+2混合型占6.03%(583)。

对其中70例HCV RNA阳性血清的基因型与血清型结果进行比较,二者完全相符。

结论　丙型肝炎病毒的血清学分型具有一定的临床应用价值。

【主题词】　肝炎,丙型;　肝炎病毒,丙型;　血清分型Study on applicability of hepatitis C virus serotyping　ZHA NG Tiantai＊,ZH A NG Shumin,GA O Ping,et al.＊Dep artment of Infectious Disease,First Ho spital o f Lanzhou M edical College,Lanzhou730000,China 【Abstract】　Objective　To explore the applicability of HC V serotyping.Methods　Enzyme immunoassay (EIA)was used to detect the serotypes of148patients with viral hepatitis C.Results　56.08%(83148)patients were sero typed,of whom50.06%(4283)were identified to be serotype1,43.37%(3683)serotype2,and 6.03%(583)mixed serotype1and2.The sera from70HCV RNA-postitive patients out of the83ones who were successfull y serotyped were detected for genot yping.The results were completely consistent bet ween serotyping and genotyping.Co nclusion　Serotypin g of HCV has its clinical applicable value.【Key words】　Hepatitis C;　Hepatitis C virus;　Serotyping 丙型肝炎基因型别被认为是干扰素治疗慢性丙型肝炎是否有效的预测因素,虽然基因分型方法敏感、特异、准确,但由于该法技术要求高,一般实验室难以开展。

另外,当HC V R NA阴性或由于保存不当或处理过程中HCV R NA遭破坏时,则不能进行基因分型,这些都限制了HC V基因分型法的广泛应用。

而利用型特异性多肽或重组蛋白为基础发展的血清学分型方法则解决了基因分型法的难题。

因此,为了探讨HC V血清学分型的可行性,我们对148例抗-HCV阳性血清进行血清学分型,并与基因分型结果相比较。

1　材料和方法1.1　标本采集　148例丙型肝炎患者抗-HC V均阳性,诊断均符合1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准。

病例均来源于兰州地区。

1.2　抗-HCV检测　分别用上海科华公司和深圳月亮湾生物工程公司丙型肝炎病毒抗体酶联免疫测定试剂盒,具体操作及结果判定完全按说明书。

1.3　血清学分型　试剂由北京医科大学肝炎试剂研究中心提供。

型特异性抗原多肽根据文献〔1〕采用HC V核心区第65～81位氨基酸合成,血清1型为RPKARRPE GTWAQPGY,血清2型为IPKDRRST-GKSW GKPGY。

将特异性抗原多肽分别包被酶标板,封闭后,与HCV抗体阳性血清37℃温育反应后,洗板,与抗人抗体反应,最后用OPD显色,测定吸光度值,判定结果。

1.4　血清HCV R NA检测　试剂由华美生物工程公司提供,具体操作及结果判定严格按说明书进行。

1.5　HCV基因分型　按型特异性引物PCR法,参照文献〔2〕设计3条通用引物和4条分型引物,均由北京Sybersyr生物工程公司合成。

本法可以将HC V 分为基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。

具体方法见文献〔2〕。

2　结果2.1　血清HCV抗体分型结果　148例抗HCV阳性患者中,83例(56.08%)能够进行血清学分型,其中血清1型42例,占50.60%;血清2型36例,占43.37%;血清1、2混合型5例,占6.03%。

血清1、2型间差异无显著性(P>0.05)。

2.2　HCV基因分型　对83份能够进行血清分型的标本中70份HC V R NA阳性血清进行基因分型,结果基因Ⅱ型34例,占48.57%;基因Ⅲ型32例,占45.71%;Ⅱ、Ⅲ混合型4例,占5.72%,未见Ⅰ、Ⅳ型,基因Ⅱ、Ⅲ型间差异无显著性(P>0.05)。

2.3　HCV基因分型与血清分型结果比较　70份能够进行血清分型且HCV RNA阳性能够进行基因分型的标本中,34份血清1型标本均为基因Ⅱ型,32份血清2型标本均为基因Ⅲ型,4份血清1、2混合型均为基因Ⅱ、Ⅲ混合型,两者分型方法完全符合。

见表1。

表1　HC V血清分型与基因分型结果比较Tab.1　Comparison of serotype and genotype of HCVHCV血清型Serot ype of HCV 例数No.HCV基因型Genotype of HCVⅡⅢⅡ+Ⅲ134340023203201+240043　讨论目前,公认的丙型肝炎病毒基因型为6型11个亚型〔3〕,我国HC V基因型各地报道虽有不同,但主要以Ⅱ、Ⅲ型为主〔4〕。

Machida等〔1〕利用高度保守的HCV核心区蛋白序列中的一段短且高度变异的氨基酸序列,根据其差异将HC V分成两组。

第一组为HCV基因Ⅰ、Ⅱ型特异,第二组为HCV基因Ⅲ、Ⅳ型特异,分别含有相应型别的抗原决定族,根据这些序列合成的型特异性多肽,建立的酶免疫技术能检测血清HC V型特异性抗体,从而将HCV分成血清1型和血清2型。

血清1型相当于基因Ⅰ、Ⅱ型,血清2型相当于基因Ⅲ、Ⅳ型。

本文血清分型率为56.08%(83148),同时存在血清1型、2型和混合型,且1、2型间差别无显著性。

研究结果表明血清和基因分型结果安全相符,与Tanaka等〔5〕报道一致,从而说明HCV在分子水平和免疫水平进行分型具有很好的重复性和可靠性。

血清分型方法简便易行、经济省时,容易重复,易常规开展。

对于无条件进行基因分型的单位应用血清分型指导临床具有实用性。

本文血清分型率低可能是本法单纯以C区合成多肽抗原和合成的特异性蛋白少有关。

Zhang等〔6〕联合应用C区、NS4区和NS5区型特异性多肽进行血清分型,分型率达95%以上,说明本法还需增加其他HCV基因区段抗原,以进一步提高分型率。

在我国存在的基因型别主要为Ⅱ、Ⅲ型,它们分别对应于血清1、2型。

作者认为血清分型方法应用于临床对干扰素治疗的病例选择及疗效判定具有一定的参考价值,同时可以作为基因分型方法的补充,对HC V RNA阴性者进行分型。

参考文献1Machida A,Ohnuma H,Ts uda F,et al.Two distinct subtypes of hepatitisC virus defined by antibodies,directed to the putati ve core protein.Hepa-tol ogy,1992,16:886-891.2Okamoto H,Sugi yama Y,Okaka S,et al.Typing hepatitis C virus by poly-merase chain reaction with type-specific primers:application to clinical survey and tracing infection sources.J Gen Virol,1992,73:673-679.3Simmonds P,Hol mes EC,Cha TA,et al.Cl as sification of hepatitis C virus into six major genotypes and a series of s ubtypes by phyl ogenetic anal ysis of the NS5region.J Gen Virol,1993,74:2391-2399.4杨东亮,郝连杰.我国丙型肝炎病毒基因变异及分型研究现状.中华传染病杂志,1996,14:41-44.5Tanaka T,Tsukiyama-Kohara K,Yamaguchi K,et al.Significance of s pe-cific antibody ass ay for genotyping of hepatitis C virus.Hepatol ogy,1994, 19:1347-1353.6Zhang ZX,Yun ZB,Chen M,et al.Eval uation of a multiple peptide as say for t yping of antibodies to the hepatitis C virus,relation to genomic t yping by the pol ymeras e c hain reaction.J Med Virol,1995,45:50-55.(收稿日期:2000-04-19)·消息·《感染病学新进展》出版《传染病学新进展》(第三辑)出版5年来,学科发生了巨大变化和进展,为此本书特更名为《感染病学新进展》。

它包括概论和各论各半,具有新颖、实用和丰富三大特点,反映了学科从基础到临床的最新研究进展,很多题目或领域过去未曾有过介绍;该书图文并茂,采用了当前国际上常用的参考文献加注方式;内容充实,堪称我国有关感染病进展的最大篇幅专著。

全书128万字,王宇明、顾长海主编,由人民卫生出版社于2001年9月出版,定价92元本。

广泛适用于感染病学、内外科学、儿科学、皮肤病学等临床学科,并可供微生物学、病毒学、免疫学、流行病学、卫生防疫人员及医学院校师生参考。

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HCV血清分型方法的建立及其评价 李丽萍

HCV血清分型方法的建立及其评价 李丽萍

HCV血清分型方法的建立及其评价李丽萍摘要：目的：HCV血清分型方法的建立和基因分型的相关意义。

方法：HCV血清学分型应用ELISA法；用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法；HCV基因分型应用型特异法“PCR”法；结果：在 200 例慢性丙肝患者的血清标本中，基因1120例抗-HCV阳性血清用PCR基因分型检出率为80%。

结论：丙型肝炎病毒分型方法的建立和临床价值的应用，为进一步的血清分型方法的研制与完善提供了理论基础和实验基础。

在临床实施效果显著，值得推广。

关键词：丙型肝炎病毒；血清分型；建立和评价；前言丙型肝炎病毒血清分析和基因分析方法有很大的改观和进步，包括特异性引物扩增后直接测序分析。

灵敏程度和特异性程度都很高。

所以操作的过程中，标本的采取要严格，化学性质严格控制，经过生物技术的一系列实施，特殊处理和保存必须严格，操作技术良好。

复杂的操作技术要严格实施。

从基本的实施类型来看，病毒的含量高低与基因型有关，丙型肝炎病毒的基因与病毒对抗产生的抗体，从生物技术层面进行基因分析，血清分型的过程中把它与基因分型的结果进行比对和完善。

利用生物技术的信息化技术软件应用，把抗体。

血清血型分析研究和基因突变、插入和重组进行一系列的完善和支持，最终目的是把基因技术在血清分型和基因分型方面有所应用和帮助。

1资料和方法1.1一般资料研究表明，HCV属于单股正链RNA，生物和化学性质极其不稳定，容易散开产生基因重组，生物性质发生改变，变异之后的基因无法被分解酶识别，无法参与新陈代谢，这样的基因分解酶无法合成，最终的变异基因会对对人体产生伤害。

变异基因还会在人体内产生基因复制，产生更多的变异基因链，最终人体机能无法承受。

首先血清的处理和后续的分型分析需要的操作技术都很高，不仅过程中的血清处理要严格把控卫生因素，之后的基因配对实验和结论处理也是至关重要的，关系到丙型肝炎病毒的治疗和管理工作。

要把基因治疗和血清血型分析研究管理工作从工作实质和医学原理上进行深度结合，不仅在这个过程的技术操作，还有之后的结论总结与论述。

丙型肝炎检验方法的临床研究与分析

丙型肝炎检验方法的临床研究与分析

丙型肝炎检验方法的临床研究与分析目的回顾性分析丙型肝炎患者检验结果，探讨丙型肝炎的有效检验方法。

方法对209份标本进行酶联免疫法（ELISA）检测抗-HCV和实时荧光定量PCR 法（FQ-PCR）检测HCV-RNA，分析两种检测方法的有效性及差异。

结果检出抗-HCV阳性138份（66.03%），HCV-RNA阳性128份（61.24%），差异无统计学意义（P>0.05）。

抗-HCV与HCV-RNA均阳性者112份（53.59%），两者均阴性的55例（26.32%）。

两种检测方法总符合率为79.90%（配对x2=2.3810，P>0.05）。

结论ELISA和FQ-PCR法检测HCV比较无显著差异，但二者结合检测可提高HCV检出率。

[Abstract] Objective To retrospectively analyze the test results of patients with hepatitis C and explore the effective inspection method for hepatitis C. Methods Anti-HCV was detected by enzyme-linked immunoassay（ELISA）and HCV-RNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR（FQ-PCR）in 209 specimens to analyze the effectivenesses and differences of the two methods. Results 138（66.03%）cases were detected positive for anti-HCV，while 128（61.24%）cases were detected positive for HCV-RNA（P> 0.05）. 112 cases （53.59%）were positive for both Anti-HCV and HCV-RNA，while 55 cases （26.32%）were negative for both Anti-HCV and HCV-RNA.The total coincidence rate of the two methods was 79.90%（paired x2=2.3810，P>0.05）. Conclusion There is no significant difference of detecting HCV between ELISA and FQ-PCR，however，the detection rate of HCV can be improved by combination of the two methods.[Key words] Hepatitis C；Detection；Real-time fluorescent quantitative PCR method；Enzyme-linked immunoassay丙型肝炎（HCV）是一种由丙型肝炎病毒引起的主要经血液传播的慢性疾病，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC），对患者的健康和生命危害极大。

不同检验方法应用于丙型肝炎检验中的临床效果观察

不同检验方法应用于丙型肝炎检验中的临床效果观察

不同检验方法应用于丙型肝炎检验中的临床效果观察刘雯【摘要】目的对当前检验丙型肝炎的不同方法在临床方面表现出来的不同效果进行观察与分析.方法对120例患有丙型肝炎的患者进行血液采集,并采用酶联免疫法、电化学发光法以及丙肝RNA检测法分别进行血液检验,通过对比3种方法当中呈阳性反应的比率进行分析.结果酶联免疫法这一方法检验使用之后,有63例呈现出阳性反应,其阳性率为52.50%;电化学发光这一检验方法使用之后,有85例呈现出阳性反应,其阳性率为70.83%;丙肝RNA检测法使用之后,有102例出现了阳性反应,其阳性率为85.00%;组间相比差异有统计学意义(χ2=30.03,P<0.01).结论酶联免疫方法、电化学发光法以及丙肝RNA检测法都可以在临床当中用于丙型肝炎的检验,但通过比较,丙肝RNA检测法在操作方面更为便捷,并且呈现出来的结果更加直观,是一种首选的丙型肝炎检验方法.【期刊名称】《继续医学教育》【年(卷),期】2017(031)003【总页数】3页(P143-145)【关键词】丙型肝炎;检验方法;酶联免疫法;电化学发光【作者】刘雯【作者单位】天津市第一中心医院检验科,天津 300192【正文语种】中文【中图分类】R446.11丙型肝炎在临床方面是一种比较常见病症，其一般是因为丙型肝炎这种病毒引发的，这种病毒属于一种RNA病毒，并且内在模式属于单股正链结构，其以血液以及与该病毒的携带者接触作为传播渠道。

由于该病毒具有较长的潜伏期，其外在表现不是十分明显，但携带病毒的患者的右上腹还是会稍微感觉到不适，对油产生厌烦的情绪。

这些轻微的病症很容易被丙肝患者忽视，这就对患者及时进行治疗产生较大影响。

同时，丙肝可以向慢性肝炎进行转化，如果不能得到有效治疗，会出现恶化现象，最终导致肝硬化、肝腹水甚至是肝癌。

所以，医生对丙肝患者早期确诊以及治疗非常重要。

本次研究采用的是当前临床常用的一些方法，如酶联免疫方法、电化学发光法以及丙肝RNA检测方法等，主要就是通过将这3种方法得出的试验结果对比分析找出丙肝检验的最佳方法，并将本次研究的结果形成报告如下。

辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型特点及其临床意义

辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型特点及其临床意义

辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型特点及其临床意义【摘要】丙型肝炎病毒是一种世界范围内流行的病原体，具有较高的变异性。

本文旨在探讨辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型的特点及其临床意义。

正文部分分析了丙型肝炎病毒的分型，探讨了不同基因型对临床表现和治疗反应的影响，并介绍了基因分型在流行病学研究中的应用。

结论部分阐述了辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型研究的重要性，以及对临床诊疗的启示和未来基因分型在治疗中的前景。

通过本文，希望能够更深入地了解丙型肝炎病毒的基因分型特点，为临床实践提供更有效的指导。

【关键词】关键词：辽宁地区、丙型肝炎病毒、基因分型、临床意义、治疗反应、流行病学研究、研究意义、临床诊疗、前景展望。

1. 引言1.1 辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型特点及其临床意义在辽宁地区，丙型肝炎病毒基因分型是近年来备受关注的研究领域。

丙型肝炎病毒是一种RNA病毒，其基因组具有高度变异性，目前已知有6个基因型（分别标记为1-6型），每个基因型又可细分为若干亚型。

在丙型肝炎病毒感染中，病毒基因分型在临床上具有重要意义。

不同基因型的丙型肝炎病毒可能导致不同临床表现的疾病，如基因型1在感染后易发展为慢性肝炎，而基因型3对于药物治疗的敏感性较低。

丙型肝炎病毒基因分型对药物治疗的反应也有影响，不同基因型患者对抗病毒治疗的疗效有所不同。

在流行病学研究中，通过对丙型肝炎病毒基因分型的分析，可以更好地了解该病毒在不同地区的流行病学特征，有助于指导疾病预防和控制。

探究辽宁地区丙型肝炎病毒基因分型的特点及其临床意义，对于指导丙型肝炎的诊疗和预防具有重要意义。

2. 正文2.1 丙型肝炎病毒的分型及其意义丙型肝炎病毒（HCV）是一种RNA病毒，目前已知有7个不同的基因型（Genotype 1-7）和大约100个亚型。

这些基因型之间存在着不同的遗传变异，导致它们在全球范围内的分布和流行情况也各有不同。

丙型肝炎病毒的基因型分型对于临床意义非常重要。