过氧化氢酶(catalase CAT) 测定试剂盒(可见光法) 南京建成

小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号过氧化氢酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0051过氧化氢酶检测试剂盒100次产品简介：过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶(Catalase)活性的试剂盒。

在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。

残余的过氧化氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p- benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm 。

用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。

过氧化氢酶分布非常广泛。

在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，是清除能导致氧化损伤的过氧化氢的主要场所。

过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A 240，但蛋白质或其它组份在A 240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干扰。

因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。

本试剂盒通过检测A 520来测定过氧化物酶催化下由过氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml 的过氧化氢酶。

本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。

一个试剂盒共可以进行100次检测。

包装清单：产品编号 产品名称包装 S0051-1 过氧化氢酶检测缓冲液 60ml S0051-2 过氧化氢 (约1M) 5ml S0051-3 过氧化氢酶反应终止液50ml S0051-4 显色底物 20ml S0051-5 过氧化物酶 20µl —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。

一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。

2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。

3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。

二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。

过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。

本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。

碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。

然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。

2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。

四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。

- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。

- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。

2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。

- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。

- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。

- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。

- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0205规格：100T/96S 产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体125μL×1瓶，4℃保存。

产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。

2、CAT 检测工作液的配制：用时在试剂二中加入25mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。

3、测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL 样本和190μL 工作液，立即混匀并计时，记录240nm 下初始吸光值A1和1min 后的吸光值A2。

计算ΔA＝A1-A2。

三、CAT 活性计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、血清（浆）CAT 活力的计算:单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。

Acetaldehyde dehydrogenase 2ameliorates lung endothelial barrier and balances mitochondrial dynamics in mice with acute lung injuryWANG Liya 1,2,TIAN Meihui 2,3,LI Rong 1,2,WU Yue 2,3,WANG Shasha 1,2,LÜHeng 2,3,LIU Zhongyi 2,YU Ying 1,21Department of Physiology,2Key Laboratory of Basic and Clinical Cardiovascular Diseases,3Department of Epidemiology and Health Statistics,Bengbu Medical College,Bengbu 233000,China摘要：目的探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）在脂多糖（LPS ）致小鼠急性肺损伤（ALI ）中的作用及潜在机制。

方法60只C57BL/6J 小鼠随机分为Sham 组、LPS 组、LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）、LPS+ALDH2抑制剂Daidzin 组（LPS+Daidzin ），15只/组。

实验结束后检测肺湿干重比，伊文思蓝（EB ）检测渗透量；HE 染色和透射电镜观察肺组织病理变化及超微结构改变；ELISA 检测血清中4-羟基壬烯醛（4-HNE ）的水平，氧化应激试剂盒测定丙二醛（MDA ）和超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化氢酶（CAT ）水平；Western blot 检测ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin 、线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1以及Nrf2核蛋白和HO-1蛋白的表达。

结果与Sham 组相比较，LPS 组小鼠肺组织湿干重比，EB 渗透均增高（P <0.01）；肺组织结构、内皮细胞间紧密连接及线粒体损伤严重；4-HNE 、MDA 含量升高，CAT 及SOD 活性下降（P <0.01）；ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1和Occludin 、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低，而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05，P <0.01）；此外，Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均增高（P <0.01）。

过氧化氢酶酶活测定方法
一配溶液:
1. 1.5% NaBO3·4H2：
称取1.5g NaBO3·4H2O溶于100ml纯水
2. 0.067M 磷酸盐缓冲：
称取磷酸氢二钠 2.398g溶于100ml纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g 溶于100ml 纯水中，按配方配置成PH为6.8的PBS
3. 1M硫：
10.87ml浓硫酸加入200ml纯水中
4. 0.05M高锰：
0.79g高锰酸钾溶于100ml纯水中。

5. HCl溶液：调PH
二仪器：37°水浴箱，，滴定管，PH试纸，移液器，15ML的离心管，烧杯三步骤：
1.预先用HCL将pH调至6.8的1.5%NaBO3·4H2O 8mL加入含有1.5mL
0.067M ph6.8的磷酸盐缓冲液的烧杯中。

2.在37℃下保持20min后，实验组加入0.5ml酶，对照组加入等量的缓冲
液，混合摇匀。

3．5分钟后，加入到10ml1M硫酸中
4. 在烧瓶中用0.05M高锰酸钾滴定。

5. 结果表示为硼酸单位/每克酶
四计算公式：
酶活力=(V blank—V sample)×0.05×稀释倍数/(样品浓度×0.5) ×(1000/5min)×1000(U/g)
1。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶是生物体内重要的防御系统，它们通过清除自由基来保护细胞免受氧化损伤。

其中，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）是三种主要的抗氧化酶。

测定这些酶的活性对于评估生物体的抗氧化能力具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化酶活性测定方法。

1. 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基（O2）歧化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2）的酶。

常用的SOD活性测定方法包括：氮蓝四唑（NBT）法：利用NBT在超氧阴离子自由基存在下被还原成蓝色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算SOD活性。

羟胺法：利用羟胺与超氧阴离子自由基反应硝酸盐，通过测定硝酸盐的量来计算SOD活性。

2. 过氧化物酶（POD）活性测定方法POD是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的POD活性测定方法包括：愈创木酚法：利用愈创木酚在过氧化物酶存在下被氧化红色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

邻苯三酚法：利用邻苯三酚在过氧化物酶存在下被氧化紫色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。

3. 过氧化氢酶（CAT）活性测定方法CAT是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。

常用的CAT活性测定方法包括：紫外分光光度法：利用过氧化氢在紫外光下具有吸收的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算CAT活性。

酶偶联法：利用过氧化氢在过氧化物酶存在下被氧化水的特性，通过测定水的量来计算CAT活性。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定的实验步骤与注意事项实验步骤1. 样品准备提取酶：根据实验目的，选择合适的组织或细胞提取酶。

常用的提取缓冲液包括磷酸盐缓冲液、TrisHCl缓冲液等。

离心：将提取液离心，分离上清液和沉淀物。

上清液中含有目标酶，沉淀物则含有杂质。

蛋白质定量：使用 Bradford 法或 Lowry 法等蛋白质定量方法测定上清液中的蛋白质浓度。

过氧化氢酶值的测定实验报告一、实验目的过氧化氢酶（CAT）广泛存在于生物体内，能催化过氧化氢分解为水和氧气，从而避免过氧化氢对细胞的毒害作用。

本次实验旨在掌握测定过氧化氢酶值的方法和原理，了解不同样品中过氧化氢酶的活性差异。

二、实验原理过氧化氢酶催化过氧化氢分解的反应式为：2H₂O₂ → 2H₂O ＋ O₂在一定条件下，反应速度与酶浓度成正比。

通过测量单位时间内过氧化氢的减少量或氧气的生成量，可以计算出过氧化氢酶的活性。

本次实验采用碘量法测定过氧化氢酶值。

在酸性条件下，过氧化氢与碘化钾反应生成碘，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定碘，根据硫代硫酸钠的用量计算过氧化氢的剩余量，从而间接求出过氧化氢酶分解的过氧化氢量，进而计算出过氧化氢酶值。

三、实验材料与仪器1、材料新鲜的植物叶片（如菠菜叶）、动物肝脏（如猪肝）、过氧化氢溶液（3%）、碘化钾溶液（10%）、硫酸溶液（2mol/L）、淀粉溶液（05%）、硫代硫酸钠标准溶液（001mol/L）。

2、仪器研钵、离心机、移液管、容量瓶、滴定管、锥形瓶、恒温水浴锅。

四、实验步骤1、酶液提取（1）植物叶片：称取5g 新鲜的植物叶片，洗净剪碎后放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。

将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。

（2）动物肝脏：称取5g 新鲜的动物肝脏，用生理盐水洗净后剪碎，放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。

将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。

2、反应取 3 个锥形瓶，分别标记为空白对照（A）、样品 1（B）和样品 2（C）。

（1）空白对照（A）：加入 2mL 磷酸缓冲液（pH70）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。

（2）样品 1（B）：加入 2mL 酶液（植物叶片提取液）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。

过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。

其主要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。

这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。

因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。

本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。

实验材料：1. 1.5 mL离心管；2. 10% 过氧化氢溶液；3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；4. 视网膜素（1 mg/mL）。

实验步骤：1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。

计算过氧化氢酶活性的公式为：过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。

以对照的A405为100%活性，试验管的活性则为相对活性。

过氧化氢酶的活性单位为U/mg，也可以表示为U/g或U/L。

本实验中，苯酚酐试剂可以与酶提取物中产生的H2O2发生氧化反应，形成深蓝色产物，进而测量吸光度，从而计算出过氧化氢酶的活性。

总之，本实验的目的是测定过氧化氢酶的活性，以此来了解生物体内的氧化还原反应是否正常，并研究它在细胞生物学中的作用。

实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定一、实验目的1.了解过氧化氢酶的作用和测定方法。

二、实验原理过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要作用是催化过氧化氢(H2O2)分解为水(H2O)和氧(O2)，具有清除细胞内产生的过氧化氢的作用，从而保护细胞免受氧自由基的损伤。

测定过氧化氢酶活性的基本原理是利用过氧化氢酶催化过氧化氢分解的特性，测定其对过氧化氢的催化效率，从而求得过氧化氢酶的活性。

三、实验步骤1.将0.05 mL的0.1 mol/L H2O2加入到0.95 mL反应液中，混匀。

2.分别分装0.1 mL过氧化氢酶标准液A(1 U/mL)、待测样品液和纯水于三个小瓶中。

3.向3个小瓶中加入0.6 mL反应液，混匀后立即读取吸光度值。

4.将三个小瓶依次放入比色皿中，加入等体积的反应液，混匀。

5.在室温下，按照每分钟一次，共计计时5分钟，依次读取吸光度值。

6.根据吸光度值计算过氧化氢酶的活性。

四、实验注意事项1.使用新鲜的过氧化氢酶，避免长时间贮存或受热的过氧化氢酶，因其活性会降低。

2.必须按照比色皿上的顺序加入待测样品、过氧化氢酶标准液和纯水。

3.测定过氧化氢酶活性时，要注意比色皿内的反应物混匀程度和加液顺序。

4.读取吸光度时，要记录时间，使时间相同，以便计算活性值。

五、实验结果处理1.计算反应液的吸光度(OD)值。

2.计算酶活性的计算式为：CAT活性=(sample-Blank)/F/(T2-T1)其中，sample为待测样品的吸光度值；Blank为加入纯水的比色皿的吸光度值；F为稀释系数；T2-T1为反应时间，单位为分钟。

1.活性计算结果应该合理，符合实验要求。

2.实验结果能够表明过氧化氢酶的活性。

七、实验总结本次实验通过测定过氧化氢酶活性的方法，了解了测定过氧化氢酶活性的原理，熟悉了测定过氧化氢酶活性的步骤和操作方法。

同时，也掌握了计算过氧化氢酶活性的方法以及如何进行实验结果分析。