猪链球菌2型分离株的生物学特性试验

山东农业科学　２０２２，５４（３）：１３７～１４２ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ　ＤＯＩ：１０．１４０８３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－４９４２．２０２２．０３．０２２猪链球菌２型分离鉴定及其对小鼠的致病性分析刘娜１，２，于江１，２ ，李建达２，张玉玉２，杨灵芝３，任素芳２，丛雁芳４，郭立辉２，陈智２，吕婷婷１，２，安利国１，吴家强１，２（１．山东师范大学生命科学学院，山东济南　２５００１４；２．山东省农业科学院畜牧兽医研究所／山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南　２５０１００；３．山东滨州沃华生物工程有限公司，山东滨州　２５６６０６；４．青岛蔚蓝生物股份有限公司，山东青岛　２６６１１４） 摘要：为了解猪链球菌２型菌株对昆明小鼠的致病性，并建立其感染昆明小鼠模型，本试验分别取２头疑似患链球菌病的病死猪脑组织、血液分别涂布于含５％胎牛血清的ＴＳＡ固体培养基中进行细菌分离；并对分离获得的细菌进行形态观察、ＰＣＲ鉴定、药物敏感性试验、小鼠致病性试验及组织病理切片观察。

结果显示，分离菌为革兰氏阳性短链球菌，经ＰＣＲ鉴定为猪链球菌２型，命名为ＬＹ株；药敏试验证实ＬＹ株对青霉素、红霉素、氯霉素、苯唑西林、环丙沙星、诺氟沙星敏感，对四环素、多粘菌素Ｂ、克林霉素不敏感；ＬＹ株对小鼠致死剂量为２．２×１０９ｃｆｕ／只；组织病理切片观察发现小鼠肺脏、脾脏及心肌均出现不同程度的病变。

本研究明确了山东省猪链球２型毒株的毒力，为疫苗候选菌株的筛选提供了理论依据。

关键词：猪链球菌２型；分离鉴定；小鼠；致病性中图分类号：Ｓ８５２．６１＋１ 文献标识号：Ａ 文章编号：１００１－４９４２（２０２２）０３－０１３７－０６ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓｕｉｓＴｙｐｅ２ａｎｄＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｔｏＭｉｃｅＬｉｕＮａ１，２，ＹｕＪｉａｎｇ１，２ ，ＬｉＪｉａｎｄａ２，ＺｈａｎｇＹｕｙｕ２，ＹａｎｇＬｉｎｇｚｈｉ３，ＲｅｎＳｕｆａｎｇ２，ＣｏｎｇＹａｎｆａｎｇ４，ＧｕｏＬｉｈｕｉ２，ＣｈｅｎＺｈｉ２，ＬüＴｉｎｇｔｉｎｇ１，２，ＡｎＬｉｇｕｏ１，ＷｕＪｉａｑｉａｎｇ１，２（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈａｎｄｏｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ２５００１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ／ＳｈａｎｄｏｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，Ｊｉｎａｎ２５０１００，Ｃｈｉｎａ；３．ＳｈａｎｄｏｎｇＢｉｎｚｈｏｕＷｏｈｕａＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｂｉｎｚｈｏｕ２５６６０６，Ｃｈｉｎａ；４．ＱｉｎｇｄａｏＶｌａｎｄＢｉｏｔｅｃｈＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６１１４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓｕｉｓｔｙｐｅ２ｓｔｒａｉｎｔｏＫｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｔｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍｏｄｅｌ，ｔｈｅｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅａｎｄｂｌｏｏｄｏｆｔｗｏｄｅａｄｐｉｇｓｓｕｓｐｅｃｔｅｄｏｆＳ．ｓｕｉｓｗｅｒｅｃｏａｔｅｄｉｎＴＳＡｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ５％ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｕｍｗａｓｉｄｅｎ 收稿日期：２０２１－１１－１６基金项目：国家自然科学基金项目（３２０７０１７８）；山东省重点研发计划项目（２０２０ＣＸＧＣ０１０８０１）；山东省生猪产业技术体系项目（ＳＤＡＩＴ－０８－０１）；山东省农业重大应用技术创新项目（ＳＤ２０１９ＸＭ００７）；国家万人计划项目（Ｗ０３０２０４９６）；山东省农业科学院农业科技创新工程项目（ＣＸＧＣ２０２１Ｃ０４，ＣＸＧＣ２０２１Ａ１２）；山东省自然科学基金面上项目（ＺＲ２０２０ＭＣ１７７）；山东省重点研发计划（农业良种工程）项目作者简介：刘娜（１９９６—），女，山东聊城人，硕士研究生，主要从事动物微生物与免疫学研究。

猪链球菌2型在感染猪体内的组织定位和动态分布的研究朱爱玲;崔立;杨志彪;蔡雪辉;王淑杰;刘永刚【摘要】为研究猪链球菌2型在感染猪的组织定位和动态分布,本实验采用30头SPF巴马小型猪,随机分为实验组和对照组.实验组20头,按照1×107 CFU·kg-1的剂量肌肉注射ZY05719菌液,对照组10头,按照相同剂量肌肉注射无菌培养基.分别于攻毒后的12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、10 d时处死,剖杀并采集样品(扁桃体、淋巴结、肝脏、脾脏、肺脏、肾、脑),制作冰冻切片,并用特异性免疫荧光抗体染色法和细菌分离方法,观察10日内细菌在各组织内的定位和动态分布情况.结果表明,细菌主要定殖于扁桃体的隐窝附近;在脾的边缘区和动脉周围淋巴鞘附近、淋巴结的生发中心和皮质内、肝血窦、肺间质和肾小体中均可见菌体状荧光颗粒;在脑组织中发生脑膜炎的区域,如皮质层等可检出细菌.细菌在肝、肾、肺和脾等实质器官内呈现相似的动力学,感染后的前3 d持续上升,第6天开始下降;在扁桃体内12 h就能被检出并持续存在;在脑组织中呈现不规律分布.实验结果为研究猪链球菌2型的致病机理提供一定依据.【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2010(028)004【总页数】7页(P319-324,334)【关键词】猪链球菌2型;免疫荧光抗体技术;组织抗原定位;组织动态分布【作者】朱爱玲;崔立;杨志彪;蔡雪辉;王淑杰;刘永刚【作者单位】上海交通大学,农业与生物学院,上海,200240;上海交通大学,农业与生物学院,上海,200240;上海交通大学,农业与生物学院,上海,200240;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S855.99猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是革兰氏阳性、溶血性兼性厌氧的球菌，是一种重要的人畜共患病病原菌，Elliott于1966年在世界上首次正式报道发现了猪链球菌。

2021第3期 1033 讨论猪链球菌在我国养猪场较为常见，该病原也可以感染人，是一种对人畜危害很大的传染性病原。

猪链球菌可分为多种血清型，但猪链球菌2型为主要流行的血清型，且该血清型病原致病力较高，甚至可导致患畜死亡[3，6]。

本试验从湘潭县某猪场发病保育猪组织病料中分离出一例病原菌，形态学及分子生物学方法鉴定结果显示该菌为猪链球菌2型，且对小鼠具有较强的致病力。

由于猪场抗生素不合理的使用导致部分链球菌出现耐药情况严重，但不同地区或猪场流行的猪链球菌耐药情况差异较大。

邓智丹等[8]研究表明，广东省某规模化猪场流行的2型猪链球菌对青霉素、阿莫西林、头孢类（头孢拉定、头孢噻呋等）和恩诺沙星等药物敏感，但对强力霉素耐药；杨春蕾等[9]调查结果发现2型链球菌天津分离株对阿米卡星、四环素和强力霉素等高度耐药。

而本试验分离的菌株对链霉素、林可霉素和氟苯尼考高度耐药，但对头孢类、青霉素和环丙沙星等药物高度敏感，这与邓智丹等[8]和杨春蕾等[9]的研究结果有差异，同时也说明了对分离菌株进行药敏试验分析的重要性。

根据药敏试验结果可筛选对该致病菌敏感的药物，从而有利于快速制定防控该病的有效措施。

参考文献[1] 郭长明，陈怀君，朱善元，等.广西某猪场猪链球菌分离鉴定及其生物学特性研究[J].中国畜牧兽医，2021，48（2）：736-746.[2] 赵贤杰，张熙，林梓华，等.猪链球菌病的防控综述[J].猪业科学，2020，37（8）：57-59.[3] 陈晴晴，孙永，史永林，等.安徽省一例人感染猪链球菌病例的病原学特征分析[J].安徽预防医学杂志，2020，26（1）：12-15.[4] 陈冲，张敏敏.猪链球菌致化脓性脑膜炎1例[J].中国感染与化疗杂志，2020，20（1）：86-88.[5] 周婷婷，李媛，任立松，等.猪链球菌的分离鉴定及16SrDNA序列分析[J].现代畜牧兽医，2021（2）：57-61.[6] 曾凯，康润敏，杨跃奎，等.规模化猪场仔猪猪链球菌分离鉴定及药物敏感性分析[J].养猪，2020（4）：92-94.[7] Kerdsin A, Dejsirilert S, Akeda Y, et al . Fifteen Streptococcussuis serotypes identified by multiplex PCR[J]. J Med Microbiol, 2012, 61: 1669-1672.[8] 邓智丹，黄良宗，白挨泉.广东省1株猪2型链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究[J ].中国畜牧兽医，2021，48（2）：717-725.[9] 杨春蕾，董志民，李秀丽，等.天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医，2018，45（3）：822-829. （编辑：富春妮）致鱼胆中毒的案例报告如下。

猪链球菌2型毒力因子研究进展摘要：猪链球菌是重要的人兽共患病，尤以猪链球菌2型最为流行。

通过对猪链球菌2型毒力因子的研究，已确定几种主要毒力因子，研究中又发现几种新型的毒力因子，期望从这些毒力因子当中发现它们的功能及其相互关系，揭开猪链球菌感染的神秘面纱，进而控制猪链球菌病的发生。

关键词：猪链球菌2型；主要毒力因子；新型毒力因子猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是世界范围内引起猪链球菌病最主要的病原，也是重要的人畜共患病病原体，根据菌体荚膜多糖抗原性的不同，分为35个血清型（1—34型，1/2型）[1,2]。

可以引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、肺炎、流产、多浆膜炎及人的急性脑膜炎、永久性耳聋、感染性中毒性休克综合症等疾病，严重的可导致死亡[1,3,4]。

主要致病血清型为SSl、SS2、SSl／2、SS7、SS9和SSl4，其中以SS2流行最广、致病性最强[5]。

我国发生的猪链球菌病主要由C群和D群引起。

由猪链球菌2型引起的猪链球菌病，过去在欧洲、南亚、北美一些国家流行比较多，但近些年在我国也时常发生。

国内1991年在广东省首次分离鉴定到SS2；1998年我国江苏发生的猪链球菌2型引起的链球菌病造成几十人感染，十余人死亡；2005年在四川发生的猪链球菌2型引起的链球菌病导致206人感染，38人死亡；2006年9月，广西某猪场发生由猪链球菌2型引起的链球菌病，导致多头猪只死亡，所幸无人感染。

由于猪链球菌2型引起的链球菌病属人兽共患病，死亡率较高，不仅可造成巨大的经济损失，而且给公共卫生带来严重威胁。

从2007年至2010年，每年暑假我都去猪场实习，发现我所到的几个猪场都将链球菌病列入免疫程序当中，可见人们对链球菌的恐惧并未消除。

SS2存在着强致病力、弱致病力和无致病力菌株。

强致病株引起猪严重的临床症状，并能从中枢神经系统分离出病菌。

弱致病力菌株仅引起温和的临床症状，偶尔能从中枢神经系统分离出该菌。

猪链球菌的分离与鉴定【摘要】本文主要介绍了猪链球菌的分离与鉴定过程。

通过采集和处理样品，结合合适的分离和鉴定方法，成功从混合样品中分离出猪链球菌并进行鉴定。

结果分析表明，所得到的猪链球菌具有一定的毒力和抗生素的敏感性。

实验步骤清晰明了，可供参考。

通过本研究，我们发现猪链球菌在疾病控制和预防中的重要性，为下一步的研究提供了基础。

我们的研究结论为猪链球菌的防控提供了理论支持，也为相关领域的研究提供了新的思路。

展望未来研究方向包括猪链球菌的毒力机制、抗生素耐药性以及新型治疗方法的研究，为更好地控制和预防猪链球菌相关疾病提供参考。

【关键词】猪链球菌、分离、鉴定、样品采集、处理、实验步骤、结果分析、研究结论、未来研究方向、重要性、研究背景1. 引言1.1 猪链球菌的分离与鉴定的重要性猪链球菌是一种广泛存在于动物和人类体内的致病菌，能够引起多种疾病，包括呼吸道感染、皮肤感染和败血症等。

对猪链球菌的分离与鉴定是非常重要的，可以帮助我们更好地了解该菌种的传播途径、耐药性情况以及致病机制，有助于制定预防和控制措施。

在临床医学中，快速准确地分离和鉴定猪链球菌对于诊断和治疗相关疾病至关重要。

只有通过准确鉴定病原菌，才能选择合适的抗生素进行治疗，避免药物滥用和抗药性产生。

对猪链球菌的分离与鉴定还可以帮助疾病防控部门及时控制疫情扩散，保障公共卫生安全。

对猪链球菌的分离与鉴定研究具有重要的实用价值和意义，可以为疾病防治和临床诊疗提供有力支持。

通过本次实验的开展，我们将探索猪链球菌的分离与鉴定方法，为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。

1.2 研究背景猪链球菌（Streptococcus suis）是一种属于球菌科的革兰氏阳性细菌，主要存在于猪的口腔、鼻腔和肠道中。

猪链球菌对猪群的健康产生严重影响，可导致猪链球菌病的发生，表现为败血症、菌血症、脑膜炎等严重疾病。

猪链球菌也是人类的致病菌之一，可以引起人类感染并导致严重疾病，如败血症、脑膜炎等。