生物化学实验基本操作

生物化学的基本操作与血清尿素测定实验报告
一、实验原理：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的二甲基氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰与强酸作用产生二乙酰。

二、实验试剂：
1、酸性试剂：在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸
44ml、85%磷酸66ml。

冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉2g，溶解后用去离子水稀释至IL。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

三、基本操作及注意事项：
1、试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，（每小时小于5%）。

煮沸显色经冷却后，应及时比色。

2、尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。

四、评价：
1、本法试剂单一，方法简便，但试剂毒性和腐蚀性。

在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。

生物化学实验基本操作在生物化学研究中，实验操作是非常关键和基础的环节。

正确的实验操作能够确保实验结果的准确性和可重复性。

本文将介绍生物化学实验的基本操作步骤，以及注意事项和常见错误，旨在帮助读者进行高质量的实验。

1. 实验室准备实验前需要充分准备实验室和实验设备。

确保实验室环境整洁，无杂物和污染物。

检查实验设备的完整性和正常运行状态，如酶标仪、离心机、超低温冰箱等。

检查试剂的标签和耐期，确保试剂无污染、完整密封。

准备所需的试剂和溶液，按照实验要求正确称量和稀释。

2. 安全措施生物化学实验涉及到一些有害物质和有毒试剂，因此必须采取相应的安全措施。

佩戴实验手套、眼镜和口罩，避免直接接触化学物质。

对于具有刺激性和致敏性的试剂，应采取适当的通风和排放措施。

在实验操作过程中，注意实验室的安全出口和紧急出口，以应对突发情况。

3. 实验记录实验过程中的记录是非常重要的部分，确保实验结果的可靠性和重复性。

在实验前，准备好实验记录表格，包括实验步骤、试剂使用量、反应时间和实验结果等。

实验过程中，实验人员应及时、准确地记录各项数据和观察结果，不漏一步、一项。

同时，注意记录实验中的异常情况和发现的问题。

4. 实验步骤生物化学实验的步骤根据具体实验目的和方法而定，但一般包括样品处理、试剂制备、反应或分离、结果检测等。

在进行每一步操作之前，确保实验器材和试剂已经准备好，操作空间整洁无杂质。

按照实验步骤的要求依次进行操作，注意操作的顺序和时间控制。

严格按照实验方法和条件要求操作，避免人为因素对实验结果的影响。

5. 清洁和废弃物处理实验完成后，要及时清洁实验器材和实验台面，避免试剂残留和交叉污染。

使用正规的清洗剂和方法进行清洗，定期对实验室进行无菌处理和消毒。

对于废液和废弃物的处理，要按照实验室的规定和环保要求进行集中收集、处理和处置。

总之，生物化学实验的基本操作包括实验室准备、安全措施、实验记录、实验步骤和清洁处理等环节。

生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。

配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。

2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。

3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。

不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。

4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。

5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。

倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。

6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。

7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。

手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。

还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。

8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。

9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。

一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。

10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。

（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。

2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。

而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。

滤纸越致密，过滤就越慢。

3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。

沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。

最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。

4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。

折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。

放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。

撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。

生化实验室基本操作1 玻璃仪器的清洗实验中所用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验的结果，往往由於仪器的不清洁或被污染而造成较大的实验误差，有时甚至会导致实验的失败。

做生物化学实验对玻璃仪器清洁程度的要求，比一般化学实验的要求更高。

这是因为：①生物化学实验中蛋白质、酶、核酸等往往都是以“毫克”和“微克”计的，稍有杂质，影响就很大。

②生物化学实验对许多常见的污染杂质十分敏感，如金属离子（钙、镁离子等）、去污剂和有机物残基等，因此玻璃仪器（包括离心管等塑料器皿）是否彻底清洗净就是非常重要的。

⑴初用玻璃仪器的清洗新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。

⑵使用过的玻璃仪器的清洗先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。

清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。

⑶石英和玻璃比色皿的清洗决不可用强碱清洗，因为强碱会浸蚀抛光的比色皿。

只能用洗液或1％～2％的去污剂浸泡，然后用自来水冲洗，这时使用一支绸布包裹的小棒或棉花球棒刷洗，效果会更好，清洗干净的比色皿也应内外壁不挂水珠。

2 塑料器皿的清洗聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化学实验中已用的越来越多。

第一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10—3 mol/L EDTA 除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。

一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。

最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。

2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。

若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。

在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。

因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。

生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。

其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。

重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。

因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。

由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。

洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。

（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。

（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。

（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。

（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。

玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。

生物化学实验操作标准流程实验目的：本实验旨在通过一系列生物化学实验，掌握生物化学实验的基本操作技能，培养实验操作能力，进一步巩固和增强生物化学知识。

实验原理：生物化学实验是利用生物体内某些特定化学反应的原理和方法，在实验室中进行的活动，旨在研究生物体内的生化过程、生化成分及其相互作用。

需要通过实验仪器的使用、试剂的配制、实验步骤的操作等一系列过程来确保实验顺利进行。

实验材料：试管、坩埚、实验动物、试剂、生物化学仪器等。

实验步骤：1. 实验前准备：清洗实验仪器，准备所需试剂，并检查实验动物的状态。

2. 实验操作：a. 锁定实验目标和方法；b. 配制试剂：根据实验要求，精确称量所需试剂，配制标准溶液；c. 进行实验：按照实验操作流程，逐步进行各项实验操作；d. 记录数据：准确记录实验数据，包括实验结果、出现异常情况等；e. 处理实验废物：将实验废物妥善处理，避免对环境造成污染。

实验注意事项：1. 实验操作时要戴好实验手套、口罩等防护用具，确保人员安全；2. 注意实验仪器的使用方法，避免损坏实验设备；3. 严格按照实验流程操作，不得擅自修改实验步骤；4. 学会分析实验结果，及时发现问题并采取措施解决；5. 实验结束后，保持实验室的整洁，及时清理实验废物。

实验总结：通过本次生物化学实验，我掌握了生物化学实验的操作标准流程，充分锻炼了实验技能，增强了对生物化学知识的理解和掌握。

生物化学实验是培养科学素养和实践能力的重要途径，希望通过不断实验实践，提高实验技能，为将来的科研工作做好准备。

以上便是生物化学实验操作标准流程，通过认真学习和实践，相信你会逐渐掌握生物化学实验的操作技能，取得更好的实验成果。

祝愿你在科学领域不断前行，成为优秀的生物化学研究者！。

《临床生物化学和生物化学检验》实验指导前言实验教学作为基础医学教学中的一项重要内容，在培养学生分析问题、解决问题及动手能力等方面发挥着十分重要的作用。

临床生物化学检验实验教学是临床生物化学检验课程的重要组成部分，本教研室根据中医本科专业的特点，并依据《临床生物化学检验》实验大纲要求，结合多年的教学实践，组织编写了《临床生物化学和生物化学检验》实验指导。

本实验指导内容共12项实验。

每项实验包括实验目的、实验原理、实验内容（材料、方法、结果分析及注意事项）等项目，同时后附思考题，以供学生独立思考、加深理解。

实验学时：48学时实验一基本操作（综合性实验，4学时）【实验目的】1.掌握移液管、微量加样器正确使用方法。

2.掌握721分光光度计的正确使用方法及简单维护3.熟悉试验结束后试管、移液管的清洗方式【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：721分光光度计、玻璃试管、微量加样器、移液管、试管架、洗耳球、记号笔等。

2.实验试剂：蒸馏水、生理盐水等。

【实验项目、方法与步骤】1、微量移液器使用（1）根据取用溶液体积选用适当量程的微量移液器a)P20 2 ~ 20b)P200 21 ~ 200c)P1000 201 ~ 1,000（2）容量设定从大值调整到小值时，刚好即可。

从小值调整到大值时，需要调超过三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。

不要将按钮旋出量程，这将导致移液器损坏。

（3）吸液头安装正确的安装方法是：把白套筒顶端插入吸液头，在轻轻用力下压的同时，把移液器按逆时针方向旋转180度。

切记用力不能过猛，更不能采取剁吸液头的方法来进行安装，那样做会对移液器造成不必要的损伤。

（4）预洗吸液头安装了新的吸液头或增大了容量值以后，应把需要转移的液体吸取、排放两到三次。

这样做是为了让吸液头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使移液过程具有重现性。

（5）吸液先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸液头垂直浸入液面。

生物化学实验southwestern blotting
实验步骤
Southwestern blotting 是一种用于检测蛋白质与 DNA 相互作用的技术，以下是该实验的基本步骤：
1. 制备 DNA 探针：选择你感兴趣的 DNA 片段，并使用放射性同位素（通常是 32P）或荧光标记对其进行标记。

2. 制备蛋白质样品：将待检测的蛋白质样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，并通过电转移将蛋白质转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。

3. 膜的预处理：将转移后的膜在Blocking buffer 中孵育，以封闭非特异性结合位点。

4. 杂交：将标记的 DNA 探针与膜上的蛋白质进行杂交。

可以在杂交缓冲液中进行，通常在 42°C 下孵育过夜。

5. 洗膜：在杂交后，用 washing buffer 洗涤膜，以去除未结合的 DNA 探针。

6. 检测：使用放射性自显影或荧光检测方法，检测膜上结合的 DNA 探针。

7. 结果分析：通过观察膜上的杂交信号，确定哪些蛋白质与标记的 DNA 探针发生了相互作用。

需要注意的是，Southwestern blotting 实验步骤可能因具体的实验条件和目的而有所不同。

在进行实验之前，建议仔细阅读相关的实验手册和文献，并根据实际情况进行适当的调整和优化。

总论21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。

生物化学实验是医学院校学生必修的一门独立的基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。

20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。

本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。

同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。

一、实验要求1．实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果，操作关键步骤及注意事项。

2．实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果，结果不良时，必须重做。

3．实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。

根据实验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。

二、实验时注意事项1．进实验室要穿好实验服，以免酸碱腐蚀衣服。

2．进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具等。

3．要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐,按次序放置。

实验完毕要按各类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。

4．实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所，操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹，不得随地吐痰，乱丢纸屑。

生物化学实验基本操作一、实验目的1、熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。

2、掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。

3、通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及计算。

二、实验仪器与试剂1、实验器材仪器名称型号厂家PH计Sartorius PB-10干燥箱101EXB-3型电热鼓风干燥箱上海树立仪器仪表有限公司酶标仪DNM-9602酶标分析仪北京普朗新技术有限公司2、实验试剂试剂名称生产厂家生产批号质量（g）Na2HPO4北京化工厂201007017.16NaH2PO4北京益利精细化学品有限公司20110313 3.12NaCl天津市塘沽化学试剂厂850328 0.9BCA蛋白定量试剂盒北京普利莱基因技术有限公001107三、实验内容（一）蛋白质的定量测定1、实验原理Bicinchoninic acid (BCA)法是近来广为应用的蛋白质测定方法。

即在碱性环境下，蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。

BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值，并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。

2、实验方法（1）、工作溶液（Working Reagent,WR）的配制：将50体积BCA Reagent 与1体积Cu Reagent 混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色。

（2）、标准蛋白溶液配制：用双蒸水与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释：40μl 4000μg/ml BSA+60μl 稀释溶液（H2O）=100μl（BSA=1600μg/ml）,从中取出50μl连续倍比稀释，得到BSA标准溶液1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,各50μl。

（3）、蛋白测定蛋白质浓度线性检测范围为10-2000μg/ml。

微板测定用96孔板，反应终体积225μl，用酶标仪测定。

a.微板测定：用加样器将25μl标准品与200μl WR工作液混合于微板孔中。

第二章生物化学实验基本操作第一节玻璃仪器的规格和使用一、吸管的使用计量仪器的选择应根据量取液体的体积大小而定，同时要考虑量取的准确度(表2-20)。

表2 -1计量仪器的选择标准计量仪器最佳量程准确度滴管30µl至2ml 低量筒5-200Oml 中等容量瓶5-2000ml 高滴定管1-25ml 高吸管/移液枪5µl至10ml 高微量注射器0.5-10ml 高天平任何量度(取决于天平的准确度) 极高锥形瓶/烧杯25-500Oml 极低吸管(吸量管)为精密计量容器，生化实验中经常使用。

（一）吸管的类型1．移液管即单刻度吸管（1）普通单标吸管它的中部有一圆柱状空泡，只能量全量。

当所量取的液体自行流出后，使吸管尖端在受壁上停留3-5秒，所余少量液体不必吹出，因为其固定倾出容量已经检定。

（2）奥氏吸管它具有一相当大的卵形空球及一短小的出口。

当将所量取的液体放出后，必须将遗留在管尖内的少量液体吹入受器内。

某些奥氏吸管带有玻璃塞。

在所有的吸管中以奥氏吸管的准确度最高，常用于定量实验。

2. 吸管即多刻度吸管（1）普通吸管它是直筒状吸管，其上有多个刻度。

北京玻璃厂生产的吸管， 1ml以下(不包括1ml)都必须把尖端遗留的液体吹入受器中，新产品都注明有“吹”字。

1ml以上(包括1ml)则不吹出尖端遗留的液体。

当液体不再流出时，应使该管尖紧靠受器内壁一段时间。

这种吸管又分为慢流速、快流速2种。

按其容量和精密度不同，慢流速吸管又分为A级与B级，快流速吸管只有B级。

使用时，A级最后停留15秒， B级最后停3秒，同时需转动吸管。

（2）莫氏吸管总量刻度在尖端以上，卸放液体时按刻度进行。

（二）刻度吸量管移液操作1. 选取原则：每根吸量管上有许多等分的刻度，在刻度标记有自上而下和自下而上两种，规格为0.1 ml，0.2 ml，0.5ml，1ml，2 ml，5 ml，10 ml等。

在一次完成移液的前提下，应选用容积较小的吸量管，对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管。