《生物化学实验》内容课程类型：制药工程专业必修实验总学时：32课时开设实验项目数：8个适用对象：2017制药工程1、2班实验教师：段志芳一、实验目标及基本要求生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。
二、实验内容三、成绩包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。
四、要求（1）实验过程中同组人可以配合进行；（2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；（4）对实验结果进行简单的分析.实验一植物组织中可溶性总糖的提取一、实验目的1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。
2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。
3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。
二、实验原理可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。
它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。
总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。
其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。
本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。
三、实验用品1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。
可共用。
2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。
此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。
3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。
4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若干。
每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。
四、实验操作取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。
称取0.5g，剪碎，加入5～10ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。
五、实验结果与讨论1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。
2、结合实验二结果计算含量六、实验注意事项（1）若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。
（2）加热时应小心，避免灼伤皮肤。
七、思考题1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
2、用水提取的糖类有哪些？实验二蒽酮比色法测定可溶性总糖含量一、实验目的1、掌握蒽酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法2、掌握标准曲线的绘制3、掌握分光光度计的使用方法二、实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应)，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm ，故在此波长下进行比色。
三、实验材料、试剂与仪器设备1、仪器分光光度计（配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶）；电子天平（配称量纸）；离心机（配离心管），恒温水浴锅。
2、玻璃器皿0.5mL、1 mL、5 mL刻度吸管各2支（配合适大小吸耳球）；10 mL具塞具刻度试管10支（应干净干燥，放到试管架上）；100 mL 烧杯2个；10 mL量筒1个；玻璃棒1根；长胶头滴管1根。
此部分为每组所用，放置各实验台上。
3、试剂：（1）~（3）由实验员配制，贴好标签（1）80 %乙醇（2）葡萄糖标准溶液( 100 μg/mL )：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至1000 mL。
（3）蒽酮试剂：称取1.0 g 蒽酮，溶于80% 浓硫酸(将98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中) 1000 mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ~ 3 周。
（4）样品贮备液：学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。
四、实验步骤1、标准曲线制作取6支试管，从0 ~ 5分别编号，按下表加入各试剂：表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮10 min，取出冷却，在620 nm 波长下用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量( μg )为横坐标绘制标准曲线。
2、样品测定将样品贮备液用蒸馏水稀释到合适范围，取该溶液1.0 mL 加蒽酮试剂5 mL，同以上操作显色测定光密度。
重复3 次。
按照下式计算可溶性总糖的含量：w=n⨯m1V1/ m2⨯100%V2式中：w---表示总糖含量n---稀释倍数m1-----从标准曲线查得糖量, μg .m2------样品重( g ).v1------提取物总体积（ml）v2------测定时样品体积（ml）五、结果与讨论：1．绘制出标准曲线2．含量的计算六、实验注意事项（1）加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。
（2）水浴加热时应打开试管塞。
七、思考题1、植物组织中糖的测定方法还有哪些？举例说明其原理和优缺点？2、制作标准曲线时应注意哪些问题？实验三卵磷脂的提取与鉴定一、实验目的1、掌握磷脂类物质的结构和性质。
2、掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。
3、掌握乙醇做溶剂提取的操作技术。
二、实验原理磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。
卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。
甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。
这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。
三、仪器和试剂1、仪器设备电子天平(精确到0.00g，配9cm称量纸)；减压蒸馏装置（旋转蒸发仪+水循环真空泵+相应橡胶管，用前由实验员检查是否正常；配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶，2500mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇，与仪器同台放置，提取时重复使用）。
此部分共用。
2、玻璃器皿回流装置一套（500mL 恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250 mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；过滤装置一套（铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250 mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干）；100 mL量筒各一个；100 mL烧杯一个；玻璃棒1根；长胶头滴管1个；长药勺1个；试管2支；蒸发皿1个。
此部分为每组所用，放置各实验台上。
3、药品试剂（3）由实验员配制，贴好标签。
（1）鸡蛋黄（2）95%乙醇（3）10%氢氧化钠溶液4、其它：红色石蕊试纸若干；剪刀2把；一次性手套若干；纸巾若干；标签纸若干。
每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。
四、操作步骤1、卵磷脂的提取取250 mL24#磨口圆底烧瓶，放入2cm的磁力搅拌子，加入蛋黄20 g和95%乙醇60 mL，搅拌加热，稍冷后过滤到250 mL具塞磨口锥形瓶中，盖好塞子，滤渣同法提取2~3次，合并提取液，如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。
提取液减压蒸馏至少量，回收乙醇（放入回收瓶中），将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。
称重并计算得率。
2、卵磷脂的鉴定取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL 氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。
五、结果与分析1、观察产品的颜色外观2、计算产率3、鉴定结果六、思考题：1、卵磷脂的生物学功能有哪些？2、卵磷脂提取过程中，加入95%乙醇的作用是什么？实验四脂肪皂化价的测定一、目的1、掌握油脂的主要理化性质2、掌握油脂皂化价的测定原理和方法。
3、掌握滴定分析法的操作二、原理脂肪的碱水解称皂化作用。
皂化1g 脂肪所需的KOH 的毫克数称为皂化价。
脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。
三、仪器、试剂和材料1、仪器设备：电子天平(精确到0.000g，配5 ml称量瓶)。
2、玻璃器皿：回流装置一套（500mL 恒温磁力搅拌电热套(配2cm 磁子)1台+250 mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；酸碱滴定管1支；50ml量筒1个；磨口具塞锥形瓶2只；100ml烧杯1只；玻棒1根。
此部分为每组所用，放置各实验台上。
3、药品试剂：（2）~（5）由实验员配制，贴好标签。
（1）豆油（2）0.100mol/L 氢氧化钠乙醇溶液：以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。
（3）0.100mol/L标准盐酸溶液：取浓盐酸8.5ml ，加蒸馏水稀释至1000ml, 然后对此溶液进行标定。
（4）70%乙醇：取95%乙醇70 ml，加蒸馏水稀释至95ml。
（5）1%酚酞指示剂：称取酚酞1g，溶于100ml 95%乙醇。
四、操作步骤1. 在天平上称取脂肪0.5g 左右，置于250ml 圆底烧瓶中，加入0.1mol/LNaOH乙醇液50ml。
装上冷凝管回流30-60min，至瓶内的脂肪完全皂化止（此时瓶内液体澄清并无油珠出现，若乙醇被蒸发，可酌情补充适量70%乙醇。
