分子生物学实验室需要的仪器配置
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一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
分子生物学实验室的器材配置分子生物学作为基因工程的上游技术,其实验的成果和准确性将决定下游所有的步骤和最终的实验结果。
所以构建一个完备的分子生物学实验室是非常重要的,以下就让我们来看看构建一个分子生物学实验室需要哪些仪器?1. 冰箱:根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的冰箱。
最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。
4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。
-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。
0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。
2. 培养箱:37℃恒温箱用于细菌的平板培养及分子生物学实验。
3. 恒温培养摇床:用于大肠杆菌等生物工程菌种的扩增。
4. 水浴锅:用于保温并进行各类实验。
25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验,各种生物化学酶反应等试验的保温。
含低温的水浴槽可以用于分子生物学的质粒与基因片段的连接等实验及用于42度的大肠杆菌感受态的热激。
5. 烘箱:主用于烘干实验器皿,有些需要温度高些,有些需要温度低些。
用于RNA方面的实验用具,需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。
6. 超纯水机:随着分子生物学的飞速发展,许多实验对水纯度的要求越来越高,用自来水、蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水,磁铁耦合齿轮泵作用使水循环。
用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。
7. 蒸汽消毒锅:分子生物学所用大部分试剂,而且实验用具都应严格消毒灭菌。
用于小批量物品的随时消毒。
大批实验物品、试剂、培养基可使用大型消毒且定时进行消毒。
8. 滤器滤膜:不耐高温、高压的试剂用其处菌。
9.各种天平:台秤、精密电子分析天平,用于精确称量各类试剂。
10.液体体积的度量:量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯、锥形瓶等。
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介一、实验目的熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用二、实验原理1、恒温气浴摇床:用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养,发酵,杂交,生化反应及酶和组织研究等。
2、超净工作台:用于分子生物学无菌操作。
3、低温台式高速离心机:用于分离纯化DNA和蛋白质等,如基因片段的分离,蛋白酶的沉淀和回收等。
4、微量移液管:是连续可调的,计量和转移液体的专用仪器,其装有直接读数容量计。
有多种规格:①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。
5、电泳仪:用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。
6、PCR仪:用于目的基因的扩增,是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。
主要用于基础研究和应用研究等领域。
7、灭菌锅:用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂,器皿及实验用具的严格灭菌。
三、实验仪器恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。
四、实验步骤(一)、恒温气浴要穿的使用:1、样品瓶牢固放入弹簧夹中2、接通电源开关,仪器进入准备状态3、参数设定,(设定温度、时间、转速等参数)4、按启动键仪器开始工作,按暂停键可暂停托盘的旋转;5、按电源键,显示屏显示消失,关闭电源总开关(二)、超净工作台的使用1、使用工作台时,先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面,然后用消毒剂擦拭消毒。
2、接通电源,提前30分钟打开紫外灯照射消毒,处理净化工作区内工作台表面积累的微生物,15分钟后,关闭紫外灯,开启送风机。
3、工作台面上,不要存放不必要的物品,以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4、操作结束后,清理工作台面,收集各废弃物,关闭风机及照明开关,用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5、最后开启工作台紫外灯,照射消毒30分钟后,关闭紫外灯,切断电源。
(三)、低温台式高速离心机的使用1、把离心机放置于平面桌或平面台上,目测使之平衡,用手轻摇一下离心机,检查离心机是否放置平衡。
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介.第一篇:实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介.实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介一、实验目的熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用二、实验原理1、恒温气浴摇床:用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养,发酵,杂交,生化反应及酶和组织研究等。
2、超净工作台:用于分子生物学无菌操作。
3、低温台式高速离心机:用于分离纯化DNA和蛋白质等,如基因片段的分离,蛋白酶的沉淀和回收等。
4、微量移液管:是连续可调的,计量和转移液体的专用仪器,其装有直接读数容量计。
有多种规格:①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。
5、电泳仪:用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。
6、PCR仪:用于目的基因的扩增,是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。
主要用于基础研究和应用研究等领域。
7、灭菌锅:用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂,器皿及实验用具的严格灭菌。
三、实验仪器恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。
四、实验步骤(一)、恒温气浴要穿的使用:1、样品瓶牢固放入弹簧夹中2、接通电源开关,仪器进入准备状态3、参数设定,(设定温度、时间、转速等参数)4、按启动键仪器开始工作,按暂停键可暂停托盘的旋转;5、按电源键,显示屏显示消失,关闭电源总开关(二)、超净工作台的使用1、使用工作台时,先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面,然后用消毒剂擦拭消毒。
2、接通电源,提前30分钟打开紫外灯照射消毒,处理净化工作区内工作台表面积累的微生物,15分钟后,关闭紫外灯,开启送风机。
3、工作台面上,不要存放不必要的物品,以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4、操作结束后,清理工作台面,收集各废弃物,关闭风机及照明开关,用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
分子生物学实验室常用仪器设备简介实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介实验目的:1了解分子生物学实验室的常用仪器设备的类型及用途。
2 掌握常用仪器设备的正确操作方法。
实验原理:分子生物学实验室常用仪器设备是顺利完成各项分子生物学实验的保障。
若不会或错误地使用设备,不仅会使实验结果错误,还会给他人带来不便,有些还会带来经济损失。
因此,正确使用操作仪器设备应是每位学生必须首先学会的技能。
实验室主要仪器:微量移液器、低温离心机、PCR仪、电泳仪、恒温气浴摇床、超净工作台、灭菌锅实验内容及操作步骤:微量移液器:微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器,其装有直接读数容量计。
微量移液器有多种规格,在移液器量程范围内能连续调节读数。
移液器常见的四种规格分别是:0.5,10μl(读数窗显示0.5,10.0,每转1档为0.1μl);10,100μl(读数窗显示10.0,100, 每转1档为1μl);20,200μl(读数窗显示20,200, 每转1档1μl);100,1000μl(读数窗显示100,1000, 每转1档为5μl).量液的操作步骤:1( 将微量移液器装上吸头(不同规格的移液器用不同的吸头)2( 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点;3( 垂直握持微量移液器,使吸嘴浸入液样面下几毫米,千万不要将吸嘴直接插到液体底部;4( 缓慢、平稳地松开控制按钮,吸上样液。
否则液体进入吸嘴太快,导致液体倒吸入移液器内部,或吸入体积减少;5( 等一秒钟后将吸嘴提离液面6( 平稳地把按钮压到第一停点,再把按钮压至第二停点以排出剩余液体;7( 提起微量移液器,然后按吸嘴弹2( 量液操作注意问题:1( 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2( 一定要在允许量程范围内设定容量,千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围,否则会造成损坏。
3( 不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。
4( 不要用大量程的移液器移取小体积样品。
分子生物学实验室需要的仪器配置
(1)培养箱在分子生物学试验中,有很多反应都是在特定温度下进行的,这时就需要一个控温的装置。
例如:用于细菌的平板培养,我们通常设定为37℃于培养箱倒置培养;其他分子生物学实验如酶切等需要25℃,30℃,37℃等条件。
(2)冰箱冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。
分子生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存。
具体来说,不同温度下保存的物品如下:
a. 4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
b.-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。
c.-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液,感受态等的保存。
d.0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。
(3)摇床摇床是实验室常用仪器,一般有常温型和低温型两种。
对于分子生物学实验室,如果能配置低温型摇床,就可以适应不同的实验需求。
例如:用于大肠杆菌,酵母菌等生物工程菌种的振荡培养及蛋白的诱导表达,培养通常为28度和37度,诱导表达需要20-37度;在感受态的制备过程中,需要有18度的温度控制;用于蛋白凝胶的染色脱色时振荡,常温使用;用于大肠杆菌常规转化时振荡复苏,常为37度。
对于控制温度低于室温时,我们需要低温型摇床来控温。
(4)水浴锅水浴锅也是一种控温装置,水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。
例如,用于42度的大肠杆菌转化时的热激反应;用于DNA杂交过程中水浴控温。
(5)烘箱烘箱是用于灭菌和洗涤后的物品烘干。
烘箱有不同的控温范围,用户可以根据实验需求进行选择。
例如,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干;用于RNA方面的实验用具,需要在250℃烤箱中烘干。
(6)纯水装置纯水装置包括蒸馏水器和纯水机。
蒸馏水器的价格便宜,但在造水过程中需要有人值守;纯水机价格高些,但是使用方便,可以储存一定量的纯水。
纯水使用也有不同的级别,一般实验用水需要纯水,用于PCR、DNA测序、酶反应均需要超纯水。
(7)灭菌锅分子生物学所用到的大部分实验用具都应严格消毒灭菌。
包括实验物品、试剂、培养基等。
灭菌锅也有不同大小型号,有些是手动的,有些是全自动的。
用户需要根据自己的需要选购。
(8)天平天平用于精确称量各类试剂。
实验室常用的是电子天平,电子天平按照精度不同有不同的级别。
(9)液体量器液体量器用于精密量取各类液体。
常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。
(10)pH计用于配置试剂时精确测量PH值,从而保证配置的溶液的精确性。
有时也需要利用pH计测定样品溶液的酸碱度。
(11)分光光度计分光光度计通过测定吸光值,从而用于分析样品核酸和蛋白的含量及纯度;同时也可以测定培养菌液的浓度。
(12)离心机离心机有冷冻和常温之分。
主要用于收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。
有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境。
例如在感受态制备过程中必须保证低温环境,所以需要冷冻离心机。
(13)超净工作台分子生物学中凡是涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成,还有感受态制备,转化反应等,都需要无菌的环境。
(14)电泳系统实验室常用的电泳主要是三种:水平电泳用于核酸DNA/RNA的琼脂糖电泳检测;垂直电泳用于蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测;转印电泳用于将蛋白转印到膜上做western检测。
(15)PCR仪PCR仪有不同的类型,分别用于不同的实验。
普通和梯度PCR仪用于基因克隆和基因检测过程中DNA/RNA的扩增。
荧光定量PCR仪用于核酸定量分析、基因表达差异分析、单核苷酸多态性检测、甲基化检测。
原位PCR仪用于鉴定和定位带有靶序列的细胞在组织中的位置。
(16)凝胶成像分析系统/紫外检测仪凝胶成像系统用于对染色后的核酸琼脂糖电泳胶和蛋白聚丙烯酰胺凝胶的观察和拍照,有些可以进行切胶操作。
紫外检测仪可以用于对染色后的核酸琼脂糖电泳胶的观察,胶回收时切胶操作,但是不能连接电脑拍照。
(17)制冰机实验室常用的是雪花制冰机,制冰机一般是按每日制冰量分成不同型号。
分子实验室中制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境,以减少核酸酶或蛋白质酶的水解。
感受态制备也需要长时间冰浴。
(18)磁力搅拌器在配置试剂过程中,有些试剂较难溶解,这时需要借助磁力搅拌器。
磁力搅拌器可以加速溶解固体内容物。
磁力搅拌器一般带加热功能。
(19)生物安全柜分子实验中涉及的试剂和样品很多是有毒的,对于操作人员来说伤害较大。
为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。
(20)微波炉和电炉用于溶液的快速加热,电泳琼脂糖凝胶的加热溶化配制,固体培养基的加热溶化。
(21)液氮罐分子生物学实验中感受态细胞的制备需要液氮处理。
感受态的保存也可以存于
液氮中。
(22)微管移液器微管移液器也有不同型号,是用于准确量取特定体积的溶液。