PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册

蛋白Mar‎k er可分‎为：一、未预染的M‎a rker‎即宽分子量蛋白标准‎、高分子量蛋‎白标准以及‎低分子量蛋‎白标准;二、预染的Ma‎r ker即‎单色预染和‎多色预染。

在weste‎r n blot 过程中，分子量Ma‎r ker就‎像个螺丝钉‎一样没虽然‎是个小细节‎，然而就是这‎样一个小细‎节对实验结‎果有着不可‎忽视的作用‎。

这个 Weste‎r n Blot 参‎照家族的一‎员的作用主‎要是用来指‎示蛋白条带‎所对应的分‎子量大小，只有标准量‎精确无误了‎，实验结果才‎有说服力，除此之外，蛋白标准还‎有表示转移‎成功或者蛋‎白在凝胶上‎的电泳程度‎等等的作用‎，所以选择正‎确的蛋白M‎a rker‎也是wes‎t ern blot实‎验成功的必‎要条件之一‎。

总体来说，蛋白分子量标准可以‎分成未染蛋‎白分子量标‎准、预染蛋白分‎子量标准二‎个级别。

以下是关于‎蛋白分子量‎标准的小叙‎：一. 未染色(pre mixed‎)蛋白分子量标准未染色的蛋‎白分子量标准是最‎简单，也是最准确‎的一种。

由于没有附‎带染料分子‎或者是标记‎分子，所示大小正‎好是蛋白原‎本的大小，是精确判断‎蛋白大小必‎须的。

现在的Ma‎r ker多‎数都选用预‎混和的Ma‎r ker，方便不同大‎小的蛋白比‎较。

预混的Ma‎r ker通‎常有几条带‎加倍浓度作‎为指示，因为混合的‎条带越多，越不好记，谁知道哪条‎是那条!数到眼都花‎了。

所以当看到‎特别浓的那‎几条标志带‎就记得是哪‎里了。

不过要记得‎，小带通常都‎不那么容易‎看清楚的。

在选择上来‎说，当然是选择‎其中至少有‎一条条带和‎自己的目的‎蛋白大小相‎近的最好，越近越好。

如果你的蛋‎白不幸在两‎条跨度较大‎M arke‎r条带之间‎，选别的Ma‎r ker吧‎。

预混的Ma‎r ker 使‎用上不如预‎染Mark‎e r(pre-stain‎e d)好用，因为电泳过‎程中完全看‎不到，要和目标蛋‎白一起等到‎最后染色才‎―开蛊‖，无法对实验‎起预示参照‎作用。

普利莱基因技术有限公司电话************,62027915 Email ：************************Applygen Technologies Inc. DocRev: 201910 Page 1 of 1 预染色蛋白Marker （10KDa--180KDa ） P1103描述：预染色蛋白分子量标准Marker 在蛋白凝胶电泳和转膜时肉眼可见，因而可以动态指示蛋白条带的迁移位置。

预染色蛋白Marker 还可随目的蛋白一起转膜并在膜上清楚显现，因而可以用肉眼直接观察蛋白转膜是否成功。

同时还能为膜的切割提供肉眼可见的指示，方便而安全地把膜分割用于多重抗体检测。

在Western Blot 完成后，根据预染色蛋白Marker 的位置，可以方便地估计目的蛋白条带的分子量大小。

特征和应用：即开即用电泳时预染蛋白Marker 肉眼可见预染蛋白条带可转移到膜上免除凝胶染色，免除膜染色用于估计蛋白条带大小和位置。

适用：8-20% 非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(还原或非还原条件)。

规格：100 µl 、250、500 µl,含62 mM Tris-Cl, pH6.8, 2% SDS,1% beta-巯基乙醇，10% Glycerol ，0.04% Bromphenolblue 。

即开即用，每次上样5µl 。

储存：常温运输，－20 o C 储存，12个月有效，开前离心。

无需过度分装以免造成丢失。

使用方法：1. 室温融化，开管前简短离心收集。

加样前勿热变性。

直接吸取5 l 上样 (5 mm 宽加样孔，1.5 mm 厚mini-gel)。

宽加样孔、长凝胶可酌情多加。

2.预染蛋白进入分离胶后将按条带大小分离，显示为肉眼可见的条带。

3. 转膜时预染蛋白Marker 将转移到膜上，肉眼可见。

注意事项：1.开管前简短离心以避免丢失。

即开即用，用前切勿加热变性。

2. 推荐加样量为：每5 mm 宽加样孔(1.5 mm 厚凝胶)加5-10µl 。

第1页，共2页彩虹130广谱蛋白marker 说明书货号：PR1950规格：20T (100μL)/50T(250μL)/100T(250μL×2)/500T(250μL×10)保存：-20℃保存，有效期至少2年。

产品特点：●三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。

●用量少，节约成本，仅5μL 即可完美呈现（1.5mm ，10孔梳）。

●广谱多带，一支即可满足多种实验需求。

产品简介：本产品包含9种彩色预染的已知分子量标准蛋白，分子量范围为15kD-130kD ，每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/mL 。

预染marker 可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot 的转膜效果。

经SDS-PAGE 凝胶电泳或转移到PVDF 或NC 膜上可得到清晰的9条彩色蛋白条带，其中72kD 条带为红色，25kD 条带为绿色，其余条带为蓝色。

使用说明（仅供参考）：1.本产品是即用型液体，可直接上样电泳。

上样前无需加热，稀释或添加还原剂。

2.上样5μL ，SDS-PAGE 电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。

3.建议分离胶浓度为15%。

电泳示意图说明：注意事项：1.本产品含有较高浓度甘油，常规-20℃保存为液体状态，可直接使用。

若冰箱温度不稳，导致结冰，可适当分装后置于4℃保存，至少稳定6个月。

2.Marker 分离效果与PAGE 胶浓度相关，若分离胶浓度低于15%，25kD 以下条带不易分离，但不影Beijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:响绿色（25KD）及以上条带。

如果目的条带小于25KD，建议分离胶浓度大于或等于15%。

3.转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功，属于正常现象。

相关产品：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P1200SDS-PAGE凝胶制备试剂盒T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液D106010×电泳转移缓冲液PR1920彩虹245广谱蛋白markerPR1700预染次高分子量蛋白markerSW3010膜封闭液DA1010DAB显色试剂盒（20×）PE0010ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)第2页，共2页。

∙o Protocolso Standard Protocolo Manual/Datasheet∙Cat.# Product Size Note3450 Protein Molecular Weight Marker (Low) 200 lanes3451 Protein Molecular Weight Marker (High) 200 lanes3452 Protein Molecular Weight Marker (Broad) 200 lanesDescriptionProtein Molecular Weight Markers are designed for use in SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis. There are 3 kinds of Protein Molecular Weight Marker, Low (Molecular weight range : 14.3 - 97.2 kDa) , High (Molecular weight range : 44.3 - 200 kDa) and Broad (Molecular weight range : 6.5 - 200 kDa).Each protein is proportioned to yield uniform band intensities when perform staining Coomassie Brilliant Blue R-250 after run on SDS polyacrylamide gel.5µl of 20-fold diluted marker is loaded per lane of SDS-PAGE minigel for standard use. In this case, this marker is sufficient for 200 lanes.Electrophoresis ResultLow(Cat.# 3450) High(Cat.# 3451) Broad(Cat.# 3452)15% SDS-PAGE 7.5% SDS-PAGE 5-20% gradientSDS-PAGEStorageProtein Molecular Weight Marker, 1 MDTT: -20°C5×Loading Buffer : Store at room temperature after used.ComponentProtein Molecular Weight Marker 50 µl5×Loading Buffer1 ml1 M DTT 100 µlConcentration12 µg/µl (Cat.# 3450) 10 µg/µl (Cat.# 3451) 18 µg/µl (Cat.# 3452)Form50 mM Tris-HCl, pH6.81 mM EDTA200mMNaCl50% glycerolComponent Protein Low(Cat.# 3450)Protein Source M.W.(Da)Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Carbonic Bovine 29,000anhydraseTrypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300High(Cat.# 3451)Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidaseE. coli116,000Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200SerumAlbuminBovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Broad(Cat.# 3452) < /TR>Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidase E. coli116,000 Phosphorylase B Rabbit muscle 97,200 Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287CarbonicanhydraseBovine 29,000 Trypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300Aprotinin Bovinepancreas6,5005×Loading Buffer200 mM Tris-HCl , pH6.810% SDS 0.05%BPB50% GlycerolNote∙All products are intended to be used for research purpose only. They are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they intended for human use. They shall not to be used products as food, cosmetics, or utensils, etc∙Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.∙If you require licenses for other use, please call at +81 77 543 7247 or contact from our website at ∙Please confirm the content about the license or patent used in this document that relates to the Takara Bio product by clicking the license mark.Moreover, please confirm the "Limited Use Label License" or "patent" concerning the product of another manufacturers or respective owners in their Web site/catalog etc.Page TOP。

超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)使用说明货号：PR1300规格：15T(150µ1)保存：-20℃保存，有效期为一年。

产品简介::超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-20.1kD。

可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。

本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。

使用说明::1.开封后，溶于150µ11×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10µl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。

2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。

凝胶的配置方法:分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 甘油0.48ml0.48ml0.48ml//ddHO0.70ml 1.02ml 1.125ml0.926ml 1.344ml210%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl凝胶制备及染色注意事项:1.先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。

电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。

低分子量蛋白质Marker（14.4kD-97.4kD)使用说明货号：PR1400规格：20T保存：-20℃可保存至少一年。

避免反复冻融，建议分装保存。

产品简介：低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉，分子量范围为14.4kD-97.4kD，每种蛋白的含量约为20-30μg。

经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳后，用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。

可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。

使用说明：1.开封后，溶于400µL体积的1×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂），于沸水浴中加热5分钟，冷却后可根据需要进行小量分装，每管20µL，-20℃贮存，每次取一管使用。

2.如长期贮存后使用，使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。

注意事项：1.建议分离胶浓度12%，浓缩胶浓度5%，制胶时先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。

电泳时，80v电压大约跑1小时后，待指示剂沿到达分离胶上沿时，将电压调至120v，直到电泳结束。

整个电泳过程大约需3-4个小时。

2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液，该试剂具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。

相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P10164×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒P1300-500考马斯亮蓝快速染色液。

蛋白质的提取与检测第一节细胞总蛋白的提取及含量测定【基本原理】蛋白质含量测定法是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。

目前常用的有四种经典的方法，即定氮法、双缩脲法（ Biuret 法）、 Folin- 酚试剂法（ Lowry 法）和紫外吸收法。

另外还有两种近年普遍使用起来的测定法，即考马斯亮蓝法（ Bradford 法）与二辛可宁酸法（ BCA 法）。

值得注意的是，上述方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这几种方法测定有可能得出不同的结果。

每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。

在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。

Lowry 法：蛋白质与碱性铜溶液中的二价铜离子络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与磷钼钨酸反应并产生深蓝色，在 750nm有最大光吸收值。

在一定浓度范围内，反应液颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比 ,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。

Bradford 法：蛋白质与染料考马斯亮蓝 G-250 结合，使得染料最大吸收峰从 465nm变为595nm,溶液的颜色由棕黑色变为蓝色。

在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定 595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

BCA （Bicinchoninic acid ）法：二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（Biuret reaction）并与BCA相互作用产生敏感的颜色反应。

两分子的 BCA 螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。

该水溶性的复合物在 562nm 处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

试剂配制】1. 1.74mg/ml (10mmol/L) PMSF: 0.174g PMSF溶解于 100ml 异丙醇，分装于 1.5ml离心管中，-20C保存。

DNA Marker Ⅱ
使 用 说 明 书
包 装 量：
浓 度：300ng/5μl
储运温度：4℃(长期保存请置于-20℃)
制品说明： DNA Marker Ⅱ 为已含有1×loading Buffer 的DNA 溶液，可取5μl 直接电泳，使用方便。

DNA
Marker Ⅱ 由DNA 片段1200bp 、900bp 、700bp 、500bp 、300bp 、以及100bp 构成，其中每条带DNA 量约为50ng 。

使用注意： 1. 电泳时的加样孔宽度小于6mm 时,每次取5μl 制品电泳便可得到清晰条带。

如果加样孔增
宽,须适当增加Marker 制品的加样量。

2. 对DNA 电泳而言，Agarose 的纯度对DNA 条带的清晰度影响很大。

因此，电泳时应尽量选用质量好的Agarose 。

3．Agarose 电泳时，Agarose 的浓度与DNA 片段的分离性能关系密切。

Agarose 浓度越大，对短片段DNA 分离性能越好；反之，Agarose 浓度越小，越有利于长片段DNA 的分离。

4．电泳时的电压不宜过高，尽量控制在5V/CM 左右；电泳缓冲液尽量是新鲜配制，特别是在做标准图片时。

NOT FOR HUMAN OR DRUG USE
完。