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小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3. 材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术
2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点
实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液
实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。
这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，
这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm³，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗
去血污
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再
将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上
面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易
被染色。
当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加
Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。
4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察
实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色
分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色。
细胞生物学实验报告题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班一、【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
细胞生物学实验线粒体的超活染色与观察一、实验目的1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
三、实验用品（一）材料肝细胞、人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
（三）试剂1．Ringer 溶液氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液）称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
3. 詹纳斯绿B 溶液（应用液）取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。
现用现配。
四、实验操作1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编实验目的：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的形态、数量和功能，以进一步了解线粒体在细胞代谢中的作用。
实验材料：实验步骤：1.提取小白鼠肝细胞：a.将小白鼠宰杀，取出肝脏。
b.肝脏放入含有适量预冷PBS的离心管中，进行冲洗，去除血液。
c.肝脏切成细胞块，加入适量的胰蛋白酶，37℃消化2小时。
d.消化结束后，加入适量的DMEM培养基，通过滤网过筛，得到小白鼠肝细胞悬液。
2.超活染色：a.取适量的小白鼠肝细胞悬液，离心收集细胞沉淀。
b.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除细胞培养基。
c.加入超活染色试剂盒中的线粒体荧光探针，荧光增强剂混合液，混匀，孵育30分钟。
d.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除多余试剂。
3.观察实验：a.将上述细胞沉淀均匀涂抹在显微镜载片上。
b.覆盖显微镜盖玻片，用封口胶固定。
c.将载片放入显微镜镜台上，使用适当放大倍数的镜头观察。
实验结果：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的结果如下：1.形态观察：线粒体呈现椭圆形或长圆形，大小约为1-2微米，分布于细胞质中。
2.数量观察：通过观察细胞中的线粒体数量，可以初步了解细胞的代谢活跃程度。
代谢活跃的细胞通常线粒体数量较多，而代谢不活跃的细胞线粒体数量较少。
3.功能观察：通过观察线粒体荧光的亮度和分布情况，可以初步判断线粒体的功能状态。
荧光亮度较高且均匀分布的细胞表明线粒体功能正常，而荧光亮度较低或不均匀分布的细胞则可能存在线粒体功能缺陷。
实验结论：通过上述实验可以初步了解小白鼠肝细胞中线粒体的形态、数量和功能。
进一步的研究可通过比较不同疾病模型下线粒体的状态来探究线粒体在疾病发生发展中的作用，为研究疾病的治疗和预防提供理论基础。
此外，超活染色技术的应用也有助于深入了解线粒体在细胞代谢中的具体机制。
第1篇一、实验目的1. 了解线粒体在细胞中的分布和形态；2. 掌握线粒体荧光染色的原理和方法；3. 观察线粒体在细胞中的动态变化。
二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，其主要功能是通过氧化磷酸化产生能量。
线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。
三、实验材料1. 细胞样本：小鼠成纤维细胞；2. 荧光染料：线粒体荧光染料（例如，MitoTracker Green FM、Mitochondria Red FM等）；3. 实验器材：荧光显微镜、离心管、移液器、吸管、培养皿、细胞培养箱等。
四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。
2. 线粒体荧光染色：取对数生长期的细胞，用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤2次，弃去上清液。
3. 加入线粒体荧光染料：向细胞中加入适量的线粒体荧光染料，轻轻振荡均匀，使染料充分与细胞结合。
4. 遮光处理：将细胞置于避光环境中，静置30分钟，使染料与线粒体充分结合。
5. 洗涤：用PBS洗涤细胞2次，弃去上清液。
6. 荧光显微镜观察：将细胞置于荧光显微镜下，使用适当波长的激发光和发射光，观察线粒体的荧光。
7. 数据采集：使用图像采集系统采集线粒体的荧光图像，并进行统计分析。
1. 在荧光显微镜下，观察到细胞内的线粒体呈绿色荧光，表明线粒体已被成功染色。
2. 通过图像采集系统，得到线粒体的荧光图像，可以进行线粒体形态、分布、数量的统计分析。
3. 观察线粒体在细胞中的动态变化，发现线粒体在细胞内不断运动，具有一定的流动性。
六、实验讨论1. 线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。
2. 本实验中，使用线粒体荧光染料对小鼠成纤维细胞进行染色，成功观察到细胞内的线粒体。
实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
二、学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
细胞生物学实验线粒体的超活染色与观察一、实验目的1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
三、实验用品（一）材料肝细胞、人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
（三）试剂1．Ringer 溶液氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液）称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
3. 詹纳斯绿B 溶液（应用液）取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。
现用现配。
四、实验操作1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
山东大学实验报告2018年4月16日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午科目：细胞生物学实验题目：小鼠肝细胞及精子线粒体的超活染色及观察学号：201600140055一、目的要求1. 掌握线粒体的超活染色原理及方法2. 观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量和分布3. 观察小鼠精子的形态并尝试寻找畸形精子4. 观察小鼠精子中线粒体的分布二、实验原理1、线粒体线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被称为“power house”。
其直径在0.5到1.0微米左右。
除了溶组织内阿米巴、篮氏贾第鞭毛虫以及几种微孢子虫外，大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。
线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。
除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。
不同生物的不同组织中线粒体数量的差异是巨大的。
有许多细胞拥有多达数千个的线粒体（如肝脏细胞中有1000-2000个线粒体），而一些细胞则只有一个线粒体（如酵母菌细胞的大型分支线粒体）。
大多数哺乳动物的成熟红细胞不具有线粒体。
一般来说，细胞中线粒体数量取决于该细胞的代谢水平，代谢活动越旺盛的细胞线粒体越多。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基部；在精子中分布在鞭毛中区。
在卵母细胞体外培养中，随着细胞逐渐成熟，线粒体会由在细胞周边分布发展成均匀分布。
线粒体在细胞质中能以微管为导轨、由马达蛋白提供动力向功能旺盛的区域迁移。
【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3.材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。
实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
二、学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
SDU 2012级临八 高校 201217232023 2013.11.11- 1 -七、小鼠肝细胞染色体超活染色【实验目的】1. 观察动物活细胞内线粒体的形态、数量和分布2. 学习并掌握细胞的超活染色技术【实验原理】活体染色是利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构，而不影响细胞的生命活动或产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。
活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。
例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。
体外活染又称超活染色，通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
【实验材料】1. 小鼠、显微镜、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管2. Ringer 溶液(氯化钠0.85g)(氯化钾0.25g)(氯化钙 0.03g)(蒸馏水100ml) 1%詹纳斯绿B 溶液（原液） 称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer ，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
【实验步骤】1. 用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。
2. 在干净双凹片的凹穴中, 滴加詹纳绿B 应用液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体表面可充分得到氧化，易被染色。
当组织块边缘被染成蓝绿色即成(—般需染20～30min)。
实验题目】
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
【实验目的】
1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】
1.试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Rin ger试剂
2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等
3. 材料：小鼠
【实验原理】
I. 线粒体
线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10 微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000 个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
II. 超活染色实验原理
超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）
1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某
些特殊结构里，达到易于识别的作用。
2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。
不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。
活体染色剂的选择原则：
1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂
2、具有电化学特性
3、配成稀淡的溶液来使用
4、具有专一性（特异性）
5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。
另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。
【实验步骤】
一、大体流程
、具体操作1用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出小白鼠肝组织，选取边缘较薄的肝组织0.5cm3，放入小烧杯中，用Rin ger液冲洗去血污。
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将上述洗净的肝组织移
入染液中（注意：不可将组织块完全浸没，要是组织块至少三分之一的部分露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色）进行染色，一般染色20—30mi n，以组织块边缘被染成蓝绿色为准。
3、吸去染液，用剪刀将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加Rin ger溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制成悬液。
4、取上述细胞悬液滴片，加上盖玻片，在高倍镜下观察。
【实验结果与分析】
I. 实验结果
理想状态下小鼠肝细胞细胞质中的线粒体应被染成蓝绿色，在高倍镜（10*40 ）下观察到的结果如下：
II . 实验分析
在打开小鼠腹腔后，可找到呈淡红褐色的肝脏，其边缘很薄，呈小三角形状；在取下肝脏的操作中，发现其比较柔软，易被镊子的尖端挑破。
所以剪的时候要注意，既要是所得的组织块体积较小，又不要让其破碎。
在将肝细胞进行染色的过程中，大约20min 左右可看到半浸在染液中的肝组织的边缘部分出现蓝绿色；
取着色部分制成细胞悬液后在40 倍显微镜下观察，可以看到小鼠肝细胞细胞质中的线粒体图1:10*40倍显微镜下观察小鼠肝细胞图2:10*40倍显微镜下观察图
被詹纳斯绿B 染液着色，不过着色程度很浅，为浅绿色，可能是染色时间不够，染色不够充分导致的，也有可能是因为所选用的詹纳斯绿B 染剂的浓度极稀（0.02%），使得染色过程有一定难度。
在显微镜下观察时，可以看到肝细胞的周围有红细胞出现，但是数量并不是很多，不影响观察。
若是在观察中发现有大量的红细胞，可能是在处死小鼠时，放血不够充分，导致大量血液淤留在了肝脏中，使最终视野中红细胞过多；也有可能是取出肝组织块后，没有用Ringer 溶液将血污冲洗干净，使部分血液残留在肝组织块表面，并最终混在了细胞悬液内。
III. 实验讨论
使用肝细胞的缘由：
1.线粒体含量较多，每个肝细胞有1000-2000 个线粒体；
2.长度适合观察，约5卩m
3.肝脏较软，易于破碎，并且适于快速提取，因而利于保持线粒体活性；
【注意事项】
1、用断头法处死小白鼠后，要将血放干净，可以剪开小鼠两侧颈动脉，使血液尽量流出，防止肝脏中储存过多血液，影响观察。
2、打开腹腔后，可以看到肝脏位于左手边，呈红色，但颜色有一些偏淡，不要与右手边血红色的脾脏混淆，切下小鼠的肝脏，备用，剪的时候要注意避开各种血管，防止出血量过多凝结。
3、在从小鼠体内取肝组织块时要尽快，从而保证它具有更高的活性。
4.剪下来的组织块要立即放到Ringer 缓冲液中去洗去其上的血液，因为如果组织块长时间暴露在空气中的话，其上的血液会凝固，使得染色操作变得困难，洗的时候用镊子轻轻的夹住涮洗，这样可使血液快速的被洗脱，但不要太用力，这样会将组织块弄碎。
5、从小鼠肝脏上取组织块的时候，要选取薄边的一端，从此处取2 小块，这一部分血少，易取（另一端太厚，不易取也不易染色，而且剪的时候出血量比较多）。
在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚的地方选取。
6、染色时要使组织块上面部分（至少三分之一）露在染液外，不可完全浸没在染液中，以便使线粒体酶系得到氧化。
7、染色结束后，刚开始加入的Ringer 液的量不能太多，只需要刚盖过肝组织块即可。
如果量太多，则在剪组织块的时候会造成其上浮，从而不易剪碎。
8、观察前要将肝组织充分剪碎，制片时要吸取上悬液，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，而要避免吸取稍大的组织块。
