小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告

实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术
2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点
实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液
实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。

这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，
这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。

选取边缘较薄的肝组织0.5cm³，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗
去血污
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再
将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上
面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易
被染色。

当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加
Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。

4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察
实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色
分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色。

线粒体活染色实验报告实验目的通过活染色技术观察和研究线粒体在细胞中的形态结构、数量和分布情况，进一步了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。

实验原理活染色是一种通过活体显微镜观察染色物在细胞中的分布和变化情况。

线粒体是细胞中重要的能量产生器，通过染色可以更直观地观察和研究线粒体的特征和状态。

本实验使用的线粒体活染色试剂为Mitotracker，它是一种荧光染料，可选择性地标记线粒体。

Mitotracker可以通过细胞膜进入细胞内，随着线粒体的活动而移动，通过检测荧光信号的分布和强度，可以直接观察线粒体在细胞中的运动和分布情况。

实验步骤1. 培养细胞：选择合适的细胞系，将其培养在含有适宜培养液的培养皿中，使细胞处于良好的生长状态。

2. 处理细胞：将培养好的细胞分为两组，一组为实验组，一组为对照组。

实验组细胞加入适量的Mitotracker活染试剂，对照组细胞不添加Mitotracker。

3. 孵育：将培养皿放入恒温培养箱中，以37C恒温孵育2小时，使Mitotracker 能充分进入细胞内，与线粒体结合。

4. 观察：将培养皿取出，用荧光显微镜观察细胞的荧光信号分布，并拍摄图像进行记录。

5. 分析：对实验组和对照组的观察结果进行比较分析，观察线粒体的数量、形态结构和分布情况变化。

实验结果通过荧光显微镜观察，我们发现实验组细胞中线粒体呈现出强烈的红色荧光信号，分布均匀且较为集中。

而对照组细胞中，没有观察到红色荧光信号，线粒体无特别明显的分布。

实验讨论1. 通过荧光显微镜观察线粒体荧光信号的数量、分布和形态结构变化，我们可以初步推测线粒体的活动程度和数量是否发生变化。

2. 通过与对照组细胞的比较，我们可以更准确地判断线粒体的特征和状态是否发生了变化。

3. 本实验结果表明，线粒体活染色技术可以用于研究线粒体在细胞功能和生物学过程中的作用和功能。

实验总结线粒体活染色技术是一种快速、准确的观察线粒体形态和特征的方法。

细胞生物学实验报告题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班一、【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。

2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

第1篇一、实验目的1. 了解小鼠肝细胞的基本形态结构；2. 掌握肝细胞分离、培养及观察的基本方法；3. 通过观察肝细胞在不同条件下的变化，探讨肝细胞的功能特性。

二、实验原理小鼠肝细胞是研究肝脏生理和病理的重要模型。

通过分离、培养和观察肝细胞，可以了解肝细胞的基本形态结构，以及在不同条件下的生理和病理变化。

本实验采用差速离心法分离小鼠肝细胞，并进行体外培养。

三、实验材料1. 小鼠：体重20-25克，雌雄不限；2. 培养基：DMEM培养基；3. 胎牛血清；4. 胰蛋白酶；5. 离心管；6. 离心机；7. 显微镜；8. 其他实验器材。

四、实验方法1. 分离肝细胞：（1）处死小鼠，取出肝脏；（2）将肝脏剪成小块，加入胰蛋白酶，消化肝细胞；（3）将消化后的肝细胞悬液过滤，收集滤液；（4）将滤液以1000 rpm离心5分钟，弃去沉淀；（5）将上清液以2000 rpm离心10分钟，收集沉淀，即为肝细胞。

2. 肝细胞培养：（1）将肝细胞用DMEM培养基洗涤，制成细胞悬液；（2）将细胞悬液以1×10^5个细胞/毫升的密度接种于培养瓶中；（3）置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

3. 肝细胞观察：（1）在显微镜下观察肝细胞的基本形态结构；（2）观察肝细胞在不同条件下的变化，如细胞形态、细胞器分布等。

五、实验结果1. 肝细胞形态：（1）肝细胞呈多边形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富，含有丰富的细胞器；（2）细胞间连接紧密，形成单层细胞。

2. 肝细胞在不同条件下的变化：（1）正常培养条件下，肝细胞生长良好，细胞形态稳定；（2）在缺氧条件下，肝细胞出现肿胀、空泡化等变化；（3）在肝损伤因子作用下，肝细胞出现变性、坏死等变化。

六、实验讨论1. 本实验成功分离和培养小鼠肝细胞，为后续研究肝细胞的功能特性提供了良好的实验材料。

2. 肝细胞在正常培养条件下生长良好，表明肝细胞具有较强的生存能力。

3. 肝细胞在不同条件下的变化表明，肝细胞具有调节自身生理和病理状态的能力。

实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编实验目的：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的形态、数量和功能，以进一步了解线粒体在细胞代谢中的作用。

实验材料：实验步骤：1.提取小白鼠肝细胞：a.将小白鼠宰杀，取出肝脏。

b.肝脏放入含有适量预冷PBS的离心管中，进行冲洗，去除血液。

c.肝脏切成细胞块，加入适量的胰蛋白酶，37℃消化2小时。

d.消化结束后，加入适量的DMEM培养基，通过滤网过筛，得到小白鼠肝细胞悬液。

2.超活染色：a.取适量的小白鼠肝细胞悬液，离心收集细胞沉淀。

b.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除细胞培养基。

c.加入超活染色试剂盒中的线粒体荧光探针，荧光增强剂混合液，混匀，孵育30分钟。

d.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除多余试剂。

3.观察实验：a.将上述细胞沉淀均匀涂抹在显微镜载片上。

b.覆盖显微镜盖玻片，用封口胶固定。

c.将载片放入显微镜镜台上，使用适当放大倍数的镜头观察。

实验结果：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的结果如下：1.形态观察：线粒体呈现椭圆形或长圆形，大小约为1-2微米，分布于细胞质中。

2.数量观察：通过观察细胞中的线粒体数量，可以初步了解细胞的代谢活跃程度。

代谢活跃的细胞通常线粒体数量较多，而代谢不活跃的细胞线粒体数量较少。

3.功能观察：通过观察线粒体荧光的亮度和分布情况，可以初步判断线粒体的功能状态。

荧光亮度较高且均匀分布的细胞表明线粒体功能正常，而荧光亮度较低或不均匀分布的细胞则可能存在线粒体功能缺陷。

实验结论：通过上述实验可以初步了解小白鼠肝细胞中线粒体的形态、数量和功能。

进一步的研究可通过比较不同疾病模型下线粒体的状态来探究线粒体在疾病发生发展中的作用，为研究疾病的治疗和预防提供理论基础。

此外，超活染色技术的应用也有助于深入了解线粒体在细胞代谢中的具体机制。

第1篇一、实验目的1. 了解线粒体在细胞中的分布和形态；2. 掌握线粒体荧光染色的原理和方法；3. 观察线粒体在细胞中的动态变化。

二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，其主要功能是通过氧化磷酸化产生能量。

线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。

三、实验材料1. 细胞样本：小鼠成纤维细胞；2. 荧光染料：线粒体荧光染料（例如，MitoTracker Green FM、Mitochondria Red FM等）；3. 实验器材：荧光显微镜、离心管、移液器、吸管、培养皿、细胞培养箱等。

四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。

2. 线粒体荧光染色：取对数生长期的细胞，用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤2次，弃去上清液。

3. 加入线粒体荧光染料：向细胞中加入适量的线粒体荧光染料，轻轻振荡均匀，使染料充分与细胞结合。

4. 遮光处理：将细胞置于避光环境中，静置30分钟，使染料与线粒体充分结合。

5. 洗涤：用PBS洗涤细胞2次，弃去上清液。

6. 荧光显微镜观察：将细胞置于荧光显微镜下，使用适当波长的激发光和发射光，观察线粒体的荧光。

7. 数据采集：使用图像采集系统采集线粒体的荧光图像，并进行统计分析。

1. 在荧光显微镜下，观察到细胞内的线粒体呈绿色荧光，表明线粒体已被成功染色。

2. 通过图像采集系统，得到线粒体的荧光图像，可以进行线粒体形态、分布、数量的统计分析。

3. 观察线粒体在细胞中的动态变化，发现线粒体在细胞内不断运动，具有一定的流动性。

六、实验讨论1. 线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。

2. 本实验中，使用线粒体荧光染料对小鼠成纤维细胞进行染色，成功观察到细胞内的线粒体。

姓名系年级2011级临八组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号【实验目的】1、掌握细胞器活体荧光标记技术。

2、观察和了解活细胞内线粒体等的形态与分布特点。

【实验原理】对细胞的结构及功能的研究历来是细胞生物学的主要内容。

活体染色是指使生活有机体的细胞或组织着色但对其又无毒害作用的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的的生命活动。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染和体外活染两类。

体内活染是将胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，使这些特殊结构易于识别。

体外活染又称超活染色，它是将活的动植物的分离出部分细胞或组织小块，用染料溶液浸染。

染料被选择性的固定在活细胞的某种结构上面显色。

随着细胞生物学的实验研究技术发展，对细胞的研究正经历着从简单到复杂，静态到动态，从单维度到多维度的发展。

其中，细胞器的活体荧光标记技术是现代细胞生物学研究常用的重要试验技术。

这种技术可以从分子水平上动态的研究活细胞中的各种生理活动，极大地增强了人们对细胞的认识能力。

这种技术能够用来分析细胞的信号转导、物质运输、能量代谢和膜电位的变化等。

现在。

已经有许多细胞器的特异的商业化荧光染料。

本节课所需的线粒体特异活体染色剂是詹纳斯绿B（Janus green B）。

由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，是该染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色。

【实验材料】人口腔黏膜上皮细胞、小鼠干细胞、Ringer液、0.02%詹纳斯绿B水溶液【实验步骤】1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的活体染色与观察（1）取干净的的载玻片，滴加两滴0.02%詹纳斯绿B染液。

（2）用干净的牙签在自己的口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放放入载玻片上的染液中，染色10~15敏，盖上盖玻片，用吸水纸吸去周围溢出的染液，在于光学显微镜下观察。

2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色与观察（1）用脊椎脱臼法处死小鼠，至于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块（0.5cm2 ），放入小烧杯中。

山东大学实验报告2018年4月16日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午科目：细胞生物学实验题目：小鼠肝细胞及精子线粒体的超活染色及观察学号：201600140055一、目的要求1. 掌握线粒体的超活染色原理及方法2. 观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量和分布3. 观察小鼠精子的形态并尝试寻找畸形精子4. 观察小鼠精子中线粒体的分布二、实验原理1、线粒体线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被称为“power house”。

其直径在0.5到1.0微米左右。

除了溶组织内阿米巴、篮氏贾第鞭毛虫以及几种微孢子虫外，大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。

线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。

除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。

不同生物的不同组织中线粒体数量的差异是巨大的。

有许多细胞拥有多达数千个的线粒体（如肝脏细胞中有1000-2000个线粒体），而一些细胞则只有一个线粒体（如酵母菌细胞的大型分支线粒体）。

大多数哺乳动物的成熟红细胞不具有线粒体。

一般来说，细胞中线粒体数量取决于该细胞的代谢水平，代谢活动越旺盛的细胞线粒体越多。

线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基部；在精子中分布在鞭毛中区。

在卵母细胞体外培养中，随着细胞逐渐成熟，线粒体会由在细胞周边分布发展成均匀分布。

线粒体在细胞质中能以微管为导轨、由马达蛋白提供动力向功能旺盛的区域迁移。

小鼠脾细胞线粒体的分离与活体染色山东大学实验报告 2014/11/11 姓名:XX 系年级:2XX3级齐鲁医学班学号:20XXXXXXXX 实验题目: 小鼠肝细胞线粒体的活体染色及观察同组者: XXX 小白鼠肝细胞线粒体的活体染色与观察一 (【实验目的】1(观察小白鼠肝细胞内线粒体的形态和结构。

2(学习和掌握细胞的超活染色技术。

二(【实验原理】超活染色实验原理:超活染色也称活体染色，是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

应用:活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活).体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积染两类。

(1在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

(2).体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用,从而使样品着色。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。

活体染色剂选择原则,(1).对细胞无毒性或毒性极小的染料;(2).具有电化学特性;(3).配成稀淡的溶液来使用;(4).一般是以碱性染料最为适用。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

本实验常用活体染色剂——詹纳斯绿B詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一地堆线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原成为无色的色基(即无色状态)。