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清热凉血方中芍药苷、丹皮酚的含量测定
清热凉血方一般为中药配方，其中常含有芍药苷和丹皮酚等成分。
以下介绍两种测定这两种成分含量的方法。
1. HPLC法测定芍药苷含量
步骤：
（1）准备样品：将清热凉血方取样0.5g，加入10mL甲醇超声提取30min，滤过，取滤液1mL加入中性氢氧化钠溶液调pH=7.0±0.05，再加入甲醇定容至10mL，并过0.45μm的膜滤器。
（2）HPLC条件：采用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流
动相甲醇-水（25:75，v/v），检测波长254nm，流速1.0mL/min。
（3）标准曲线：取不同浓度的对照品溶液制备标准曲线。
（4）测定：取不同浓度的对照品溶液和样品溶液，注入HPLC，
分别测定其峰面积，计算出样品中芍药苷的含量。
2. UV分光光度法测定丹皮酚含量
步骤：
（1）准备样品：将清热凉血方取样0.5g，加水100mL，加热煮
沸30min，过滤，取滤液5mL，冷却至室温。
（2）UV分光光度法：以水作为空白，记录丹皮酚在284nm处的
吸光度。
（3）标准曲线：取一定浓度的丹皮酚溶液，制备标准曲线。
（4）测定：用标准曲线计算样品中丹皮酚的含量。
以上方法均需要精确的实验操作和仪器设备，建议由专业的医药
化学实验室完成。
高效液相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚的含量一、实验目的本实验旨在通过高效液相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚的含量，并掌握实验方法和数据处理技能，为药品质量控制提供科学依据。
二、实验仪器和试剂仪器•离心机：TD4A•称量仪：METTLER TOLEDO AE240•超声波清洗机：KQ-250DE•pH计：PHS-3C•磁力搅拌器：MAG-DJ-1B试剂•丹皮酚标准品•甲醇：HPLC纯级•维生素C：化学纯•氢氧化钠：化学纯•硫酸：化学纯•水：去离子水三、实验步骤1. 制备标准曲线将10.0mg的丹皮酚精确称量转移到25mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得浓度为0.4 mg/mL的丹皮酚溶液。
取出不同浓度的丹皮酚溶液，分别用HPLC法检测，绘制出标准曲线。
2. 样品制备取桂枝茯苓胶囊10个，研磨后过筛至80目，取适量的粉末称量，加入50 mL 锥形瓶中，加入甲醇45 mL，超声波溶解30分钟，离心10分钟，取上清液定容，摇匀。
3. 检测样品将样品溶液注入HPLC，设定色谱条件，进行检测。
四、实验结果与分析计算得出丹皮酚在样品中的含量为 0.208%，符合药典规定。
分析结果表明，高效液相色谱法可以准确地测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚的含量。
五、实验注意事项1.实验过程中需注意安全，避免误操作和意外事故。
2.标准品和样品需经过精确称量和配制，避免误差和污染。
3.实验中需严格按照操作步骤进行，不可随意更改和省略。
4.实验结束后，需将仪器和周围环境进行清洗和消毒，并妥善保存使用过的试剂和标准品。
高效液相色谱法对六味地黄丸中丹皮酚的含量测定摘要】目的：探讨高效液相色谱法（HPLC）测定六味地黄丸中的丹皮酚含量。
方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定六味地黄丸中丹皮酚，使丹皮酚同其它成分分离，快速的测定中成药中的丹皮酚中的含量。
结果：高效液相色谱法检测六味地黄丸中,丹皮酚含量和RSD为批号A丹皮酚含量2.85mg/g,RSD1.64%;批号B丹皮酚含量3.15mg/g,RSD1.75%;批号C丹皮酚含量2.96mg/g,RSD2.43%。
结论：高效液相色谱法（HPLC）测定六味地黄丸中丹皮酚的含量，方法快捷，精密度高，可用于药品质量的控制。
【关键词】高效液相色谱；六味地黄丸；丹皮酚；含量【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）32-0297-01六味地黄丸是中国药典收载的品种，处方为熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻，具有滋阴补肾等功能。
用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴[1]。
六味地黄丸中丹皮酚含量是中国药典规定的质量检测指标，检测三种常见六味地黄丸中丹皮酚的含量。
1.材料与仪器1.1 仪器与试剂高效液相色谱仪、分析天平(精度0.0001g、0.00001g)、微量注射器、超声波提取器、具塞锥形瓶、量瓶、移液管等。
试剂为甲醇，丹皮酚对照品，六味地黄丸市售品3种同一厂家的不同批号药品。
1.2 方法与步骤1.2.1对照品溶液制备用分析天平(精度0.00001g)精密称定丹皮酚对照品10mg，称量范围为0.00950～0.01050g，置50ml量瓶中，加入甲醇到刻度，摇匀，用移液管精密量取10mL置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含20μg的溶液，即得。
1.2.2仪器测定条件要求，色谱柱日立胶3010，50cm×φ2.1mm；流动相甲醇；流速1.5ml/min；压力：85kg/cm2；纸速：2.5mm/min；检测波长：274nm；灵敏度：0.08AUFS；理论塔板数：2.1万；温度：室温测定。
丹皮中丹皮酚的测定方法研究许先融（学号：0806503164）中山市五桂山镇广东药学院08中药分析与鉴定1班[528458]摘要：牡丹皮为毛茛科芍药属牡丹的干燥根皮，是具有抗菌消炎作用的常用中草药，其含有多种有效成分。
而丹皮酚是起镇痛消炎、抗菌等作用的主要活性成分。
随着中药现代化的进展，对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。
本文主要对丹皮中丹皮酚的测定方法进行详细综述。
关键词：丹皮丹皮酚测定分析牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia Suff rut ico sa A ndr . 的干燥根皮。
本品为历版《中国药典》收载品种, 具有清热凉血、活血化瘀功能。
丹皮中主要有效成分为丹皮酚, 经药理研究证明具有抗炎、镇痛、解痉等药理作用。
我国牡丹皮产地很多, 但其有效成分丹皮酚的含量有很大差别。
产地对丹皮酚含量的影响《神农本草经》载曰：“土地所出, 真伪陈新, 并各有法。
”说明了产地的重要性。
我国牡丹分布广，资源丰富，其活性成分丹皮酚的含量差异很大。
为了探讨和建立不同产地丹皮药材的质量控制方法和指标，范明等［1］18个省区不同产地的丹皮中丹皮酚含量测定结果显示，其中以云南产（5.94%）牡丹皮含量为最高, 宁夏产（3.83%）次之，而河南、福建产（1.58%）最低，可见产地对药材质量影响较大。
胡世林等［2］对7个产地的丹皮酚含量进行研究，发现安徽铜陵的“凤丹皮”含量最高，各产地平均含量为1.08%～2.51%。
杨洁［3］测定的丹皮酚平均含量在上述范围内，含量最高的为四川产丹皮，其次为安徽产丹皮，福建产丹皮含量最低。
通过研究认为，丹皮质量好坏不应该忽略产地对其有效成分的影响。
所以提供有效的测定方法非常关键。
本文采用各种牡丹皮中丹皮酚的含量测定方法, 为鉴定不同地区的牡丹皮提供依据。
1 丹皮酚提取分离方法1．1 蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。
丹皮酚含量测定综述罗永富（学号： 0906503201 ）广东药学院 09 中药分析与鉴定 2 班摘要：就各种丹皮酚测定方法研究进展进行了综述。
牡丹皮中含有的丹皮酚具有镇痛、消炎、抗菌等作用，对现代医药研究与应用有着重大意义。
随着中药现代化的进展, 对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。
关键词：牡丹丹皮酚含量测定牡丹皮为毛茛科植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr1）的干燥根皮,有清热凉血、活血化瘀的作用。
用于湿热发斑、吐血衄血、夜热早凉, 经闭痛经、痈肿疮毒、跌打伤痛等。
, 其主要有效成分为丹皮酚。
丹皮酚（Paeonal）又名牡丹酚、芍药酚,化学名为“ 22羟基42甲氧基苯乙酮” ⑴，为白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（乙醇），熔点49°C -51 C,气味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。
丹皮酚可随水蒸气蒸馏，且在紫外光区有强烈吸收，在274nm波长处E（1% Icm）为862，利用此性质可用紫外分光光度计进行测定。
现代药理研究证明丹皮酚具有抗炎、镇静、降压、抗氧化、保护心肌细胞及抑制血小板凝集等作用。
丹皮酚的含量高低是作为衡量牡丹皮品质优劣的一种重要指标，其含量的高低直接影响药品的疗效。
目前，丹皮酚的含量测定有高效液相色谱法（HPLC、分光光度法、气相色谱法（GC、薄层扫描法、胶束毛细管电泳法、化学发光法等。
以下是对上述方法的简要介绍。
1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法具有分离能力高、灵敏度高、应用广泛的特点。
杨洁等采用HPLCfe,结果显示丹皮酚在0. 01〜0. 55卩g/ml范围内线性关系良好（r = 0.999 6）,平均回收率99. 87% , RSD为1.46%。
该法简便、快速,重现性好,精度高, 适用于牡丹皮中丹皮酚的定量分析。
高效液相色谱法测定牡丹皮丹皮酚的含量一、目的与要求1.掌握高效液相色谱法测定含量的原理与应用。
2.了解高效液相色谱在中药分析中的应用。
二、实验原理1.理论塔板数和理论塔板高度是色谱柱效的参数，而分离度是色谱的分离参数，是从色谱峰判断相邻二组分在色谱柱中总分离效能的指标，用R表示，均是衡量色谱柱效能的重要参数。
理论塔板数（n）：n=5.54（tR ／W1／2）2=16（tR／W）2理论塔板高度（H）：H= n／L分离度的计算R R=2（tRA - tRB）／1.699（W1／2A+ W1／2B）2.外表一点法三、仪器与试剂1、仪器液相色谱仪（紫外检测器），微量注射器，C18反相色谱柱，移液管（2ml），具塞锥形瓶，电子分析天平，超声提取器2、试剂甲醇（色谱纯），重蒸馏水3、试药牡丹皮药材，丹皮酚对照品四、实验内容与步骤1.色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（45:55）为流动相；检测波长为274nm；流速为1．0 ml/min；理论塔板数按丹皮酚峰计算应该不低于5000，分离度>1．5。
2.对照品溶液的制备去丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
3.供试品溶液的制备取牡丹皮粉末约0.5g。
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml,密塞，称重定量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30min，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，虑过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
4.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μg，注入液相色谱仪，测定。
五、注意事项开机时先打开工作站，排气泡后再连接泵，最后连接检测器，关闭顺序与开机相反。
六、数据处理按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.2%。
中药及其制剂中丹皮酚的含量测定摘要：丹皮酚的含量是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的制剂六味地黄丸等质量控制的重要指标。
本文综述了近年含丹皮酚的中药材及中药制剂测定时的前处理条件和各种测定方法。
关键词：丹皮酚;牡丹皮;徐长卿;药物分析牡丹皮为毛茛科芍药属牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，徐长卿为摩萝科植物徐长卿(Cynanchumpaniculatum(Bge.)kitag.)的根及全草。
两者均是具有抗菌消炎作用的常用中草药，其主要有效成分均是丹皮酚(patpnol)。
在常见的中药制剂六味地黄丸、金匮肾气丸、麦味地黄丸、当归养血丸等十余种中成药处方中均有配伍使用。
丹皮酚含量是评价这些中成药质量的重要定量指标。
中国药典(一九九五年版)规定六味地黄丸中丹皮酚含量是其定量指标之一[1]。
由于中药材及其制剂成分十分复杂，若需要测定其中某一成分，样品的前处理是关键的一步，而处理方法又必须与选定的分析方法相适应。
现将含丹皮酚的中药材及其制剂的样品处理和含量测定方法综述如下。
1、光谱法1.1紫外-可见分光光度法(Ultravioet-VisibleSpectrophotometry，UV)紫外-可见分光光度法具有操作简单、费用较低等优点。
但由于该法基本上没有分离能力，样品处理要求严格，故常被用于一般要求不很严格的测定以及中药材炮制方法、处理条件的比较、制剂工艺选择等方面。
丹皮酚具有一定的挥发性，光谱法中样品处理一般都用水蒸气蒸馏或直接蒸馏法提取，以减少混入杂质，通常蒸馏液稀释后于274nm处测定吸收度。
周玉生等[2]用该法测定了牡丹皮中丹皮酚含量，比较了不同加工方法的丹皮酚的含量：取已加工的牡丹皮样品适量，置蒸馏瓶中，加水约120mL，蒸馏后得馏出液约有95mL，稀释后在274nm测定吸收度。
结果发现，水洗50℃烘干损失率最高，为34.96%;白酒喷淋晾干，损失率最低，为11.19%。
毛黎明等[3]用水蒸汽蒸馏法测定了六味地黄的浓缩丸、口服液、胶囊三类制剂中丹皮酚含量，将试样蒸馏后，收集馏液约450mL，加水稀释，定容后，在270nm处测定吸收度。
结果发现不同制剂含量有明显差别。
周海梅等[4]将样品置烧瓶中，加水后直接蒸馏，收集蒸馏液，稀释后用UV测定，结果与水蒸气蒸馏提取测定无明显差异。
陈文斗[5]利用丹皮酚能与对硝基氯化重氮苯在碳酸钠溶液(pH10.5～11.5)中偶合呈色的原理，测定了制剂中丹皮酚含量。
其方法是将牡丹皮样品在P2O5真空干燥器中干燥至恒重，取粉末100mg加0.2%NaOH溶液振摇，静置过滤，取续滤液适量，加入乙酸钠缓冲液和偶合试剂，反应2min，再加入碳酸钠溶液，反应3min，定容，以溶剂加试剂同样处理后为空白，在480nm处测定吸收度，结果丹皮酚在6.02～30.1μmol/L范围成良好线性关系，丹皮酚回收率达(99.97±0.97)%。
1.2胶束荧光法(MicellarFluorimetry，MCF)胶束荧光法常用十二烷基硫酸钠(SDS)作为胶束试剂，SDS在水溶液中能形成一种亲水基团向外、疏水基团向内的有序排列。
当浓度≥该试剂的临界胶束浓度时，在溶液中形成胶束。
在胶束的胶核里有一个疏水环境，有利于极性较小的丹皮酚的溶解，提高了微环境里丹皮酚的浓度，特别是由于胶束的稳定作用，能提高荧光量子产率，使该方法的灵敏度得到提高。
庞志功等[6]用该法测定了牡丹皮和徐长卿中的丹皮酚含量。
样品用1mol/L的HCl-甲醇溶液浸泡1h后，氯仿提取，提取液浓缩至干，用V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶1溶解定容，取20μL，硅胶薄板点样，展开，刮取丹皮酚斑点，用φ=95%乙醇浸泡洗脱后，取适量，加2mLSDS溶液(1.5%)和水，快速混匀器上振荡5min，再用水定容，于EX275nm，EM550nm处测定荧光强度，丹皮酚在20pg/mL～800ng/mL浓度范围内成线性，r=0.9934，平均回收率94.2%(n=4)，最低检出限5.7pg。
该方法操作简便，灵敏度高，适用于微量丹皮酚的测定。
2、色谱法(chromatography)用于分析丹皮酚的色谱法有GC法、HPLC法、TLC法等，由于色谱法具有较高的分离能力和灵敏的检测能力，最适合于中药材及其制剂中有效成分的定性定量测定。
2.1气相色谱法(Gaschromatography，GC)气相色谱法具有很强的分离能力和很高的灵敏度，只需很少量的样品即可得到满意的结果。
因此是分析成分复杂的中药中痕量成分的有效手段。
为了增加检测灵敏度和选择性，并出于对色谱柱和检测器的保护，GC以及HPLC对中药样品的处理要求也较严格，除水蒸气蒸馏法外，还有多种其它有效的提取方法。
杨昌金等[7]将六味地黄丸粉末1g用V(氯仿)∶V(丙酮)=2∶14mL，室温浸泡1h，超声20min，再加内标溶液(十八烷，2mg/mL丙酮液)1mL，摇匀，静置，取上清液1μL进样。
色谱条件:2m长玻璃柱，填充剂用5%E-301涂布chromasorbw担体(80～100目)而成，柱温185℃，检测器及进样口温度220℃，N2为载气。
结果，丹皮酚含量在4～200ng内线性良好，r=0.9998，平均回收率99.6%，检测下限浓度20ng/mL。
殷霞等[8]用高分辨气相色谱法测定了六味地黄丸中丹皮酚含量，将样品碾碎，置索氏提取器中用乙酸乙酯提取4h，提取液过滤，浓缩至干，残渣用含内标正十六烷的甲醇溶液2mL溶解，离心，取上清液1μL进样。
色谱条件：28m×0.28mmFSOT柱，固定液SE-30，柱温180℃，检测室、气化室温度均320℃，N2为载气，分流进样，分流比1∶93，FID检测。
结果，在2.5～12.5μg/mL 内，线性相关系数r=0.9995，平均回收率100.3%，RSD=1.38%。
郭丽冰等[9]用直接蒸馏-大孔树脂-气相色谱法，测定了徐长卿中丹皮酚含量。
样品粉末经水蒸气蒸馏后，取蒸馏液上大孔树脂DA-201柱，用乙醇洗脱，定容后吸取0.5mL洗脱液，加0.5mL内标(正十七烷乙醇液)，混匀后，取1μL进样。
色谱条件，Hp-1710m×0.53mmI.D.弹性交联石英毛细管柱，程序升温，分离检测，检测器FID，温度220℃，N2为载气，分流进样，分流比1∶5，在3～80ng内，线性相关系数r=0.9997，平均加样回收率99.42%，RSD=2.28%。
段玲等[10]用毛细管气相色谱法，以正十五烷为内标，测定了牡丹皮中丹皮酚含量，样品置100mL恒压滴液漏斗中，用无水乙醇回流提取4h，取提取液1mL加内标50μL，混匀，进样0.1μL。
色谱条件，石英毛细管柱(10m×0.25mmI.D.)，SE-30键合相，FID检测，用三因素二水平正交设计-单纯形组合优化法对柱温、进样室温度、柱前压进行试验，得出最佳条件：柱温130℃，柱前压0.55kg/cm2。
丹皮酚在10～900ng范围内线性相关，r=0.9984，平均回收率99.28%，RSD2.6%，结果与药典法、HPLC 法一致。
房杏春等[11]用直接蒸发-高分辨气相色谱法测定了牡丹皮和六味地黄丸中丹皮酚含量。
取样品粉末(60目)1mg，精密称定，置裂解炉铂舟中，320℃，停留1min，丹皮酚完全蒸出，进入分析柱分析，结果准确稳定，精密度RSD小于4.0%。
色谱条件:固定液SE-30，融熔石英毛细管柱(28m×0.28mmI.D.)，柱温185℃，气化室温度250℃，N2为载气，FID检测。
在2.5～10μg范围内，线性相关系数r=0.9981。
该法操作简便、快速、重现性好、用量少，避免了其它前处理时间长、操作繁琐、成分可能损失、会引进污染等缺点，特别有利于名贵中药分析。
但该法需特殊附属设备裂解炉。
缪海均等[12]用超临界流体萃取法(SFE)对牡丹皮及其成方制剂进行处理，然后用大孔径毛细管柱分离测定丹皮酚含量。
其最佳提取条件是：超临界流体为CO2，温度90℃，压力28mPa，改性剂氯仿0.5mL，动态萃取体积3mL，静态萃取时间5min，在超临界萃取器中萃取。
萃取物以十六烷醇为内标，氯仿定容，取0.5μL进样分析。
气相色谱条件，大孔径交联石英毛细管柱(40m×0.53mmI.D.)，固定液SE-30，程序升温分离分析，100～210℃，20℃/min，气化室温度240℃，FID检测，温度280℃，载气N2。
分析结果，在0.05～0.8μg内，r=0.9999，药材和制剂的平均加样回收率分别是97.8%，100.3%，RSD分别是2.35%和1.89%。
该法利用超临界流体提取中药成分具有一定的选择性，提取效率高、混入杂质较少、可直接进样。
并且大孔径毛细管气相色谱法有较高的总柱效、理想的表面惰性、接近填充柱的负荷量、较长的柱寿命及较快的分析速度等突出优点，非常适用于含复杂组分的中药分析。
2.2高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidchromatography，HPLC)高效液相色谱法具有高分离能力、高灵敏度、应用广泛的特点。
特别是反相高效液相色谱法对于含有多组分混合物的中药及其制剂的分析测定更具特色。
汪海孙等[14]用外标法测定了桅柏地黄丸等九种含有牡丹皮的中成药中丹皮酚的含量。
将样品干燥粉末1g用甲醇浸渍24h，离心，取上清液5μL进样分析。
色谱条件:日立胶3010柱(50cm×2.1mmI.D.)，甲醇为流动相，流速1.5mL/min，UV 检测波长274nm。
结果平均加样回收率100.08%，RSD=0.36%，在0.2～1.0μg内，线性相关，r=0.99992。
丁安伟等[14]测定了丹皮炭中丹皮酚的含量。
取干燥样品粉末15mL，用甲醇10mL浸泡，超声波超声30min，离心，取上清液10μL进样。
色谱条件：PE-PackC18柱(150mm×4.6mmI.D.)，流速0.5mL/min，274nmUV检测。
结果在0.025～0.38μg范围内成良好线性，r=0.9999，平均加样回收率103.4%，RSD=1.31%。
刘放等[15]用外标法测定了牡丹皮中丹皮酚含量。
取过60目筛的样品粉末0.1g用30mL甲醇浸泡超声处理30min，甲醇定容，静置，取上清液微孔滤膜滤过，取10μL进样。
色谱条件：ResolveODS柱(150×4.6mmI.D.)，V(甲醇)∶V(乙酸)∶V(水)=58∶2∶40，流速1mL/min，274nmUV检测。
结果在0.025～。
