肠杆菌科分类与鉴定

一文理清系列：肠杆菌科种类、感染、耐药特点及药敏解读肠杆菌科细菌包括一大群生物性状相似的革兰阴性无芽胞杆菌，其中部分为致病菌，如：沙门菌属、志贺菌属等；而多数为肠道正常菌群，在一定条件下可以致病，故称为条件致病菌。

肠杆菌科细菌多数细菌有周身鞭毛，能运动，个别细菌有荚膜，多数细菌有菌毛。

本科细菌为需氧和兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，各种细菌菌落大小相似，直径2~3μm。

肠杆菌科细菌有42个属，其中与医学相关的常见菌属有：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登斯菌属、哈夫尼亚菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。

2020年，美国临床和实验室标准协会（CLSI）将原来肠杆菌科中的哈夫尼亚菌属、摩根菌属、耶尔森菌属升级为科，和肠杆菌科一起，归类于肠杆菌目。

药敏报告解读临床工作中，肠杆菌科尤以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌最为常见。

今天我们就以大肠埃希菌为例，介绍一下阅读肠杆菌科细菌药敏报告单的注意事项！(一) 概念介绍SDD（剂量依赖性敏感）：部分菌株的头孢吡肟药敏结果报告方式可能既非S（敏感）、R（耐药），亦非I（中介），而是报告为SDD。

此处的SDD是指分离株的敏感性依赖于对患者的用药方案。

介于药物结果在SDD范围内的分离株，为了使血药浓度达到临床疗效，采用给药方案时（较高剂量、增加用药频率或二者皆有）的药物暴露应高于以前常用敏感折点的剂量。

(二) 常规推导1. 氨苄西林测试结果可预测阿莫西林结果。

2. 对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。

然而，某些对四环素中介或耐药菌株可对多西环素、米诺环素或二者敏感。

3. 头孢曲松测试结果可以代表头孢噻肟的敏感性。

4. 当用于治疗大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌引起的单纯尿路感染时，头孢唑啉敏感指示口服头孢菌素敏感，包括头孢克洛、头孢地尼、头孢泊污、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢氨苄和氯碳头孢。

肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。

1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。

1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。

1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。

1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。

血标本不要冷冻。

1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。

4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。

结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。

注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。

（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。

所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。

若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。

4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。

结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。

4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。

4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。

4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。

结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。

阴沟肠杆菌科鉴定实验方法
阴沟肠杆菌科是一类革兰氏阴性杆菌，常见于土壤、水体和动植物体内。

它们具有多样的代谢途径和生理特性，对环境中的有机物质分解和循环有重要作用。

鉴定阴沟肠杆菌科的实验方法主要包括形态学观察、生理生化特性测试和分子生物学鉴定等。

通过形态学观察可以初步判断样品中是否存在阴沟肠杆菌科。

阴沟肠杆菌科的菌落形态多样，常见的形态包括圆形、不规则形、凹陷形等。

菌落表面光滑或粗糙，颜色多为乳白色、灰白色或黄色。

在显微镜下观察，阴沟肠杆菌科的细胞为革兰氏阴性杆状，长度一般为0.5-3微米，直径约为0.2-0.4微米。

生理生化特性测试是鉴定阴沟肠杆菌科的重要方法之一。

阴沟肠杆菌科细菌通常是好氧菌或兼性厌氧菌，能够利用多种碳源进行代谢。

常用的生理生化特性测试包括氧气需求量、温度和pH值的适应性、产酸产气能力等。

阴沟肠杆菌科细菌通常对氧气需求较高，可以在含氧环境中正常生长。

同时，它们对温度和pH值的适应性也较广，能够在较宽的范围内生长繁殖。

分子生物学鉴定是确定阴沟肠杆菌科的确切属种的重要手段。

通过分析菌株的16S rRNA基因序列，可以与数据库中已知的细菌序列进行比对，进而确定菌株的分类地位。

目前，分子生物学鉴定已成为鉴定阴沟肠杆菌科的金标准，具有高度的准确性和可靠性。

鉴定阴沟肠杆菌科的实验方法主要包括形态学观察、生理生化特性测试和分子生物学鉴定。

这些方法结合使用可以对阴沟肠杆菌科进行准确鉴定，为进一步研究其生态学和应用价值提供了基础。

未来，随着科学技术的不断进步，相信对阴沟肠杆菌科的鉴定方法会更加精确和高效。

河生肠杆菌科菌种鉴定一、背景介绍河生肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，包括多种与人和动物健康相关的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。

这些细菌不仅会引起人类和动物的感染，还会对水质和食品安全造成威胁。

因此，对这些细菌进行鉴定非常重要。

二、鉴定方法1. 生化鉴定法：通过观察细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来进行鉴定。

2. 分子生物学鉴定法：利用PCR技术或基因测序分析目标细菌的DNA序列来确定其种属和亚属分类。

三、生化鉴定法1. 常用培养基：(1) MacConkey琼脂培养基：用于筛选革兰氏阴性肠道杆菌，能够区分乳糖发酵阳性和阴性细菌。

(2) Eosin Methylene Blue琼脂培养基：适合于检测大肠杆菌等肠道杆菌，能够区分乳糖发酵强度。

(3) Triple Sugar Iron琼脂培养基：可用于区分肠道杆菌的糖代谢类型，如葡萄糖、乳糖和蔗糖。

2. 常用生化测试：(1) 氧化/发酵试验：通过观察细菌在含糖和底物的培养基上产生气体或酸碱变化来判断其代谢类型。

(2) 非葡萄糖发酵试验：检测细菌对非葡萄糖类底物的代谢能力，如甘油、琼脂和麦芽糖等。

(3) 酶反应试验：检测细菌对不同酶的产生情况，如氧化酶、羟丁酸氧化酶和尿素酶等。

四、分子生物学鉴定法1. PCR技术：(1) 16S rRNA基因PCR：利用通用引物扩增16S rRNA基因片段，进行序列比对来确定目标细菌种属和亚属分类。

(2) 特异性PCR：利用特异性引物扩增目标细菌的DNA片段，进行电泳分离和检测来确定其存在与否。

2. 基因测序：(1) 16S rRNA基因测序：通过对PCR扩增的16S rRNA基因片段进行测序，进行比对和分类鉴定。

(2) 多基因组合测序：通过同时对多个基因进行测序，提高鉴定准确性和可靠性。

五、鉴定结果的判断1. 生化鉴定法：根据细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来判断其种属和亚属分类。