肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件

#43;
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实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
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实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
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实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
✓只有可疑志贺菌试管变为黄色， ✓并且只有可疑志贺菌试管的小试管无 小气泡， ✓所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产 酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。
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实验结果
可疑菌落 B3 B4 B5 B6
肠杆菌科细菌初步鉴定结果记录 表
EMB
双糖铁生长现象
略
K/A,H2S -/+
略
K/A,H2S-
略
A/A,H2S-
肠杆菌科细菌的鉴定
主讲人：
小组成员：
1
目录
实验目的及背景 实验方法 实验结果 实验结论
2
实验目的及意义
实验背景
肠杆科细菌是一大群生 物学性状非常相似的革兰氏 阴性杆菌，它们的酶十分活 跃，能分解多种糖和醇类。 因此肠杆菌科细菌鉴定主要 依靠生化反应和血清学反应。
而本实验中已得知所给 的混合菌种中含有大肠杆菌、 志贺菌和沙门菌三种。可依 靠生化反应鉴定大肠杆菌， 血清学鉴定区分志贺菌和沙 门菌。
实验目的
通过对三种肠杆菌科细 菌的鉴定实验，全面的 熟悉细菌常规鉴定程序 和方法，初步掌握细菌 鉴定实验操作技能，学 会正确观察记录实验结 果以及分析归纳实验资 料，得出正确的鉴定结 论并撰写合格的细菌鉴 定实验报告。
3
实验方法
肠杆菌混合液（老师提供）
实
伊红亚甲蓝琼脂平板培养基
验 材
双糖含铁培养基
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
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❖萄发酵管——葡萄糖
实验结果
三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、沙 门杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。
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实验结果
❖萄发酵管——蔗糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
层的颜色变化）
5
实验结果
❖EMB培养基肠杆菌分离培养
可疑的志贺菌和沙门菌 (光滑无色透明）
可疑大肠杆菌 （紫黑色且在亮光下可有绿色金属光泽）
6
❖双糖铁琼脂斜面培养
实验结果
疑沙 疑志 疑大 疑沙 门菌1 贺菌 肠菌 门菌2
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实验结果
❖对疑志贺菌（B4）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
8
实验结果
❖对疑沙门菌（B3）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
9
实验结果
❖动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。
可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 可可 肠 疑疑 杆 沙志 菌 门贺
菌菌
10
实验结果
❖生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、可 疑沙门杆菌。
✓试管均呈原来的蓝色， ✓并且小试管均有无小气泡， ✓所以三种可疑菌的蔗糖发酵为阴性。
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实验结果
❖萄发酵管——麦芽糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
从左至右： 大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌 为阴性
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实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
12
实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
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实验结果
❖生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
盐
判断 判断
利
血清 血清
用
- +-
+
- -+
-
- +-
-
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
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实验结论
➢根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。
➢经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
➢B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
➢分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。
➢根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。
➢经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。