肠杆菌科细菌鉴定
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肠杆菌科的鉴定1、标本要求:1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液:病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内,切勿唾液送检。
1.3 尿液:病人留取12h尿液,送检。
1.4 粪便:病人留取粪便5 10g,送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液:用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本:干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理:4.1 硝酸盐还原试验:方法:将待检菌接种硝酸盐培养基中,孵育过夜,加入等量A、B液1~3滴,观察结果。
结果:红色为“+”,即还原硝酸盐。
注意点:(1).培养基不应含亚硝酸盐,以避免假阳性。
(2).某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强,还原硝酸盐为亚硝酸盐后,进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮,造成假阴性。
所以,观察结果时,如无红色出现,应加少量锌粉,仍无色,说明亚硝酸盐进一步分解,硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色,说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐,而待检菌无还原硝酸盐的能力,即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法:将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中,孵育过夜,加甲基红试剂1~2滴,观察结果。
结果:红色为阳性,桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法:将待检菌穿刺接种于尿素培养基中,孵育过夜,观察结果。
结果:培养基变红为尿素阳性,不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法:将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中,孵育过夜,观察结果。
结果:有细菌生长培养基变蓝色为阳性,无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法:取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中,封石腊油,35℃培养过夜,观察结果。
结果:培养基变紫色为阳性,黄色为阴性。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌,可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。
以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验:
1. 硫代硫酸亚铁(TSI)琼脂糖培养基实验:在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株,观察菌落的颜色和气体产生情况。
肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体,导致培养基中
的pH下降,产生黄色酸性反应。
2. 尿素水解试验:将菌株接种到尿素水解培养基上,观察
培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶,将尿素水解为氨和二氧化碳,导致培养基变为粉
红色。
3. 大肠杆菌甲醛试验:将菌株接种到含有甲醛的培养基上,观察培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源,产生酸和气体,导致培养基变
为黄色。
4. 气体产生试验:将菌株接种到气体产生管中,观察管内
气体的产生情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体,如氢气和二氧化碳。
5. 青霉素酶试验:将菌株接种到含有青霉素的培养基上,
观察菌落的形成情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶,使得培养基中的青霉素失活,导致菌落形成。
需要注意的是,肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断,单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。
此外,不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异,因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。
肠杆菌科的鉴定流程嘿,咱今儿就来讲讲肠杆菌科的鉴定流程这档子事儿!你想想啊,肠杆菌科那可是个大家族,里面成员众多。
要把它们准确鉴定出来,那可得有点真本事呢!咱先从观察开始。
就像认识一个新朋友,咱得先瞅瞅他长啥样不是?看看这些细菌的形态呀,是圆圆的,还是长长的,有没有啥特别的形状。
这就好比区分苹果和梨,总得先看看外观嘛。
然后呢,咱得研究研究它们的生化特性。
这就像是了解一个人的性格和爱好一样。
看看它们对不同的物质有啥反应,能不能分解这个,能不能利用那个。
这一步可重要啦,就像判断一个人爱不爱吃甜食,能不能喝酒一样关键。
还有啊,它们的培养特性也不能忽视。
不同的肠杆菌在不同的培养基上会有不同的表现呢。
就好像不同的花在不同的土壤里生长情况不一样。
有些可能长得特别旺盛,有些可能就不太起眼。
再说说抗原特性吧。
这就像是每个人都有自己独特的标志一样,肠杆菌也有它们的“身份证”呢。
通过检测这些抗原,咱就能更准确地知道它们是谁啦。
咱做这些鉴定可不能马虎呀,就跟警察破案似的,得仔细再仔细。
要是弄错了,那可就麻烦啦!你说要是把一个“好人”当成“坏人”给抓了,那多冤枉呀!说到这儿,你是不是觉得挺有意思的?其实呀,鉴定肠杆菌科就像是一场有趣的探秘之旅。
每一个步骤都像是解开一个小谜团,最后把所有的谜团都解开,就能准确地知道这些小家伙们的真面目啦!所以呀,大家可别小瞧了这肠杆菌科的鉴定流程哦。
这可是个技术活,需要我们有耐心,有细心,还要有一双善于发现的眼睛。
只有这样,我们才能在这个细菌的世界里游刃有余,准确地找到我们想要找的那个“它”!这不就是我们搞科研、做实验的乐趣所在嘛!。
河生肠杆菌科菌种鉴定一、背景介绍河生肠杆菌科(Enterobacteriaceae)是一类常见的革兰氏阴性菌,包括多种与人和动物健康相关的致病菌,如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。
这些细菌不仅会引起人类和动物的感染,还会对水质和食品安全造成威胁。
因此,对这些细菌进行鉴定非常重要。
二、鉴定方法1. 生化鉴定法:通过观察细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来进行鉴定。
2. 分子生物学鉴定法:利用PCR技术或基因测序分析目标细菌的DNA序列来确定其种属和亚属分类。
三、生化鉴定法1. 常用培养基:(1) MacConkey琼脂培养基:用于筛选革兰氏阴性肠道杆菌,能够区分乳糖发酵阳性和阴性细菌。
(2) Eosin Methylene Blue琼脂培养基:适合于检测大肠杆菌等肠道杆菌,能够区分乳糖发酵强度。
(3) Triple Sugar Iron琼脂培养基:可用于区分肠道杆菌的糖代谢类型,如葡萄糖、乳糖和蔗糖。
2. 常用生化测试:(1) 氧化/发酵试验:通过观察细菌在含糖和底物的培养基上产生气体或酸碱变化来判断其代谢类型。
(2) 非葡萄糖发酵试验:检测细菌对非葡萄糖类底物的代谢能力,如甘油、琼脂和麦芽糖等。
(3) 酶反应试验:检测细菌对不同酶的产生情况,如氧化酶、羟丁酸氧化酶和尿素酶等。
四、分子生物学鉴定法1. PCR技术:(1) 16S rRNA基因PCR:利用通用引物扩增16S rRNA基因片段,进行序列比对来确定目标细菌种属和亚属分类。
(2) 特异性PCR:利用特异性引物扩增目标细菌的DNA片段,进行电泳分离和检测来确定其存在与否。
2. 基因测序:(1) 16S rRNA基因测序:通过对PCR扩增的16S rRNA基因片段进行测序,进行比对和分类鉴定。
(2) 多基因组合测序:通过同时对多个基因进行测序,提高鉴定准确性和可靠性。
五、鉴定结果的判断1. 生化鉴定法:根据细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来判断其种属和亚属分类。
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时一、目的要求1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性;2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法;3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理;4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现;5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌(E.coli)简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma)。
沙门氏菌(Salmonella),虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群)用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原)再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌(proteus)引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌(yersinia)引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组,每组所需材料:1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种);2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等;5.三糖铁琼脂斜面培养基2管;6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板;7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂;8.沙门氏菌因子血清。
肠杆菌科细菌鉴定1. 引言肠杆菌科(Enterobacteriaceae)是一类常见的革兰氏阴性杆状细菌,广泛存在于自然界中,包括土壤、水体、动物和人体内。
肠杆菌科细菌对人类和动物的健康具有重要影响,它们可以引起多种疾病,包括胃肠道感染、尿路感染、呼吸道感染等。
因此,准确鉴定肠杆菌科细菌对于预防和治疗相关疾病具有重要意义。
本文将介绍肠杆菌科细菌的鉴定方法、常见的鉴定技术以及其在临床和环境领域中的应用。
2. 肠杆菌科细菌的鉴定方法2.1 形态学特征肠杆菌科细菌通常为革兰氏阴性,呈杆状或梭形,并且具有运动性。
它们在营养琼脂平板上形成灰白色至粉红色的圆形或不规则形状的菌落。
2.2 生理生化特性肠杆菌科细菌具有一系列特殊的生理生化特性,可以通过对其代谢产物和酶活性的检测来进行鉴定。
常见的生理生化特性检测包括氧需求、产气、发酵糖类、蛋白质分解等。
2.3 分子生物学方法随着分子生物学技术的发展,PCR和DNA测序等方法在肠杆菌科细菌鉴定中得到了广泛应用。
通过特定基因序列的扩增和比对,可以快速准确地确定细菌的种属和亚种。
3. 肠杆菌科细菌鉴定技术3.1 常规培养法常规培养法是最常用的肠杆菌科细菌鉴定技术之一。
它包括对细菌进行纯培养、观察形态学特征和进行一系列生理生化试验。
这些试验可以通过使用不同培养基和指示剂来检测氧需求、发酵糖类、产气等特征。
3.2 快速鉴定方法为了提高肠杆菌科细菌的鉴定速度和准确性,快速鉴定方法逐渐得到广泛应用。
其中包括基于生化反应的API系统、基于荧光的VITEK 2系统和基于质谱的MALDI-TOF技术。
这些方法可以在短时间内对大量样品进行鉴定,并且具有较高的准确性和可靠性。
3.3 分子生物学方法分子生物学方法在肠杆菌科细菌鉴定中发挥着越来越重要的作用。
通过PCR扩增特定基因序列,如16S rRNA基因,可以快速确定菌株的种属和亚种。
此外,DNA测序技术可以提供更详细的遗传信息,帮助进一步确定细菌的亲缘关系和种类。
肠杆菌科细菌的鉴定小结
●肠杆菌科细菌的生化反应及结果分析●玻片凝集的操作及注意事项
●G染色法操作方法及注意点
观察记录生化反应
●IMViC、KIA、U,所有菌种已接种37℃培养24h以上。
●观察生化反应、作出记录及分析
血清学鉴定-直接玻片凝集
●沙门菌:
用A~F多价O抗确定沙门菌属 用O因子血清分群
用H因子I相血清型定型
伤寒沙门菌:O9Hd
乙型副伤寒沙门菌:O4Hb
●福氏志贺菌:
A、B、C、D多价血清定志贺菌属
按流程分型
不同肠道菌在SS与CB的菌落特征
SS CB
大肠红色中心混浊S型菌落大而混浊蓝色S型菌落产气红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落肺炎红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落伤寒透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
副乙透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
福氏透明微黄S型菌落透明红色S型菌落
变形透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
不同肠道菌的生化特征
I M V C动力U产气乳糖硫化氢
大肠杆菌++--+-++-产气肠杆菌--+++-++-肺炎克雷伯菌--++-+++-伤寒沙门菌-+--+---+乙型副伤寒-+-++-+-+福氏志贺菌-+-------变形杆菌
+/-+-/V-/++++-+(普通/奇异)。