【实验4】体验制备细胞膜的方法活动目标1.体验用哺乳动物红细胞制备细胞膜的基本方法。
2.使用高倍显微镜观察制备细胞膜过程中细胞的变化。
背景资料生物膜的研究发展迅速。
要研究生物膜的组成、结构及功能,首先必须分离出纯净的细胞膜。
分离得到的哺乳动物的红细胞膜,一般称为“血影”。
哺乳动物成熟的红细胞中没有一般真核细胞所具有的细胞核与细胞器,容易用它制备纯净的细胞膜。
此外,哺乳动物的血液也比较容易获得,因而就是研究细胞膜的理想材料。
从哺乳动物的红细胞中分离细胞膜,第一步就是将血液收集在加有抗凝剂的容器内,用低速离心的方法从血液中分离出红细胞,然后用等渗缓冲液反复洗涤,经多次离心,去除血浆。
第二步就是在红细胞中加入低渗缓冲液,由于低渗溶液的作用,大量水分进入细胞,使红细胞胀破而溶血。
第三步就是将溶血的红细胞反复而充分地高速离心、洗涤,去除血红蛋白与其她的细胞内含物,最终获得比较纯净的红细胞膜。
操作指南1.材料新鲜的哺乳动物血液2.用具离心机,离心管,滴管,显微镜,载玻片,盖玻片,吸水纸,小烧杯。
3.试剂柠檬酸钠或肝素(抗凝剂),生理盐水(质量分数为0.9%的NaCl溶液),蒸馏水或清水。
4.操作要点教师在实验前做以下准备工作。
准备一定量的新鲜的哺乳动物血液,如羊血或猪血,在冰箱中静置一昼夜。
用滴管将上清液吸去。
再吸取1 mL的沉淀物,放入离心管中,加入生理盐水2 mL,在2 000 r/min条件下离心5 min。
去除上清液,在沉淀中再加入生理盐水2 mL,再离心一次,去除上清液,留沉淀备用。
以上操作的目的就是洗去血浆成分,避免血浆对血细胞的缓冲作用,从而使红细胞的溶血现象更加明显。
学生的实验操作如下。
(1)取一个5 mL的小烧杯,加入生理盐水2～3 mL。
(2)用滴管在沉淀的下层吸取一小滴血细胞,滴入小烧杯的生理盐水中,以达到稀释红细胞的目的,以免观察时,由于细胞密度太大,影响观察效果。
(3)取另一个滴管,在小烧杯中轻轻搅拌,然后吸取少量的血细胞稀释液,在载玻片的中央滴很小的一滴,加盖玻片。
