总蛋白质提取方法
（1）在研钵中预先加入0.25 g PVPP交联聚维酮和少量石英砂，在电子天平上调零后称取5g 黄皮层组织样品，用液氮研磨至细粉末状，全部转移至50 mL压口离心管中；
（2）依次加入30 mL 12.5% TCA/丙酮、2 mL 1 M DTT和1 mL 100 mM PMSF 苯甲基磺酰氟化物，充分振荡混匀后冰浴振荡提取15 min，然后4℃条件下13,000×g离心15 min（重复2～3次至沉淀基本变成白色）；
（3）弃上清，轻轻磕散沉淀，加入30 mL 经-20℃预冷的0.1 M乙酸铵/甲醇溶液，充分振荡混匀后冰浴低速振荡提取15min，然后4℃条件下13,000×g离心15min；
（4）弃上清，轻轻磕散沉淀，加入30 mL经-20℃预冷的丙酮，充分振荡混匀后冰浴低速振荡提取15 min，然后4℃条件下13,000×g离心15 min；
（5）弃上清，-20℃条件下在吸水纸上倒置30 min除去残留丙酮；
（6）轻轻磕散沉淀，依次加入15 mL 提取Buffer（700 mM蔗糖+ 500 mM Tris-base + 100 mM KCl）、15 mL Tris-饱和酚（pH 7.5）、2 mL 1 M DTT和1 mL 100 mM PMSF，充分振荡混匀后冰浴低速振荡提取30 min，然后4℃条件下5,000×g 离心30 min；
（7）小心吸取上层深色酚相提取液转移至新的50 mL压口离心管中，加入20 mL 0.1 M 乙酸铵/甲醇溶液，轻轻颠倒混匀后-20℃静置3～6 h沉淀蛋白，然后4℃条件下13,000×g离心30 min；
（8）弃上清，加入30 mL预冷甲醇，冰浴中轻摇5 min充分洗涤管壁及沉淀，然后4℃条件下13,000×g离心15 min；
（9）弃上清，加入15 mL预冷丙酮，冰浴中轻摇5 min充分洗涤管壁及沉淀，然后4℃条件下13,000×g离心15 min；
（10）弃上清，用预冷小药勺将所有沉淀轻轻刮下并小心转移至2 mL灭菌离心管中（冰浴），原管用2 mL预冷丙酮快速洗涤后一并转移至2 mL灭菌离心管中，然后4℃条件下13,000×g离心15 min；
（11）弃上清，-20℃条件下在吸水纸上倒置30 min除去残留丙酮；
（12）所得蛋白质干粉可密封后置-70℃保存备用，或加入270 μL样品溶解Buffer （8 M尿素+ 4% CHAPS + 40 mM Tris-Base）、20 μL 1 M DTT和10 μL 100 mM PMSF，室温间隔涡旋溶解30 min，然后15℃条件下13,000×g离心15 min，将上清液转移至1.5 mL灭菌离心管即可；用Bradford法定量后可按每管20 μL分装至灭菌PCR管中，置-70℃保存备用。
提取的总蛋白质样品先用SDS-PAGE初步检测：各取20 μL与等体积SDS-PAGE凝胶上样缓冲液（TIANGEN, Beijing, China）混匀后煮沸5 min，稍离心后取上清液上样，上样量均为20 μL。所用仪器为六一DYCZ-24EN型垂直板电泳仪（Beijing, China），所用蛋白质标准品为ProteinRule rⅡ（Transgen, Beijing, China）。
