UPLCMSMS法同时测定大鼠血浆中安非他酮及其活性代谢产物的浓度

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,l 加内标溶液 ( 0 98 mg L 黄芪甲苷甲醇溶液 ) 20 , l 旋涡 30 s混匀, 加入 0 2 m l甲醇 , 震荡 3 m in, 于 10% 12 000 r m in 离心 10 m in , 取上层溶液 2
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3 个浓度平行 3 份评价。
1 . 10 稳定 性考 察 考 察 积雪 草 苷血 浆 样品 在 - 20 % 冰箱内冷冻保存, 1 w k 内样品稳定性 , 室温 放置 24 h 及反复冻融两次的稳定性。 1 . 11 数据处理 大鼠静脉注射积雪草苷后所得的 血药 浓度时间数据 用 DAS1 0 软 件 ( B eijing Bosom Science & T echno lo gy Co . L td) 进行处理, 选择适宜的 数学模型拟合 , 并进行药代动力学参数计算。 2 结果 2 . 1 色谱行为 本色谱条件下, 积雪草苷和黄芪甲 苷 ( 内标 ) 的保留时间分别为 1 41 m in 和 1 80 m in ( F ig 1)。采用选择性离子检测方式 , 其专属性强, 灵敏度高 , 血浆中杂质不干扰样品的测定。 2 . 2 标准曲线及最低定 量限 ( LLOQ ) 按 ! 2 1∀ 项下 方 法 测 定 的 标 准 曲 线 为 Y ^ = 1 89796 X + 0 012712 , r = 0 9979(权重 W = 1 /CC, n = 5)。积雪 草苷血药浓度在 0 038 ~ 7 6 m g L 范围内线性 关系良好, 相关系数大于 0 997 。最低定量下限为 38 g L 。
57 该
m in 、( 23 44 kg- 1 、( 8 92
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9 60 ) m in 、( 0 19 kg- 1。 结论

1.2 药品与试剂
方法专属性 取大鼠空白血浆 100 μL， 加入 300 μL 甲醇 （不 加内标） ， 其余按 “2.4” 项操作， 获得空白血浆色谱 图 （见图 1A） ； 将一定浓度的标准溶液和内标溶液 加入至空白血浆中， 同上操作获得相应的空白血浆 加药物和内标色谱图 （见图 1B） ； 大鼠给药后血浆 色谱图 （见图 1C） 。其中丹参酮 I、 隐丹参酮、 丹参酮 IIA 和内标非诺贝特的保留时间分别为 8.93、 10.23、 15.50 和 13.41 min。结果表明， 空白血浆中内源性物 质不干扰待测物和内标的测定。
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2013.06.34.fengy.111
第15卷 第6期 2013 年 6 月
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
辽宁中医药大学学报
Vol. 15 No. 6 Jun .，2013
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方药纵横 ・
LC-MS/MS 法测定大鼠血浆中 3 种丹参酮浓度及药动学研究
收稿日期 ： 2012-12-02 基金项目 ： 科技部国际科技合作项目 （2009DFA31070） 作者简介 ： 冯颖 （1987-） ， 女， 河北石家庄人， 2010 级硕士研究生， 研究方向 ： 药物分析。 通讯作者 ： 何俊 （1981-） ， 男， 吉林通化人， 助理研究员， 博士， 研究方向 ： 药物分析。
Objective ： To develop a LC-MS/MS method for the determination of tanshinone I， Abstract ：
cryptotanshinone and tanshinone IIA in rat plasma and to investigate the pharmacokinetics of the three tanshinones. Methods ： The plasma samples were protein precipitated with methanol.After sample preparation， the samples were separated on an Agilent Zorbax SB-C18（2.1 mm×150 mm， 5 μm） column using methanol（containing of 0.1% formic acid） and water（containing of 0.1% formic acid） as mobile phase in gradient elution mode.The mass spectrometer was operated under the positive ion mode with the ESI source and the detection was performed by selected reaction monitoring（SRM） of the transition of m/z 277.1 → 249.1 for tanshinone I， m/z 297.1 → 251.2 for cryptotanshinone， m/z 295.1 → 277.1 for tanshinone IIA and m/z 360.9 → 233.0 for fenofibrate. Results ： The calibration curves for tanshinone I， cryptotanshinone and tanshinone IIA were all linear over the range of 2-100 ng・mL-1.The intra-day and inter-day precisions were within 12.0% and the average recovery was above 89.4%. Conclusion ： The analysis method is sensitive， simple and suitable enough to be applied in the pharmacokinetic study of tanshinone I， cryptotanshinone and tanshinone IIA. LC-MS/MS ； tanshinone I ； cryptotanshinone ； tanshinone IIA ； pharmacokinetics Key words ：

UPLC―MSMS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学研究[摘要] 为了建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸灵敏可靠的分析方法，并对这3种环烯醚萜苷在脑中风大鼠口服醒脑静后的脑药动力学进行研究。

该实验中脑浆样品沉淀蛋白2次；采用Acquity BEH C18柱，流动相为乙腈-1%甲酸-水梯度洗脱，质谱采用电喷雾电离源（ESI），多反应监测（MRM）进行负离子检测，样品分析时间为3.5 min。

结果表明3种环烯醚萜苷成分在大鼠脑中的线性关系良好，提取回收率在99.6%～114.3%，日内、日间精密度和准确度良好，稳定性等均符合要求。

各物质在中风大鼠脑中的t1/2和MRT相似，栀子苷与京尼平龙胆双糖苷有双峰现象，而栀子苷酸为单峰。

表明该方法特异灵敏、准确可靠，可用于醒脑静口服制剂的脑药动力学研究。

[关键词] UPLC-MS/MS；栀子苷；京尼平龙胆双糖苷；栀子苷酸；醒脑静；脑药动力学；脑中风醒脑静由经典名方安宫牛黄处方精简而来（栀子、艾片、麝香和郁金），药理研究表明[1-2]，它有显著的抗脑缺血再灌注损伤、抗氧化损伤、兴奋中枢、解热、抗炎、神经保护等作用，已作为注射剂被广泛应用于脑中风的防治中。

但由于注射剂使用不便及安全性问题[3]，近年来对醒脑静口服制剂的开发研究得到重视[4-5]。

栀子作为醒脑静方中的主要药味，其主要活性成分是以栀子苷为代表的环烯醚萜类物质[6-7]。

对于它们口服后的血药动力学研究较为广泛[8-9]，但考虑到在脑中风的病灶部位在脑部，而且这些水溶性的药效成分不易入脑去发挥药效，因此对其脑部的药动学进行研究很有必要的。

本文采用UPLC-MS-MS对大鼠脑中的3种环烯醚萜类成分栀子苷、京尼平龙胆双糖苷和栀子苷酸的含量进行检测，并研究了三者在脑中风大鼠灌胃醒脑静后的脑药动力学特征，为醒脑静口服制剂的研发和临床应用奠定基础。

1 材料1.1 药品与试剂栀子苷对照品（批号110749-201115）及内标芍药苷（批号110736-201337）购自中国食品药品检定研究院；京尼平龙胆双糖苷对照品（批号121120）与栀子苷酸对照品（批号MUST-12121502）购自成都曼斯特生物科技有限公司；乙腈、甲醇（质谱级，Fisher公司）；甲酸（色谱级，ROE 公司）；超纯水自制；其他试剂均为分析纯；醒脑静口服制剂为实验室自制（栀子提取物-冰片-麝香酮-郁金挥发油38∶18∶3∶1）。

数患者都没有达到最佳的药物暴露.许多研究已指
出,根据 ５
ＧFU 的 药 动 学 性 质 调 整 剂 量 可 通 过 降 低
毒性和提高疗效显著改善临床结局 [１Ｇ２].
１３
司).实验所用去离子 水 由 Re
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(上海和泰仪器有限公司)制得.
２ 方法和结果
体 内 约 ８０％ 的 ５
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